Regulation of MAGE proteins by oncogenes and oncosuppressors.

Las proteínas MAGE (Melanoma Antigen GEnes) pertenecen a una gran familia de proteínas estrechamente relacionadas caracterizadas por un alto grado de homología de secuencia. Los miembros de la subfamilia MAGE-I tienen un patrón de expresión único: se expresan solamente en tejido germinal sano y de manera aberrante en el cáncer. En los últimos 10 años, varios estudios realizados por nuestro grupo y otros grupos se han centrado en caracterizar sus funciones. Se ha demostrado que, a pesar de sus similitudes de secuencia, hay funciones específicas en algunos de sus miembros que afectan diferentes vías de señalización celular. Entre sus acciones más significativas, se demostraron efectos antiapoptóticos, evasión de senescencia y autofagia, y aumento de la supervivencia y de la proliferación celular. Aquí comenzamos a estudiar un nuevo campo emergente: la regulación de la expresión y actividad de las proteínas MAGE. En este contexto, planteamos como hipótesis que las proteínas MAGE podrían estar reguladas por oncogenes y oncosupresores. En particular, nos centramos en el estudio de la regulación de la proteína MageC2, que se detecta en tumores de diferente origen histológico y tiene correlaciones clínicas desfavorables. Había sido determinado que MageC2 colabora con el fenotipo tumoral mediante la regulación de diferentes vías asociadas al cáncer. La asociación de MageC2 con Kap1 puede reprimir la vía supresora de tumores p53 mediante su degradación, mientras que la interacción MageC2/STAT3 activa la vía de señalización STAT oncogénica. En la primera parte de esta Tesis, demostramos que MageC2 inhibe la actividad de p53 a través de mecanismos adicionales que implican la asociación con los represores de la transcripción HDAC1 y HDAC3. Para dilucidar el papel de la proteína MageC2 endógena en la actividad de p53, generamos células de melanoma humano A375 MageC2 KO utilizando la tecnología CRISPR/CAS9. Observamos que en ausencia de MageC2 se incrementó significativamente la actividad de p53, sin afectar su estabilidad. En la segunda parte del trabajo, se realizó una búsqueda racional de posibles proteínas capaces de modular la relación MageC2/p53. Dada su relevancia en el cáncer, se seleccionaron el oncogén Ras (RasV12) y el oncosurpesor p14ARF. Es bien sabido que el oncogén H-RAS/RasV12 estimula permanentemente la proliferación en ausencia de estímulos externos. Si bien su potencial oncogénico es indiscutible, esta ruta todavía se está estudiando principalmente para caracterizar los objetivos río abajo de la activación de Ras. En el caso de p14ARF, se considera un supresor tumoral maestro que responde a la activación de oncogenes induciendo p53. Los experimentos realizados en esta Tesis demuestran que RasV12 estabiliza la proteína MageC2 y la fosforila en treonina dependiendo de la actividad de la ruta MAPK/ERK. Fundamentalmente, usando las células MageC2 KO A375, demostramos que MageC2 endógeno puede formar parte de la vía Ras/MAPK/ERK y que su función es regular negativamente p53. Es decir, que MageC2 puede actuar como un factor regulado por la vía oncogénica de Ras para inhibir la respuesta de p53 a la hiperproliferación. Por el contrario, el oncosupresor p14ARF causa degradación de MageC2 de forma proteosoma dependiente y amplía la capacidad de p14ARF para promover un aumento de la actividad de p53 mediante una vía alternativa e independiente de Mdm2. Sin embargo, la presencia de RasV12 protege fuertemente a MageC2 de la degradación de p14ARF. En conjunto, nuestras observaciones muestran que MageC2 está involucrado en una red principal de señalización oncogénica que vincula la activación de Ras con la regulación negativa de p53.MAGE (Melanoma Antigen GEnes) codify for a large family of closely related proteins characterized by a high degree of sequence homology. MAGE-I subfamily members have a unique expression pattern in which they are normally expressed in adult testes, but they are expressed aberrantly in cancer. In the last 10 years, various studies carried out by ours and others groups have focused on characterizing their functions. It has been shown that despite their sequence similarities, there are specific functions in some of their members affecting different cell signaling pathways. Among their most significant actions, it was demonstrated antiapoptotic effects, senescence and autophagia evasion, and increased survival and proliferation. Here, we have started studying a new emerging field: the regulation of MAGE proteins expression and activity. In this context we hypothesized that MAGE proteins could be regulated by oncogenes and oncosuppressors. Particularly, we focus on the study of the regulation of the tumor-expressed MageC2 protein, which is detected in tumors of different histological origin and correlates with unfavorable clinical parameters. MageC2 has been shown to collaborate with the tumor phenotype by regulating different cancer-associated pathways. The association of MageC2 with Kap1 represses the p53 tumor-suppressor pathway, while MageC2/STAT3 interaction activates the oncogenic STAT signaling pathway. In the first part of this Thesis, we demonstrate that MageC2 inhibits the activity of p53 through additional mechanisms involving the association with the transcription repressors HDAC1 and HDAC3. To elucidate the role of endogenous MageC2 protein on p53 activity, we generated human melanoma A375 MageC2 KO cells using CRISPR/CAS9 technology. We observed that in the absence of MageC2 the activity of p53 was significantly increased, without affecting its stability. In the second part of the work, a rational search for possible proteins able to modulate the MageC2/p53 relationship was performed. Given their relevance on cancer, the Ras (RasV12) oncogene and p14ARF oncosuppressor were selected. It is well-known that H-RAS/RasV12 oncogene permanently stimulates proliferation in the absence of external stimuli. Although its oncogenic potential is undisputed, this route is still being studied mainly to clarify the targets downstream Ras activation. In the case of p14ARF, it is considered a master tumor-suppressor that responds to oncogenes activation through p53 stimulation. The experiments performed in this Thesis demonstrate that RasV12 stabilizes MageC2 and phosphorylates it in threonine depending on the activity of the MAPK/ERK pathway. Interestingly, using the MageC2 KO A375 cells, we show that endogenous MageC2 is a novel target required upon oncogenic RasV12 activation to downregulate p53 oncosuppressor pathway. On the contrary, the oncosuppressor p14ARF causes MageC2-dependent proteasome degradation and enhances p14ARF ability to upregulate p53 through a Mdm2-independent way. However, the presence of RasV12 strongly protects MageC2 from p14ARF degradation. Together, our observations show that MageC2 is involved in a main oncogenic signaling network that links Ras activation to p53 downregulation.Fil: Pascucci, Franco Andrés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Search for gravitational-lensing signatures in the full third observing run of the LIGO-Virgo network

Gravitational lensing by massive objects along the line of sight to the source causes distortions of gravitational wave-signals; such distortions may reveal information about fundamental physics, cosmology and astrophysics. In this work, we have extended the search for lensing signatures to all binary black hole events from the third observing run of the LIGO--Virgo network. We search for repeated signals from strong lensing by 1) performing targeted searches for subthreshold signals, 2) calculating the degree of overlap amongst the intrinsic parameters and sky location of pairs of signals, 3) comparing the similarities of the spectrograms amongst pairs of signals, and 4) performing dual-signal Bayesian analysis that takes into account selection effects and astrophysical knowledge. We also search for distortions to the gravitational waveform caused by 1) frequency-independent phase shifts in strongly lensed images, and 2) frequency-dependent modulation of the amplitude and phase due to point masses. None of these searches yields significant evidence for lensing. Finally, we use the non-detection of gravitational-wave lensing to constrain the lensing rate based on the latest merger-rate estimates and the fraction of dark matter composed of compact objects

Search for eccentric black hole coalescences during the third observing run of LIGO and Virgo

Despite the growing number of confident binary black hole coalescences observed through gravitational waves so far, the astrophysical origin of these binaries remains uncertain. Orbital eccentricity is one of the clearest tracers of binary formation channels. Identifying binary eccentricity, however, remains challenging due to the limited availability of gravitational waveforms that include effects of eccentricity. Here, we present observational results for a waveform-independent search sensitive to eccentric black hole coalescences, covering the third observing run (O3) of the LIGO and Virgo detectors. We identified no new high-significance candidates beyond those that were already identified with searches focusing on quasi-circular binaries. We determine the sensitivity of our search to high-mass (total mass M>70 M⊙) binaries covering eccentricities up to 0.3 at 15 Hz orbital frequency, and use this to compare model predictions to search results. Assuming all detections are indeed quasi-circular, for our fiducial population model, we place an upper limit for the merger rate density of high-mass binaries with eccentricities 0<e≤0.3 at 0.33 Gpc−3 yr−1 at 90\% confidence level

Ultralight vector dark matter search using data from the KAGRA O3GK run

Among the various candidates for dark matter (DM), ultralight vector DM can be probed by laser interferometric gravitational wave detectors through the measurement of oscillating length changes in the arm cavities. In this context, KAGRA has a unique feature due to differing compositions of its mirrors, enhancing the signal of vector DM in the length change in the auxiliary channels. Here we present the result of a search for U(1)B−L gauge boson DM using the KAGRA data from auxiliary length channels during the first joint observation run together with GEO600. By applying our search pipeline, which takes into account the stochastic nature of ultralight DM, upper bounds on the coupling strength between the U(1)B−L gauge boson and ordinary matter are obtained for a range of DM masses. While our constraints are less stringent than those derived from previous experiments, this study demonstrates the applicability of our method to the lower-mass vector DM search, which is made difficult in this measurement by the short observation time compared to the auto-correlation time scale of DM

Regulation of transcription factors by Tumor-Specific MAGE proteins

The tumor specific melanoma antigen gene (MAGE-I) family was initially considered promising and selective targets for immunotherapy. Currently, their functional characterization points to a role in transcription regulation. In this article we focus on MAGE-A proteins as regulators of transcription factors involved in different cancer-related pathways and how this regulation could contribute to tumorigenesis.Fil: Laiseca, Julieta Eva. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Celular y Molecular; ArgentinaFil: Pascucci, Franco Andrés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Celular y Molecular; ArgentinaFil: Monte, Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Celular y Molecular; ArgentinaFil: Ladelfa, Maria Fatima. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica. Laboratorio de Biología Celular y Molecular; Argentin

MAGE-I proteins and cancer-pathways: A bidirectional relationship

Data emerged from the last 20 years of basic research on tumor antigens positioned the type I MAGE (Melanoma Antigen GEnes – I or MAGE-I) family as cancer driver factors. MAGE-I gene expression is mainly restricted to normal reproductive tissues. However, abnormal re-expression in cancer unbalances the cell status towards enhanced oncogenic activity or reduced tumor suppression. Anomalous MAGE-I gene re-expression in cancer is attributed to altered epigenetic-mediated chromatin silencing. Still, emerging data indicate that MAGE-I can be regulated at protein level. Results from different laboratories suggest that after its anomalous re-expression, specific MAGE-I proteins can be regulated by well-known signaling pathways or key cellular processes that finally potentiate the cancer cell phenotype. Thus, MAGE-I proteins both regulate and are regulated by cancer-related pathways. Here, we present an updated review highlighting the recent findings on the regulation of MAGE-I by oncogenic pathways and the potential consequences in the tumor cell behavior.Fil: Pascucci, Franco Andrés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Escalada, Micaela Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Suberbordes, Melisa del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Vidal, Candela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Ladelfa, Maria Fatima. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Monte, Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentin

MageC2 protein is upregulated by oncogenic activation of MAPK pathway and causes impairment of the p53 transactivation function

Normal-to-tumor cell transition is accompanied by changes in gene expression and signal transduction that turns the balance toward cancer-cell phenotype, eluding by different mechanisms, the response of tumor-suppressor genes. Here, we observed that MageC2, a MAGE-I protein able to regulate the p53 tumor-suppressor, is accumulated upon MEK/ERK MAPK activation. Overexpression of H-RasV12 oncogene causes an increase in MageC2 protein that is prevented by pharmacologic inhibition of MEK. Similarly, decrease in MageC2 protein levels is shown in A375 melanoma cells (which harbor B-RafV600E oncogenic mutation) treated with MEK inhibitors. MageC2 protein levels decrease when p14ARF is expressed, causing an Mdm2-independent upregulation of p53 transactivation. However, MageC2 is refractory to p14ARF-driven downregulation when H-RasV12 is co-expressed. Using MageC2 knockout A375 cells generated by CRISPR/CAS9 technology, we demonstrated the relevance of MageC2 protein in reducing p53 transcriptional activity in cells containing hyperactive MEK/ERK signaling. Furthermore, gene expression analysis performed in cancer-genomic databases, supports the correlation of reduced p53 transcriptional activity and high MageC2 expression, in melanoma cells containing Ras or B-Raf driver mutations. Data presented here suggest that MageC2 can be a functional target of the oncogenic MEK/ERK pathway to regulate p53.Fil: Pascucci, Franco Andrés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Ladelfa, Maria Fatima. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Toledo, Maria Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Escalada, Micaela Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Suberbordes, Melisa del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Monte, Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentin

Expression of the tumor-expressed protein MageB2 enhances rRNA transcription

An essential requirement for cells to sustain a high proliferating rate is to be paired with enhanced protein synthesis through the production of ribosomes. For this reason, part of the growth-factor signaling pathways, are devoted to activate ribosome biogenesis. Enhanced production of ribosomes is a hallmark in cancer cells, which is boosted by different mechanisms. Here we report that the nucleolar tumor-protein MageB2, whose expression is associated with cell proliferation, also participates in ribosome biogenesis. Studies carried out in both siRNA-mediated MageB2 silenced cells and CRISPR/CAS9-mediated MageB2 knockout (KO) cells showed that its expression is linked to rRNA transcription increase independently of the cell proliferation status. Mechanistically, MageB2 interacts with phospho-UBF, a protein which causes the recruitment of RNA Pol I pre-initiation complex required for rRNA transcription. In addition, cells expressing MageB2 displays enhanced phospho-UBF occupancy at the rDNA gene promoter. Proteomic studies performed in MageB2 KO cells revealed impairment in ribosomal protein (RPs) content. Functionally, enhancement in rRNA production in MageB2 expressing cells, was directly associated with an increased dynamic in protein synthesis. Altogether our results unveil a novel function for a tumor-expressed protein from the MAGE-I family. Findings reported here suggest that nucleolar MageB2 might play a role in enhancing ribosome biogenesis as part of its repertoire to support cancer cell proliferation.Fil: Ladelfa, Maria Fatima. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Peche, Leticia Yamila. Laboratorio Nazionale del Consorzio Interuniversitario per le Biotecnologie; ItaliaFil: Amato, Gastón Ezequiel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Escalada, Micaela Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Zampieri, Stefania. Centro Di Coordinamento Regionale Per Le Malattie Rare; ItaliaFil: Pascucci, Franco Andrés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; ArgentinaFil: Fernández Benevento, Andrés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Calculo. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Calculo; ArgentinaFil: Fernández Do Porto, Darío Augusto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Calculo. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Calculo; ArgentinaFil: Dardis, Andrea. Centro Di Coordinamento Regionale Per Le Malattie Rare; ItaliaFil: Schneider, Claudio. Università di Udine; ItaliaFil: Monte, Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentin

Functional interaction between co-expressed MAGE-A proteins

9nonenoneLaiseca, Julieta E.; Ladelfa, Marã­a F.; Cotignola, Javier; Peche, Leticia Y.; Pascucci, Franco A.; Castaã±o, Bryan A.; Galigniana, Mario D.; Schneider, Claudio; Monte, MartinLaiseca, Julieta E.; Ladelfa, Marã­a F.; Cotignola, Javier; Peche, Leticia Y.; Pascucci, Franco A.; Castaã±o, Bryan A.; Galigniana, Mario D.; Schneider, Claudio; Monte, Marti