Immunohistochemical study of basement membrane collagen IV in uterine cervix carcinoma

CONTEXT: The integrity of basement membrane (BM) is damaged during the evolution of a benign or potentially malignant lesion into a malignant one, in which it may undergo several degrees of discontinuity as a necessary condition for the invasive process. Immunostaining for collagen IV, which is exclusively found in BM, has been used to evaluate its formation in neoplastic and benign lesions of several organs.OBJECTIVE: To investigate BM continuity pattern in squamous carcinoma in situ (CIS), microinvasive (MIC) and invasive (IC) squamous cell carcinoma of the uterine cervix, and to find out if BM expression could be useful in the diagnosis of early stromal invasion (MIC).DESIGN: Archival material between 1988 and 1993 was studied at the Pathological Anatomy Department - Unicamp.PROCEDURES: The selected cases, previously formalin fixed and paraffin embedded, were reviewed retrospectively by submitting them to immunohistochemical study via the avidin-biotin-peroxidase method using a monoclonal antibody anticollagen IV.RESULTS: In all, 17 cases of CIS, 16 of MIC and 21 of IC were evaluated. All IC cases showed evident BM discontinuity, either focal or diffuse. In the CIS group, a continuous BM pattern was predominant, being focally disrupted in only 2/17 cases (11.8%). The MIC group showed an intermediate pattern, but with a clear tendency to BM discontinuity in 10/16 cases (62.5%). Inflammatory infiltrate, a variable also studied, cannot be considered responsible for BM discontinuity, since there was no statistical correlation between them.CONCLUSION: We conclude that immunostaining for collagen IV may contribute to the diagnosis of stromal invasion by BM discontinuity.CONTEXTO: A integridade da membrana basal (MB) é destruída no processo de evolução de uma lesão benigna ou potencialmente maligna para uma lesão maligna, onde ela pode sofrer vários graus de descontinuidade, como condição necessária para o processo de invasão. A imunocoloração para colágeno IV, que é exclusivamente encontrado na MB, tem sido utilizada para avaliar sua formação em processos benignos e neoplásicos de vários órgãos. OBJETIVO: Investigar o padrão de continuidade da MB no carcinoma in situ (CIS), microinvasivo (CMI) e epidermóide (CE) do colo uterino. Além disso, pretendeu-se verificar em que medida estes padrões poderiam ser úteis no diagnóstico de invasão estromal inicial (CMI). TIPO DE ESTUDO: Foi estudado o material do arquivo de tecidos dos anos de 1988 a 1993 do Departamento de Anatomia Patológica da UNICAMP. PROCEDIMENTOS: Os tecidos eram fixados em formalina e incluídos em parafina e foram revistos retrospectivamente para serem submetidos à reação imuno-histoquímica pelo método da avidina-biotina-peroxidase, com o anticorpo monoclonal anti-colágeno IV. RESULTADOS: Ao todo, foram avaliados 17 casos de CIS, 16 de CMI e 21 de CE. Todos os casos de CE mostraram evidente descontinuidade da MB, quer focal ou difusa. No grupo dos CIS foi observado um padrão contínuo de MB, sendo focalmente lesado em apenas 2/17 casos (11,8%). O grupo dos CMI mostraram um padrão intermediário, com clara tendência à descontinuidade da MB em 10/16 casos (62,5%). O infiltrado inflamatório, variável também estudada, não pode ser responsabilizado pela descontinuidade da MB, já que não houve correlação estatística entre eles. CONCLUSÃO: A imunocoloração para colágeno IV pode contribuir no diagnóstico de invasão estromal, quando houver lesão da MB.1846185

Caracterização morfológica e imunoistoquímica de um modelo de pele humana reconstruída in vitro

CONTEXT AND OBJECTIVE: Over the last few years, different models for human skin equivalent reconstructed in vitro (HSERIV) have been reported for clinical usage and applications in research for the pharmaceutical industry. Before release for routine use as human skin replacements, HSERIV models need to be tested regarding their similarity with in vivo skin, using morphological (architectural) and immunohistochemical (functional) analyses. A model for HSERIV has been developed in our hospital, and our aim here was to further characterize its immunoarchitectural features by comparing them with human skin, before it can be tested for clinical use, e.g. for severe burns or wounds, whenever ancillary methods are not indicated. DESIGN AND SETTING: Experimental laboratory study, in the Skin Cell Culture Laboratory, School of Medical Sciences, Universidade Estadual de Campinas. METHODS: Histological sections were stained with hematoxylin-eosin, Masson's trichrome for collagen fibers, periodic acid-Schiff reagent for basement membrane and glycogen, Weigert-Van Gieson for elastic fibers and Fontana-Masson for melanocytes. Immunohistochemistry was used to localize cytokeratins (broad spectrum of molecular weight, AE1/AE3), high molecular weight cytokeratins (34βE12), low molecular weight cytokeratins (35βH11), cytokeratins 7 and 20, vimentin, S-100 protein (for melanocytic and dendritic cells), CD68 (KP1, histiocytes) and CD34 (QBend, endothelium). RESULTS: Histology revealed satisfactory similarity between HSERIV and in vivo skin. Immunohistochemical analysis on HSERIV demonstrated that the marker pattern was similar to what is generally present in human skin in vivo. CONCLUSION: HSERIV is morphologically and functionally compatible with human skin observed in vivo.CONTEXTO E OBJETIVO: Nos últimos anos, diferentes modelos de pele humana reconstruída in vitro (PHRIV) foram descritos para uso clínico e aplicações em pesquisa na indústria farmacêutica. Antes de serem liberados para uso rotineiro como substitutos de pele humana, os modelos de PHRIV necessitam de testes (estudos) comparativos com a pele humana in vivo, por meio de análises morfológica (arquitetural) e imunoistoquímica (funcional). O objetivo deste trabalho é estudar as características imunoistoquímicas de um modelo de PHRIV desenvolvido em nosso serviço, comparando-as com a pele humana, para que esse modelo de PHRIV possa vir a ser testado clinicamente em casos de queimaduras e ulcerações de pele nos quais métodos tradicionais de tratamento não estejam indicados. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Estudo experimental laboratorial realizado no Laboratório de Cultura de Células da Pele da Faculdade de Ciências Médicas da Universidade Estadual de Campinas (FCM/Unicamp), Campinas, São Paulo, Brasil. MÉTODOS: Cortes histológicos foram corados com hematoxilina-eosina, tricrômio de Masson para fibras colágenas, ácido periódico-reagente de Schiff para membrana basal e glicogênio, Weigert-Van Gieson para fibras elásticas e Fontana-Masson para melanócitos. Estudo imunoistoquímico foi realizado para identificar citoqueratinas de amplo espectro de pesos moleculares (AE1/AE3), citoqueratinas de alto peso molecular (34βE12), citoqueratinas de baixo peso molecular (35βH11), citoqueratinas 7 e 20, vimentina, proteína S-100 (para melanócitos e células dendríticas), CD68 (KP1, histiócitos) e CD34 (QBend, endotélio). RESULTADOS: A histologia revelou similaridade satisfatória entre PHRIV e a pele in vivo. O estudo imunoistoquímico da PHRIV demonstrou padrão semelhante de marcadores usualmente presentes na pele humana in vivo. CONCLUSÃO: A PHRIV estudada é morfológica e funcionalmente compatível com a pele humana observada in vivo.283

Imuno-histoquímica na patologia veterinária diagnóstica: uma revisão crítica

Immunohistochemistry has become a practical and widely used tool for diagnosis in human pathology since the 70's. However, its application in veterinary diagnostic pathology has not been so common, especially due to the lack of specific antibodies. To overcome this drawback, antibodies which present cross reactivity with human and animal antigens have been applied. The purpose of the present study was to test the cross reactivity of some antibodies intended for the human pathology, which may be used in animal tissues, with the help of antigen retrieval and amplification systems. In the present study it was confirmed that many of the antibodies produced for use in human histopathology might be applied in veterinary pathology. Further studies are needed to increase the list of applicability of these antibodies to different animal species. It must be stressed that in this type of study some variables, such as clone of antibody, dilution, antigen retrieval method, and detection system, have to be evaluated.A técnica de imuno-histoquímica é usada na rotina diagnóstica e na pesquisa em patologia humana desde 1970, porém seu uso na patologia veterinária é relativamente recente, principalmente com objetivo diagnóstico. A maior dificuldade no uso da imuno-histoquímica na patologia veterinária tem sido a falta de anticorpos específicos para os tecidos animais. Na falta de anticorpos específicos para as espécies domésticas, a patologia veterinária freqüentemente faz uso de anticorpos que apresentam reatividade cruzada entre antígenos humanos e animais. O objetivo deste trabalho foi testar a reatividade cruzada de diversos anticorpos feitos para uso humano em tecido parafinado de algumas espécies animais, utilizando-se dos novos métodos de recuperação antigênica e amplificação da reação imuno-histoquímica. No presente estudo foi possível confirmar a aplicabilidade de que muitos anticorpos produzidos para diagnóstico imuno-histoquímico em patologia humana podem ser utilizados em patologia veterinária. Novos estudos são necessários a fim de se ampliar a lista de aplicabilidade desses anticorpos em diferentes espécies animais, levando sempre em consideração as variações de clones, diluições, métodos de recuperação antigênica e de revelação.26327

Survival Of Women With Ovarian Carcinomas And Borderline Tumors Is Not Affected By Estrogen And Progesterone Receptor Status.

To examine the patterns of estrogen receptor (ER) and progesterone receptor (PR) expression in borderline ovarian tumors (BOTs) and ovarian carcinomas. We also assessed the disease-free survival (DFS) and overall survival (OS) in women with ovarian carcinoma, in relation to ER and/or PR expression. We examined ER/PR expression in 38 BOTs and 172 ovarian carcinomas removed from patients treated at the State University of Campinas-UNICAMP (Brazil), from 1993 to 2008 and followed for up to 60 months using tissue microarray-based immunohistochemistry. Twenty-eight (73.7%) mucinous and 10 (26.3%) serous BOTs were included. Ovarian carcinomas consisted mainly of 79 (46.0%) serous, 44 (25.5%) mucinous, 17 (9.8%) endometrioid, 10 (5.8%) clear-cell types. There was no significant difference of the ER/PR expression between BOT and ovarian carcinoma (p=0.55 for ER alone, 0.90 for PR alone, and 0.12 for combined expression). The level of ER/PR expression in BOTs was significantly higher in serous than in mucinous tumors (p<0.01). In carcinomas, ER/PR was higher in serous tumors than in mucinous (p<0.01) and clear cell tumors (p=0.02), and higher in endometrioid tumors than in mucinous tumors (p<0.01). DFS was affected neither by the clinical characteristics nor by combined steroid receptor status. OS was found to be significantly worse (p<0.01) only in women with stages II-IV tumors and those with residual disease after surgery (p<0.01). Overall, serous and endometrioid tumors were predominantly ER/PR positive, whereas mucinous and clear-cell tumors were preponderantly ER/PR negative. DFS and OS were not affected by ER/PR expression.24167-7

ErbB-2 expression and hormone receptor status in areas of transition from in situ to invasive ductal breast carcinoma

OBJETIVOS: avaliar a expressão de erbB-2 e dos receptores hormonais para estrógeno e progesterona (RE/RP) nas regiões de transição entre as frações in situ e invasoras de neoplasias ductais da mama (CDIS e CDI, respectivamente). MÉTODOS: oitenta e cinco casos de neoplasias mamárias, contendo regiões contíguas de CDIS e CDI, foram selecionados. Espécimes histológicos das áreas de CDIS e de CDI foram obtidos através da técnica de tissue microarray (TMA). As expressões da erbB-2 e dos RE/RP foram avaliadas por meio de imunoistoquímica convencional. A comparação da expressão da erbB-2 e dos RE/RP nas frações in situ e invasoras da mama foi realizada com emprego do teste de McNemar. Os intervalos de confiança foram determinados em 5% (p=0,05). Foram calculados coeficientes de correlação intraclasse (ICC) para avaliar a concordância na tabulação cruzada da expressão de erbB-2 e RE/RP nas frações de CDIS e CDI. RESULTADOS: a expressão da erbB-2 não diferiu entre as áreas de CDIS e CDI (p=0,38). Comparando caso a caso suas áreas de CDIS e CDI, houve boa concordância na expressão da erbB-2 (coeficiente de correlação intraclasse, ICC=0,64), dos RP (ICC = 0,71) e dos RE (ICC = 0,64). Considerando apenas tumores cujo componente in situ apresentasse áreas de necrose (comedo), o ICC para erbB-2 foi de 0,4, comparado a 0,6 no conjunto completo de casos. Os ICC não diferiram substancialmente daqueles obtidos com o conjunto completo de espécimes em relação aos RE/RP: para RE, ICC=0,7 (versus 0,7 no conjunto completo), e para RP, ICC=0,7 (versus 0,6 no conjunto completo). CONCLUSÕES: nossos achados sugerem que as expressões de erbB-2 e RE/RP não diferem nos componentes contíguos in situ e invasivo em tumores ductais da mama.PURPOSE: to evaluate the expression of erbB-2 and of the estrogen and progesterone (ER/P) hormonal receptors in the transition regions between the in situ and the invasive fractions of ductal breast neoplasia (ISDC and IDC, respectively). METHODS: Eighty-five cases of breast neoplasia, containing contiguous ISDC and IDC areas, were selected. Histological specimens from the ISDC and the IDC areas were obtained through the tissue microarray (TMA) technique. The erbB-2 and the ER/PR expressions were evaluated through conventional immunohistochemistry. The McNemar's test was used for the comparative analysis of the expressions of erbB-2 protein and the ER/PR in the in situ and invasive regions of the tumors. The confidence intervals were set to 5% (p=0.05). Intraclass correlation coefficients (ICC) were calculated to assess the cross-tabulation agreement of the erbB-2 and the ER/PR expression in the ISDC and the IDC areas. RESULTS: the erbB-2 expression has not differed between the ISDC and the IDC areas (p=0.38). Comparing the two areas in each case, there was agreement in the expression of erbB-2 (ICC=0.64), PR (ICC=0.71) and ER (ICC=0.64). Restricting the analysis to tumors with the in situ component harboring necrosis (comedo), the ICC for erbB-2 was 0.4, compared to 0.6 for the whole sample. In this select group, the ICC for PR/ER did not differ substantially from those obtained with the complete dataset: as for the ER, ICC=0.7 (versus 0.7 for the entire sample) and for PR, ICC=0.7 (versus 0.6 for the entire sample). CONCLUSIONS: our findings suggest that the erbB-2 and the ER/PR expressions do not differ in the contiguous in situ and invasive components of breast ductal tumors.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq

ErbB-2 expression and hormone receptor status in areas of transition from in situ to invasive ductal breast carcinoma

OBJETIVOS: avaliar a expressão de erbB-2 e dos receptores hormonais para estrógeno e progesterona (RE/RP) nas regiões de transição entre as frações in situ e invasoras de neoplasias ductais da mama (CDIS e CDI, respectivamente). oitenta e cinco casos de neoplasias mamárias, contendo regiões contíguas de CDIS e CDI, foram selecionados. Espécimes histológicos das áreas de CDIS e de CDI foram obtidos através da técnica de tissue microarray (TMA). As expressões da erbB-2 e dos RE/RP foram avaliadas por meio de imunoistoquímica convencional. A comparação da expressão da erbB-2 e dos RE/RP nas frações in situ e invasoras da mama foi realizada com emprego do teste de McNemar. Os intervalos de confiança foram determinados em 5% (p=0,05). Foram calculados coeficientes de correlação intraclasse (ICC) para avaliar a concordância na tabulação cruzada da expressão de erbB-2 e RE/RP nas frações de CDIS e CDI. a expressão da erbB-2 não diferiu entre as áreas de CDIS e CDI (p=0,38). Comparando caso a caso suas áreas de CDIS e CDI, houve boa concordância na expressão da erbB-2 (coeficiente de correlação intraclasse, ICC=0,64), dos RP (ICC = 0,71) e dos RE (ICC = 0,64). Considerando apenas tumores cujo componente in situ apresentasse áreas de necrose (comedo), o ICC para erbB-2 foi de 0,4, comparado a 0,6 no conjunto completo de casos. Os ICC não diferiram substancialmente daqueles obtidos com o conjunto completo de espécimes em relação aos RE/RP: para RE, ICC=0,7 (versus 0,7 no conjunto completo), e para RP, ICC=0,7 (versus 0,6 no conjunto completo). nossos achados sugerem que as expressões de erbB-2 e RE/RP não diferem nos componentes contíguos in situ e invasivo em tumores ductais da mama319CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO - CNPQFUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESP307988/2008-22008/08536-9to evaluate the expression of erbB-2 and of the estrogen and progesterone (ER/P) hormonal receptors in the transition regions between the in situ and the invasive fractions of ductal breast neoplasia (ISDC and IDC, respectively). Eighty-five cases of breast neoplasia, containing contiguous ISDC and IDC areas, were selected. Histological specimens from the ISDC and the IDC areas were obtained through the tissue microarray (TMA) technique. The erbB-2 and the ER/PR expressions were evaluated through conventional immunohistochemistry. The McNemar's test was used for the comparative analysis of the expressions of erbB-2 protein and the ER/PR in the in situ and invasive regions of the tumors. The confidence intervals were set to 5% (p=0.05). Intraclass correlation coefficients (ICC) were calculated to assess the cross-tabulation agreement of the erbB-2 and the ER/PR expression in the ISDC and the IDC areas. the erbB-2 expression has not differed between the ISDC and the IDC areas (p=0.38). Comparing the two areas in each case, there was agreement in the expression of erbB-2 (ICC=0.64), PR (ICC=0.71) and ER (ICC=0.64). Restricting the analysis to tumors with the in situ component harboring necrosis (comedo), the ICC for erbB-2 was 0.4, compared to 0.6 for the whole sample. In this select group, the ICC for PR/ER did not differ substantially from those obtained with the complete dataset: as for the ER, ICC=0.7 (versus 0.7 for the entire sample) and for PR, ICC=0.7 (versus 0.6 for the entire sample). our findings suggest that the erbB-2 and the ER/PR expressions do not differ in the contiguous in situ and invasive components of breast ductal tumor

Estudo imuno-histoquimico do colagenoIV da membrana basal no carcinoma do colo uterino

Orientadores: Luis Alberto Magna, JoseVassalloTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias MedicasResumo: A integridade da Membrana Basal (MB) está comprometida no processo de evolução de uma lesão benigna ou potencialmente maligna para uma lesão maligna, onde ela pode sofrer graus variados de descontinuidade como condição necessária ao processo de invasão. A imunocoloração para colágeno IV, componente encontrado exclusivamente na MB, tem sido utilizada para avaliar os padrões de apresentação da mesma em neoplasias e lesões benignas de vários órgãos. Com o objetivo de avaliar o padrão de continuidade da MB em Carcinomas "In Situ" (CIS), Microinvasivos (CMI) e Epidermóides Francamente Invasores (CEI) do colo uterino, bem como o de verificar o possível auxílio de tal expressão no diagnóstico de invasão inicial do estroma (CMI), realizou-se aqui um estudo retrospectivo em casos diagnosticados no Departamento de Anatomia Patológica da UNICAMP entre 1988 a 1993. Os casos selecionados, previamente fixados e incluídos em parafina, foram revistos (hematoxilina-eosina) e posteriormente submetidos a estudo imuno-histoquímico pelo método da avidina-biotina-peroxidase com anticorpo monoclonal produzido em camundongo anticolágeno IV (Dakopatts). Os cortes histológicos foram previamente submetidos à digestão por pepsina durante 2 horas a 37°C. Ao final da seleção foram avaliados 20 casos de CIS, 15 de CMI e 24 de CEI. Os casos de CEI mostraram evidente descontinuidade, em grau pequeno ou grande da MB (23/24 casos), mostrando apenas um caso com MB contínua e íntegra. Embora não houvesse significância estatística no padrão de continuidade da MB entre casos de CIS e CMI, houve nítida tendência destes a apresentarem pequenas interrupções (sete de 15 .casos de CMI contra apenas três de 20 casos de CIS). O infiltrado inflamatório, variável também analisada, não deveria ser responsabilizado pelas áreas de descontinuidade da MB, uma vez que não houve correlação estatística entre elas. Em 15 dos 59 casos estudados houve algum grau de discordância, quer à revisão da mortologia ou após avaliação da imunocoloração. Estes casos foram submetidos a um segundo Revisor, sendo que em oito casos a imunocoloração foi importante na decisão diagnóstica. Em outros cinco, porém, a imunocoloração mostrouse falha, pois o processo patológico analisado havia sido desbastado do bloco de parafina. Os resultados do presente trabalho sobre o padrão de continuidade da MB são compatíveis com os dados da literatura. Concluiuse que a imunocoloração para colágeno IV pode ajudar o diagnóstico de invasão inicial do estroma (CMI), contudo, a avaliação deve ser criteriosa e feita em conjunto com os dados de mortologia clássicaAbstract: Basement membrane (BM) integrity is altered when a benign or potentially malignant process changes into malignancy. In this process, it may undergo varying degress of discontinuity, as a prerequisite to tissue invasion. Immunostaining for collagen IV, present in BM solely, has been used to evaluate patterns of BM integrity in neoplasic and benign processes in severa I organs. A survey was performed, within cases diagnosed as cervix in situ (ISC), microinvasive (MIC) and invasive squamous cell carcinoma (SCC), at the Department of Pathology, State University of Campinas (São Paulo, Brazil), from 1988 t9 1993. Our purpose was to evaluate the pattern of continuity of BM amongst these cases, and to verify in which extent it could be helpful in the diagnosis of beginning stroma invasion (MIC). Specimens had been previously formalin fixed, paraffin embedded. Standard stains (H&E) were reviewed and selected blocks were submitted to immunohístochemical processlng, uSlng an avid i n-biotin-peroxi dase technique, with a mouse monoclonal anti-collagen IV antibody (Dakop,atts). Histological sections were previously treated with pepsin, in a two hour incubation period at 37°C. At the end of selection, 20 cases of ISC, 15 MIC and 24 SCC were studied. SCC cases showed evident BM disruption, one case only showing BM linear and continuous. Although no statistical difference could be demonstrated in BM pattern of integríty among ISC and MIC cases, there was a clear tendency of MIC to show small areas of discontinuity (7/15 MIC compared to 3/20 ISC). Presence of inflamatory infiltration did not seem to be responsible for BM discontinuity, because these two variables were not statistically associated. In 15 of the 59 cases studied there was some degree of diagnosis disagreement, either in reviewing H&E, ar after immunohistochemistry. These cases were submitted to a second examiner and in 8 of them immunohistochemistry was an important toei for final diagnosis. In further 5 cases, however, immunohistochemístry failed to demonstrate the lesíon, due to wasting off the paraffin blocks. Our results on pattern of BM continuity in cervix cancer are in agreement with others previously reported. We then conclude that immunohistochemistry for collagen IV may be a helpful tool for diagnosis of beginning stroma invasion (MIC), but evaluatíon must be carefully performed together with traditional morphologica l data (H & E)DoutoradoDoutor em Anatomia Patologic