Étude de la régulation de la ribonucléase III humaine Dicer : analyse de ses partenaires d'interactions protéiques

La ribonucléase III humaine Dicer est responsable de la biosynthèse des microARN et représente un pilier de la régulation génique, et donc de l’homéostasie cellulaire. Les microARN sont de petits éléments régulateurs de 19 à 24 nt qui régulent ~60% des gènes chez l’humain et sont impliqués dans la majorité des processus cellulaires. De ce fait, il n’est pas étonnant qu’il y ait, dans la majorité des cancers, une diminution globale du niveau des microARN et que, dans plusieurs cas, un changement d’expression ou de localisation de la protéine Dicer ait été noté. Malgré le rôle important que joue Dicer dans la cellule, sa régulation n’est pas très bien connue, ni même les complexes de nature protéique au sein duquel il se trouve. Pour pallier à ce manque, nous avons criblé une librairie d’ADN complémentaires par double-hybride chez la levure, ce qui nous a permis de découvrir, et de caractériser, de nouvelles protéines pouvant interagir avec Dicer. Les résultats obtenus démontrent que Dicer est stabilisé par son interaction avec la protéine résidente du réticulum endoplasmique (RE) cytoskeleton-linking endoplasmic réticulum (ER) membrane protein of 63 kDa (CLIMP-63). La protéine Dicer forme un complexe avec CLIMP-63 peu de temps après sa traduction de novo. Les protéines semblent interagir à l’intérieur du RE et mener à l’export de la protéine Dicer hors de la cellule. Durant la mitose, où les niveaux de protéines Dicer sont réduits, Dicer peut être acétylé par l’acétyl-transférase General Control of Amino-acid Synthesis 5 (GCN5), une modification qui semble stabiliser Dicer. La localisation nucléaire de Dicer peut être causée par la protéine Mitogen-activated protein kinase upstream kinase-binding inhibitory protein (MBIP), au cours d’un processus nécessitant une lysine acétylable à la position 301 du signal de localisation nucléaire de MBIP. Finalement, la cytokine (TWEAK) pourrait moduler l’activité de clivage de Dicer via une interaction directe entre les deux protéines. L’utilisation du double-hybride chez la levure a permis de jeter un éclairage nouveau sur les protéines pouvant réguler la fonction et la localisation de l’enzyme Dicer dans les cellules humaines, au-delà de sa simple activité catalytique

Évaluation du comportement géochimique de stériles potentiellement générateurs de drainage neutre contaminé à l'aide de cellules expérimentales in situ

Rejets générés par l'industrie minière -- Les stériles miniers -- Objectifs et contenu du mémoire -- Drainage neutre contaminé (DNC) : Formation et prédiction -- Drainage neutre contaminé -- Prédiction de la qualité du drainage -- Études existantes sur le taux de réaction à différentes échelles d'observation -- Études antérieures sur la prédiction du DNC : Le cas Lac Tio -- Sites à l'étude, description du design et de la construction des cellules expérimentales -- Mise en contexte -- Description du site Lac Tio -- Description des stériles sélectionnés -- Conception des cellules -- Construction -- Instrumentation et méthode du suivi environnemental -- Méthodes et résultats de la caractérisation -- Méthodes de caractérisation des matériaux solides -- Résultats de la caractérisation des matériaux solides -- Synthèse de la caractérisation -- Résultats du suivi des cellules expérimentales In Situ -- Conditons météorologiques débits et bilan hydrique préliminaire -- Résultats du suivi environnemental des eaux de percolation -- Interprétation des résultats et discussion -- Synthèse du suivi environnemental -- Comparaison des taux de lixiviation en cellules expérimentales et en vraie grandeur -- Halde Puyjalon -- Comparaison avec les résultats des essais cinétiques en cellules expérimentales

‘Once You Get the Threshold Concepts the World Is Changed Forever’: The Exploration of Threshold Concepts to Promote Work-ready Occupational Therapy Graduates

In the current higher education environment, there is a growing expectation that universities ensure students graduate with skills and attributes that enable them to be work-ready, particularly within the health and social care disciplines. One curriculum design approach that has been proposed as facilitating this transformation from student to professional is the threshold concepts framework. A recent study identified ten threshold concepts within the discipline of occupational therapy. These were: Understanding the models and theories of occupational therapy; Evidence-based practice; Clinical reasoning; Discipline-specific skills and knowledge; Practising in context; A client-centred approach; Occupation; The occupational therapist role; Reflective practice; and, A holistic approach. This study aimed to explore whether these threshold concepts were taught within an Australian occupational therapy program. Twelve occupational therapy educators participated in focus groups, and five themes emerged from the data. These were: professional identity; time; the impact of the learning environment; explicit versus implicit content and language; and, the value and understanding of the threshold concepts framework. The study found that the integrated use of threshold concepts may make them unique to the discipline. Findings also indicated that using the threshold concepts framework facilitates the transformation from student to occupational therapist. However, students may not acquire all of the threshold concepts prior to graduation. Practice-based learning was considered pivotal for threshold concept acquisition. This study explores the application of the threshold concepts framework, providing insights for educators who are seeking to produce graduates who are well-equipped for employment in complex healthcare environments

SARS-CoV-2 detection by direct rRT-PCR without RNA extraction

Rapid and reliable screening of SARS-CoV-2 is fundamental to assess viral spread and limit the pandemic we are facing. In this study, we compared direct rRT-PCR method (without RNA extraction) using SeeGene AllplexTM 2019-nCoV rRT-PCR with the RealStar® SARS-CoV-2 rRT-PCR kit (Altona Diagnostics). Furthermore, we assessed the impact of swab storage media composition on PCR efficiency. We show that SeeGene and Altona's assays provide similar efficiency. Importantly, we provide evidence that RNA extraction can be successfully bypassed when samples are stored in UTM medium or in molecular water but not when samples are stored in saline solution and in Hanks medium. © 2020 The Author(s

Asymptomatic carriers of COVID-19 in a confined adult community population in Quebec: a cross-sectional study

Several countries have undertaken social distancing measures to stop SARS-CoV-2 spread. Asymptomatic carriers’ prevalence is unknown and would provide essential information on hidden viral circulation. In our cross-sectional study, 1.82% of 330 asymptomatic confined individuals living in the community carried SARS-CoV-2 despite no contact with declared cases, raising concerns about unnoticed transmission

Le modèle des dimensions d’un programme (Gervais, 1998) et le modèle de l’occupation humaine (Kielhofner, 2002) : la théorie au service de la pratique de l’évaluation

Cet article présente deux modèles conceptuels dont la combinaison est utilisée dans le domaine de l’évaluation. Dans un premier temps, les deux modèles seront décrits, leur arrimage expliqué ainsi que les effets de leur utilisation sur l’investissement des différents partenaires concernés. Ensuite, des exemples de démarches évaluatives auxquelles la combinaison des modèles conceptuels a été appliquée seront présentés. Ces exemples mettront en lumière les avantages de l’utilisation de cette combinaison sur le développement, la mise en oeuvre, la pérennité et l’efficacité d’un programme ou d’une démarche évaluative, et ce, indépendamment du contexte d’implantation.This paper presents the combination of two conceptual models used in the field of program evaluation. First, each model will be described. Their connection will be explained as well as the effects of using this combination on the level of involvement of the different actors concerned by an evaluation process. Then, examples of evaluative processes in which the combination of models was used will be presented. These examples will highlight the advantages of using the combined models on the development, the implementation, the sustainability and the effectiveness of a program or of an evaluation process in varied contexts.Este artigo apresenta dois modelos conceptuais cuja combinação é utilizada no domínio da avaliação. Num primeiro momento, serão descritos os dois modelos, explicado o seu peso assim como os efeitos da sua utilização no investimento dos diferentes parceiros envolvidos. Seguidamente, serão apresentados exemplos de procedimentos avaliativos aos quais foi aplicada a combinação dos modelos conceptuais. Estes exemplos clarificarão as vantagens da utilização desta combinação no desenvolvemento, a implementação, a perenidade e a eficácia de um programa ou de um procedimento de avaliação, e isto, independentemente do contexto de implantação

Résistance au virus Y de la pomme de terre (PVY) chez des lignées transgéniques de pomme de terre exprimant un inhibiteur de protéases de type cystéine

La résistance au PVY chez des lignées transgéniques exprimant un inhibiteur de protéase est due en partie à des changements physiologiques occasionnés par l'inhibiteur recombinant exprimé dans la plante. Après clonage et expression hétérologue des protéases de maturation du PVY, nous avons étudié les interactions entre ces protéases et différentes cystatines végétales, démontrant par des tests in vitro que les protéases du PVY ne sont pas sensibles à l'action des inhibiteurs testés. Nous avons ensuite inoculé le virus sur des lignées transgéniques de pomme de terre exprimant la cystatine II du maïs (CCII) et des lignées transgéniques exprimant un inhibiteur de type aspartate, l'inhibiteur de cathepsine D (CDI) de tomate. Ces deux lignées présentent des altérations aux niveaux de leur métabolisme et étaient résistantes au virus PVY. Ces résultats, suggèrent que les inhibiteurs de protéases CCII et CDI exprimés chez les Solanacées entraînent des changements physiologiques significatifs chez la plante hôte induisant indirectement une résistance partielle ou totale au PVY

Regulation of human Dicer by the resident ER membrane protein CLIMP-63

The ribonuclease Dicer plays a central role in the microRNA pathway by catalyzing the formation of microRNAs, which are known to regulate messenger RNA (mRNA) translation. In order to improve our understanding of the molecular context in which Dicer functions and how it is regulated in human cells, we sought to expand its protein interaction network by employing a yeast two-hybrid screening strategy. This approach led to the identification and characterization of cytoskeleton-linking endoplasmic reticulum (ER) membrane protein of 63 kDa (CLIMP-63) as a novel Dicer-interacting protein. CLIMP-63 interacts with Dicer to form a high molecular weight complex, which is electrostatic in nature, is not mediated by RNA and is catalytically active in pre-microRNA processing. CLIMP-63 is required for stabilizing Dicer protein and for optimal regulation of a reporter gene coupled to the 3′ untranslated region of HMGA2 mRNA in human cells. Interacting with a portion of the luminal domain of CLIMP-63 and within minutes of its synthesis, our results suggest that Dicer transits through the ER, is glycosylated and can be secreted by cultured human cells with CLIMP-63. Our findings define CLIMP-63 as a novel protein interactor and regulator of Dicer function, involved in maintaining Dicer protein levels in human cells