Bacteriófagos líticos de Salmonella Enteritidis

Para combatir enfermedades bacterianas es frecuente administrar antibióticos, pero el uso masivo se asocia a la aparición de cepas resistentes. Una alternativa es usar bacteriófagos que se destacan por su especificidad de infección y por alcanzar células blanco de un modo diferente al de los antibióticos.Área: Ciencias Agrícolas, Produccion y Salud Anima

Evaluación de diferentes vías de administración de un fago lítico en gallinas comerciales infectadas experimentalmente con Salmonella gallinarum

El objetivo de este trabajo fue evaluar la eficiencia de un bacteriófago lítico específico como alternativa para el control de SG,administrado por vía oral durante una semana y por vía intramuscular con una y dos dosis, en pollitas de recría infectadas experimentalmente conSG

Informe científico de Beca de Estudio: Ortíz, Xoana Pamela (2014-2015)

* Caracterización molecular del fago: Se probaron distintas técnicas de aislamiento y extracción del genoma viral encontrados en la literatura disponible, y se estudio la naturaleza del mismo. *Parámetros del ciclo lítico: Se determinaron los parámetros del ciclo lítico del fago de Salmonella gallinarum (constante de adsorción, periodo de ecplipse y tamaño de explosión) mediante la cinética de adhesión del mismo a la bacteria huésped usando el recuento de placas de lisis, por el método de doble capa en agar LB, de las alícuotas tomadas a distintos tiempos, para poder determinar el título de fagos en cada tiempo de incubación. *Determinación de la especificidad viral (rango de huésped): Muestras de cepas de distintas serovariedades de Salmonella (tanto Gallinarum; Enteritidis; y muestras de salmonelas móviles incógnitas) obtenidas de granjas de pollos parrilleros y granjas de la zona, se incubaron overnight a 37°C para reactivarlas y tener un cultivo joven para realizar el ensayo. *Tolerancia de los fagos a un medio ácido. *Actividad lítica en medios hostiles: Se realizaron una serie de diluciones (según el prospecto) a partir de una solución madre de desinfectantes de uso común en las granjas avícolas (medios hostiles) para determinar el efecto en la actividad lítica de fagos de Salmonella.en la actividad lítica de fagos de Salmonella. Los desinfectantes usados fueron: yodo, cresolina, amonio, lavandina y CID 20. *Evaluación del comportamiento del fago en una granja en producción: Las aves sometidas a la experiencia fueron gallinas blancas ponedoras, de 80 semanas, que habían pasado la etapa de replume y que tenían una dosis de Bioquina. *Estudio de la actividad de los fagos frente a superficies: El ensayo aún no se realizó porque no se pudieron conseguir las piezas metálicas que generalmente se utilizan en las granjas avícolas para la construcción de las jaulas de las aves

Informe científico de Beca de Estudio: Ortíz, Xoana Pamela (2015-2016)

* Determinación del tamaño del fago: Luego de la extracción del genoma viral por una metodología estándar y la corrida electroforética del mismo junto a un marcador de peso molecular, se determinó que el tamaño del genoma es mayor a las 10 Kpb. *Estudio de la actividad lítica del fago en superficies: Se utilizó el bacteriófago para determinar su actividad lítica frente a superficies contaminadas experimentalmente con una cepa bacteriana de un cultivo de Salmonella Gallinarum (SG) de campo. Se experimentó sobre 6 superficies diferentes, privilegiando las que se encuentran en contacto con las aves, hechas de materiales de polipropileno, PVC, cinc, polietileno de baja densidad y telas revestidas de PVC. *Evaluar la eficacia de la administración del fago lítico en aves de postura: Aun queda por iniciar la evaluación del comportamiento del fago en presencia de antibióticos (ATB) y la vacuna 9R, en gallinas de postura infectadas experimentalmente con SG, a través del aislamiento y recuento de la enterobacteria en el tracto digestivo y órganos reproductivos

Informe científico de Beca Doctoral 3º año: Ortíz, Xoana Pamela (2016-2017)

Controlar y prevenir Salmonella Enteritidis en granjas con aves de postura con la aplicación de bacteriófagos como agentes terapéuticos

Bacteriophages for detection of Salmonella ser. Gallinarum and Salmonella ser. Enteritidis in laying hens

Los sistemas agroalimentarios exigen estrictas normas de bioseguridad. Los bacteriófagos son virus que infectan exclusivamente bacterias; cuando se replican lisan a la célula liberando partículas virales infectivas. A fin de determinar si en el guano la presencia de bacteriófagos que lisan Salmonella ser. Gallinarum (SG) y Salmonella ser. Enteritidis (SE) podrían indicar la presencia simultánea de estas bacterias, se analizaron muestras provenientes de siete granjas de aves ponedoras de los partidos de Luján y Mercedes. De los siete establecimientos, cuatro tenían galpones automáticos y los tres restantes galpones manuales. Para determinar la presencia de Salmonella spp se utilizaron técnicas microbiológicas, mientras que para detectar fagos líticos de SG y SE se empleó la técnica de spot test. En granjas manuales con tres filas de jaulas el muestreo comenzó en la primera línea, a 2 metros donde comienza el cono, a 4 metros de la segunda fila y a 6 metros de la tercera. Con un calador se muestreó en forma de zig-zag. En granjas automáticas, se hizo funcionar las cintas de evacuación de guano tomándose muestras de material a intervalos regulares. Se aisló Salmonella spp en una granja automática y se detectaron fagos de SG en dos granjas manuales y en tres de las automáticas. Mientras que en cuatro de las granjas automáticas y en dos de las manuales se hallaron fagos de SE. Detectar bacteriófagos es una técnica altamente sensible, que contribuiría en la vigilancia sanitaria alertando posibles infecciones, y viable de aplicar en planes de bioseguridad e higiene.Agri-food systems require strict biosecurity standards. Bacteriophages are viruses that exclusively infect bacteria; when they replicate they lyse the cell releasing infective viral particles. In order to determine whether in the guano the presence of bacteriophages that lyse Salmonella ser. Gallinarum (SG) and Salmonella ser. Enteritidis (SE) could indicate the simultaneous presence of these bacteria, samples from seven layer poultry farms from the Luján and Mercedes districts were analyzed. Of the seven establishments, four had automatic farms and the remaining three had manual farms. Microbiological techniques were used to determine the presence of Salmonella spp, while the spot test technique was used to detect SG and SE lytic phages. In manual farms with three rows of cages, sampling began in the first line, 2 meters from where the cone begins, 4 meters from the second row and 6 meters from the third. With a drill hole, samples were collected in a zig-zag pattern. In automatic farms, guano evacuation belts were operated with material samples taken at regular intervals. Salmonella spp was isolated on an automatic farm and SG phages were detected in two manual farms and three of the automatic farms, while in four of the automatic farms and in two of the manual ones SE phages were found. Detecting bacteriophages is a highly sensitive technique, which would contribute to health surveillance alerting possible infections, and feasible to apply in biosafety and hygiene plans.Fil: Ortiz, Xoana Pamela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Luján. Departamento de Ciencias Básicas; ArgentinaFil: Prosdocimo, Florencia Maria. Universidad Nacional de Luján. Departamento de Tecnología; ArgentinaFil: Barrios, Hebe Alicia. Universidad Nacional de Luján. Departamento de Ciencias Básicas; Argentin

Bacteriophages: A tool for the control of Salmonella Enteritidis in commercial layer poultry farms

Los bacteriófagos constituyen una novedad como bactericidas. Un cóctel de bacteriófagos F9 y F15, específicos para Salmonella Enteritidis (SE) y FSG, específico para Salmonella Gallinarum, fue utilizado sobre superficies contaminadas experimentalmente con SE. Quince rectángulos de polipropileno de 330 cm2 y quince trozos de rejas metálicas de 50 cm2, fueron sumergidas en cultivo de 18 h de SE incubadas una hora a 37ºC. Las unidades formadoras de colonia (UFC)/ml de SE fueron determinadas en las dos superficies y sometidas a: Tratamiento (T) 1: 5 materiales fueron rociados con 10e9 unidades formadoras de placa (UFP)/ml de FSG, F9 y F15; T2: 5 materiales fueron rociadas con 10e9 UFP/ml de F9 y FSG; T3: 5 materiales fueron rociadas con solución fisiológica. Los resultados determinaron que T1 disminuyó significativamente la carga bacteriana sobre metal de 4,3 log10 UFC/cm2 a 2,5 ± 0,22 log10 UFC/cm2, mientras que en superficies plásticas redujo la concentración de SE en 1,23 ± 0,26 log10 UFC/cm2 (ANOVA). Se concluye que el uso de bacteriófagos contribuiría al control de SE en producción de huevos.Bacteriophages are a novelty as bactericides. A cocktail of bacteriophages F9 and F15,specific for Salmonella Enteritidis (SE) and FSG,specific for Salmonella Gallinarum, was used on surfaces experimentally contaminated with SE. Fifteen 330 cm2polypropylene rectangles and fifteen 50 cm2pieces of metal grids were immersed in culture for 18 hours of SE incubated for one hour at 37ºC. Colony-forming units (CFU)/ml of SE were determined on the two surfaces and subjected to: Treatment (T) 1: 5 materials were sprayed with 109plaque-forming units (PFU)/ml of FSG, F9 and F15; T2: 5 materials were sprayed with 109PFU/ml of F9 and FSG; T3: 5 materials were sprayed with physiological solution. The results determined that T1 significantly decreased the bacterial load on metal: 4.3 log10CFU/cm2a 1.23 ± 0.22 log10CFU/cm2(ANOVA).The use of bacteriophages would contribute to the control of SE in poultry.Fil: Ortiz, Xoana Pamela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Luján. Departamento de Ciencias Básicas; ArgentinaFil: Anselmo, Ricardo José. Universidad Nacional de Luján. Departamento de Ciencias Básicas; ArgentinaFil: Prosdocimo, Florencia Maria. Universidad Nacional de Luján. Departamento de Tecnología; ArgentinaFil: Viora, Silvia Susana. Universidad Nacional de Luján. Departamento de Ciencias Básicas; ArgentinaFil: de Franceschi, Mauricio Enrique. Universidad Nacional de Luján. Departamento de Tecnología; ArgentinaFil: Barrios, Hebe Alicia. Universidad Nacional de Luján. Departamento de Ciencias Básicas; Argentin