Mutagénesis letal del virus de la hepatitis C

Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología Molecular. Fecha de lectura: 23-10-2014RNA viruses exhibit high mutation rates during genome replication. Nucleotide analogues can increase the mutation rate of RNA viruses by acting as ambiguous substrates during replication. They have been explored as antiviral agents acting through lethal mutagenesis. Lethal mutagenesis, or virus extinction produced by enhanced mutation rates, is an antiviral strategy that aims at counteracting the adaptive capacity of viral quasispecies, avoiding selection of antiviral-escape mutants. Hepatitis C virus (HCV) is a RNA virus whose infections affect about 180 million people worldwide, and about 75% of newly infected patients progress towards a chronic infection, with a risk of severe liver disease. The main objective of this PhD thesis was to characterize the mechanism of anti-HCV activity produced by ribavirin in hepatoma Huh-7.5 in cell culture. The study led to the observation that guanosine can produce inhibition of HCV progeny production, and that inhibition is also related to a lethal mutagenic effect triggered by this nucleoside. Ribavirin is a recognised mutagenic agent for several other RNA viruses, but it is not clear whether it exerts its anti-HCV activity through mutagenesis or other mechanisms. In the present thesis we provide evidence of a mutagenic activity of ribavirin, documented by statistically significant increases of mutant spectrum complexity (as determinated by mutation frecuency, genetic distances and Shannon entropy), and a mutational bias in favor of G→A and C→U transitions. Both molecular cloning and Sanger sequencing, and ultra-deep pyrosequencing have been used for the analysis of HCV populations. Ribavirin treatment resulted in nucleotide imbalances (a reduction of intracellular GTP and an increase of UTP, ATP and CTP). Control experiments using mycophenolic acid and guanosine indicated that GTP depletion cannot explain ribavirin mutagenesis. Moreover, HCV extinction by ribavirin, but not by the non-mutagenic HCV inhibitor mycophenolic acid, occurred with decreases of specific infectivity, a feature typical of lethal mutagenesis. Thus, at least part of the antiviral activity of ribavirin on HCV in Huh-7.5 cells is exerted via lethal mutagenesis. Unexpectedly, guanosine which partially counteracted the inhibitory activity of ribavirin, inhibited HCV progeny production. We studied the effect of high concentrations of guanosine and other nucleotides on HCV and Huh-7.5 cells. Guanosine, but no the other nucleosides, produces a general decrease of the NTP/NDP ratios. Guanosine exerts its anti- HCV activity through mutagenesis, with a significant increase of the proportion of deletions and insertions, accompanied of a decrease of specific infectivity. This antiviral activity is not observed with other RNA viruses, and it constitutes the first example of a metabolite-induced lethal mutagenesis. The results open the way to study means to increase the efficacy of lethal mutagenesisbased treatments for HCV infections

In Vitro Mutagenic and Genotoxic Assessment of a Mixture of the Cyanotoxins Microcystin-LR and Cylindrospermopsin

The co-occurrence of various cyanobacterial toxins can potentially induce toxic effects different than those observed for single cyanotoxins, as interaction phenomena cannot be discarded. Moreover, mixtures are a more probable exposure scenario. However, toxicological information on the topic is still scarce. Taking into account the important role of mutagenicity and genotoxicity in the risk evaluation framework, the objective of this study was to assess the mutagenic and genotoxic potential of mixtures of two of the most relevant cyanotoxins, Microcystin-LR (MC-LR) and Cylindrospermopsin (CYN), using the battery of in vitro tests recommended by the European Food Safety Authority (EFSA) for food contaminants. Mixtures of 1:10 CYN/MC-LR (CYN concentration in the range 0.04-2.5 µg/mL) were used to perform the bacterial reverse-mutation assay (Ames test) in Salmonella typhimurium, the mammalian cell micronucleus (MN) test and the mouse lymphoma thymidine-kinase assay (MLA) on L5178YTk± cells, while Caco-2 cells were used for the standard and enzyme-modified comet assays. The exposure periods ranged between 4 and 72 h depending on the assay. The genotoxicity of the mixture was observed only in the MN test with S9 metabolic fraction, similar to the results previously reported for CYN individually. These results indicate that cyanobacterial mixtures require a specific (geno)toxicity evaluation as their effects cannot be extrapolated from those of the individual cyanotoxins.España Ministerio de Economía y Competitividad AGL2015-64558-

Procriaçao medicamente assistida e homossexualidade na lei e na imprensa portuguesa

Em Portugal, o recurso às técnicas de procriação medicamente assistida esteve reservado apenas às pessoas casadas, que não se encontrassem separadas judicialmente de pessoas e bens ou separadas de facto, ou às que, sendo de sexo diferente, vivessem em condições análogas às dos cônjuges há pelo menos dois anos. Assim foi desde a entrada em vigor da Lei n.º 32/2006, de 26 de Julho. Acontece que, com a Lei n.º 9/2010, de 31 de Maio (cujo início de vigência ocorreu em 05 de Junho desse ano), o casamento civil entre pessoas do mesmo sexo passou a ser legalmente possível, alterando o conceito de casamento. Este é entendido como “o contrato celebrado entre duas pessoas que pretendem constituir família mediante uma plena comunhão de vida”, nos termos previstos no artigo 1577.º do Código Civil. Esta alteração marcou um desajustamento não facilmente resolúvel entre a finalidade do casamento de “constituição de família” e a inerente vontade dos casais do mesmo sexo de terem filhos. Acresce que a lei subordinava o uso das técnicas de procriação medicamente assistida ao diagnóstico de infertilidade ou para tratamento de doença grave ou risco de transmissão de doenças de origem genética, infecciosa ou outras, portanto, a fins de natureza subsidiária de procriação e não alternativa. Em Junho de 2016 foi aprovado o alargamento dos beneficiários às técnicas de procriação medicamente assistida, assegurando o seu acesso a todas as mulheres. O referencial heterossexual da Lei n.º 32/2006 e a compreensão da descendência ligada ao casamento ou união de facto entre pessoas de sexo diferente ficaram ultrapassados. A superação do modelo familiar heterossexual, no que respeita ao uso das técnicas laboratoriais de procriação medicamente assistida, na lei portuguesa, será objecto deste texto, ao lado da cobertura mediática desta questão, ao nível da ultrapassagem de barreiras e mudança de mentalidades

La difusión del Networking como innovación artística y literaria

El objetivo de esta investigación es tratar el Networking como un método colectivo de creación artística, basándonos en la práctica del MailArt y en su posterior evolución. Esta metodología suministró una salida eficiente en la producción de obras sin pérdidas económicas, mediante el envío y recepción de postales manipuladas plásticamente. Esta libertad expositiva suplía la difusión de galerías por la distribución de las obras entre los integrantes de las listas de mailings. Dicha iniciativa artística obtuvo una respuesta a nivel internacional y facilitó la formación de la Networking. El arte obtenido rompía las fronteras del idioma, las gremiales y sexuales, ocasionando un intercambio personal que posibilitó a sus participantes tejerse una red de contactos afín a sus intereses. A finales del siglo XX esta metodología evolucionó con la adaptación del Personal Computer al uso cotidiano de los ciudadanos, cuya innovación tecnológica fue utilizada las prácticas artísticas. Estas creaciones pasaron a ser conocidas en internet como el actual Net.art. Con esta investigación buscamos mostrar que la cibercultura asumió esta metodología tanto en la AltLit, nuevo estilo literario digital, o como en el arte digital, transformando ambos conceptos mediante la interactuación los participantes de las redes sociales. En la actualidad continúa esta prolífica corriente digital, englobando a todos los autores dispuestos a controlar su distribución y producción

Nuevos medios de comunicación pueden contribuir a tener éxitos en medias tradicionales. Caso de la sinología en China

Sinología no era la primera opción de los padres chinos en la educación complementaria de colegio, pero con el florecimiento de la educación en línea, muchas restricciones desaparecen y tiene una mejor difusión y más acumulación de público que antes. En 2017, tres programas televisuales chinos sobre sinología consiguen un éxito tremendo. Y la maravilla es que, logran primero una atención social bastante alta y una discusión amplia en redes sociales chinas como Weibo y Wechat, y luego más gente vuelve a medias tradicionales para ver los programas. Un circulo virtuoso perfecto

Color y género. Un análisis de la pervivencia de estereotipos

En esta comunicación se analiza como los estereotipos asociados a los colores siguen vigentes en nuestra sociedad. Tradicionalmente era lo común vestir a los niños vestidos de azul y a las niñas de rosa, al igual que a los niños se les acostumbraba a regalar juguetes bélicos y las niñas muñecas. Han sido numerables las campañas en los medios de comunicación orientadas a combatir la adscripción de roles o colores según género. Sin embargo, aún permanece de forma latente la transmisión generacional de dichos estereotipos. Para llevar a cabo esta investigación, se ha elaborado un cuestionario realizado por alumnado comprendido entre los 6 y 7 años de edad. En dicho cuestionario, primero el alumnado facilitaba información acerca de los colores con los que los padres adornan su entorno (color de la habitación, de la ropa, útiles de clase, etc). Así mismo, se preguntaba al alumnado sus preferencias sobre colores a efectos de control. El análisis estadístico posterior confirma una diferencia significativa en lo que se refiere respecto a los colores que utilizan los padres para niños y niñas. Para las niñas se escogen colores cálidos y para los niños colores fríos, dando continuidad al estereotipo de color/género

El aprendizaje de la lengua china como L2 y las tecnologías: un modelo de sinización

Este trabajo reúne las principales conclusiones de la investigación que el autor realizó en el año 2016 sobre la repercusión de la aplicación de las tecnologías en la enseñanza/aprendizaje de la lengua china, en el ámbito asiático, concretamente, y a nivel mundial, en general. Con ellas, concluye en la gran relevancia que el uso de las tecnologías aporta a la enseñanza del chino y tomando a éste como herramienta de transmisión cultural, analiza su repercusión actual en un presunto proceso de sinización. Los estudios de interculturalidad recientes señalan la necesidad de reformular los significados tradicionales de orientalismo y orientalización. De modo que la beneficiosa aportación de las tecnologías en la docencia del chino satisface y se suma a una reformulación, tanto de estos conceptos como de la expansión sínica internacionalmente. La accesibilidad tecnológica a la lengua china, entre otras cuestiones, facilita una expansión de la sinidad sin parangón en la historia y, por descontado, caracteriza un modo de mostrarse: más accesible y más abierta que con la restricción lingüística. En consecuencia, el uso de las tecnologías aplicadas a un proceso general de alfabetización del chino sugiere una renovación de las relaciones interculturales, una reformulación del binomio Oriente-Occidente y, en definitiva, una revolución global si lo extrapolamos a ámbitos no restrictivos

Las leyes del Hip hop, normas no escritas de una cultura definida

La cultura Hip hop es conocida como un mundo marcado por el egocentrismo y la banalidad material excesiva. La gran mayoría de prejuicios creados alrededor de este movimiento cultural se sustentan en la reflexión de que este entorno es, en apariencia salvaje, violento y dañino. En muchas ocasiones, mal interpretando términos o confundiendo actividades, los escritores de Graffiti han sido tachados de vándalos; los raperos han sido vistos como personajes de actitud dura y léxico vulgar o inapropiado; y los bboys y bgirls son conocidos como bailarines acrobáticos que realizan complicadas piruetas en la calle. Desde la aparición de esta cultura en los medios de comunicación muchos estudios han procurado relevar las verdaderas ideas de la cultura Hip hop. Fuera del entorno académico uno de los ejemplos de cultura Hip hop más recientes es la serie de Netflix Get Down. Esta serie cuenta su argumento principal dentro de la primera época de la esta cultura urbana. Detrás de la imagen mostrada a través de videoclips y reportajes se esconde todo un entorno cultural con ideas y códigos de actuación propios. Estas normas, desconocidas en su mayoría para el público, se transmiten todavía de forma oral. Los escritores de Graffiti de Nueva York poseen unas normas de convivencia y actuación entre ellos. En España el escritor Muelle creo la idea de La firma sin gasto, idea que se basa en el principio de realizar graffitis donde no molestaran o no supusieran un gasto para la población. La máxima expresión de estas normas es La declaración de la paz de la Cultura Hip hop, escrita por KRS One: Dieciocho leyes que resumen las intenciones y directrices de este movimiento cultural. Este documento ofrece consejo y dirección a las personas que se acerquen a este entorno

Perfil social del youtuber adulto en España

El presente trabajo va a estudiar la figura del youtuber de videojuegos español en la edad adulta, es decir jugadores de videojuegos mayores de 30 años desde el punto de vista social. La figura del youtuber del videojuego adulto en nuestro país, no está recogida en estudios relevantes que puedan darnos datos significativos del porqué se comparten las partidas, con que finalidad y sobre todo ser reconocido dentro de una red social como es Youtube. Para la recogida de datos hemos aplicado una metodología mixta, tanto cualitativa, a través de interpretaciones a nivel social de los datos recogidos en los cuestionarios realizados por los youtuber que han participado en la investigación, como cualitativa. El trabajo de investigación tiene como objetivos: Conocer el porqué de la necesidad de compartir partidas con otros jugadores a través de un canal, dentro de una red social. Descubrir los motivos o motivo que llevan a un adulto(personas mayores de 30 años) a ser youtuber dentro de una red social, dotando de notoriedad al personaje. La metodología adecuada para esta tesis sería la metodología mixta, cualitativa y cuantitativa incluyendo análisis de contenidos, entrevistas personalizadas y grupos focales Sobre la investigación realizada se esperan las siguientes conclusiones: El incremento del youtuber del videojuego en la edad a adulta en España ha supuesto una nueva forma de comunicación entre personas con gustos similares que se produce a través de una red social, Youtube. Las motivaciones sociales que llevan a los jugadores a compartir sus partidas Radiografía social del youtuber español, que relacione lo que esconden este tipo de personalidades. Descubrimiento del mundo youtuber a través del videojuego