COMPARISON OF ELISA AND CHEMILUMINESCENCE IMMUNOASSAY METHODS FOR QUANTIFICATION OF HUMAN PLACENTAL GROWTH FACTOR IN SERUM

Placental growth factor (PlGF) is crucial during placental development in early pregnancy. Several studies in pregnancies with complications such as preeclampsia or small for gestational age neonates find that PlGF levels are significantly lower in the first trimester, which implies that the concentration of PlGF could be used as an early screening biomarker for these conditions. This study aimed to compare the performance of chemiluminescence immunoassay (CLIA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the quantification of human PlGF in serum. This is a comparative study on 88 pregnant women in the first trimester subjected to measurement of PlGF in serum using two commercially available kits: Human PlGF Quantikine HS ELISA (R&D Systems) and PlGF CLIA (Snibe). The overall coefficient of correlation between the tests was 0.93. When the cut-off value of 40 pg/mL was applied, it dropped significantly to 0.50 towards the lower values, while remaining an excellent 0.91 in the group with higher concentrations of PlGF. While R&D Systems’s ELISA seems to have better sensitivity, it is not very convenient to use for a small number of samples. Snibe’s CLIA automated method is user-friendly, fast and powerful. Both tests show excellent performance when indicating risk-free pregnancies

Immunonephelometry and Reverse Hybrydization Genotyping in Diagnosis of Alpha-1-Antitrypsin Deficiency in Macedonians

BACKGROUND: With a frequency of 1:1600, the alpha-1-antitrypsin deficiency is one of the most frequent hereditary diseases and can be recessively inherited. AAT deficiency is most often caused by inheritance of the so-called PiZ allele. Inheritance of this allele increases the risk of developing chronic obstructive pulmonary diseases (COPD) and liver disease.AIM: The aim of this study was to present immunonephelometry and reverse hybridization genotyping in diagnosis of alpha-1-antitrypsin deficiency in Republic of Macedonia.MATERIAL AND METHODS: At the Institute of Immunobiology and Human Genetics, part of the Faculty of Medicine in Skopje, in the previous 7 years, total of 361 patients with suspected alpha-1-antitrypsin (AAT) deficiency were referred for analysis of AAT concentration using nephelometry (Dade Behring) and subsequent AAT genotyping of individuals with alpha-1-antytripsin deficiency at protein level, based on reverse hybridization technique.RESULTS: Measurement of AAT concentration (g/l) by nephelometry have shown normal level in the range of 1.37-1.41 g/l (88%), lower than normal AAT levels in the range of 0.70-0.83 g/l (8.03%), and concentration above the normal levels in the range of 2.28-2.4 g/l (3.88%).CONCLUSION: Diagnosis in the case of a suspicion of AAT deficiency is carried out by measuring the alpha-1-antitrypsin level in blood and by genotyping of alpha-1-antytripsin allele

A case of a ten-year old girl with dominantly inherited Familial Mediterranean fever in Republic of Macedonia

The Familial Mediterranean fever (FMF, MIM249100) is an autoimflammatory genetic disease characterized with recurrent painful attacks in the abdomen, chest or joints, usually accompanied with high body temperature. It is classically inherited in an autosomal recessive manner. It is associated with mutations of the MEFV gene, coding for the protein pyrin. More than 140 mutations of the MEFV gene are defined worldwide. Despite the progress in establishing reliable tests practical for routine use, as much as 20% of the patients with FMF remain without a detectable mutation in the MEFV gene. This is the main reason why the diagnosis of FMF remains still a clinical one, according to Tel Hashomer criteria. A 10-year old girl admitted to the Clinic of Pediatrics at the Faculty of Medicine in Skopje for unexplained fever. After numerous laboratory analyses and specialist consultations were done, genetic testing for FMF was requested. The presence of an heterozygous mutation E148Q was confirmed at the Institute for Immunobiology and Human Genetics using a PCR based, reverse hybridization method. Administration of colchicine, the therapy of choice, in a dose of 1.5 mg/day, lead to complete resolution of the symptoms within some days following commencement. Although the disease is classically inherited in a recessive manner, some atypical cases of autosomal dominant inheritance are described. Our patient may be another example supporting the unusual dominant inheritance, since the heterozygous state for the E148Q mutation was the only positive finding in the genotyping of the 12 most frequent MEFV mutations

ПРАКТИКУМ ЗА ХУМАНА ГЕНЕТИКА - 1: Учебник за практична настава од хумана гентика - второ издание -

The subject of human genetics was introduced for the first time with the European Credit Transfer System (ECTS) at the Faculty of Medicine in Skopje in the academic year 2005/2006. The subject is taken in the second semester with a total of 60 hours (30 hours of theory and 30 hours of exercises) and is valued at 4 credits. The content of the subject is divided into two functional units: Human Genetics-1, with a fund of 30 hours, in which the basics of human genetics are presented, and Human Genetics-2, with a fund of 30 hours, in which the genetic aspects of diseases are presented man, their diagnosis and treatment. In this practicum for Human Genetics-1, texts from 15 exercises have been entered, grouped into five blocks of three exercises each. At the beginning of the blocks are given the web objectives for each separate exercise and the points that bring the presence of the exercises and the knowledge gained from them. In each exercise, extensive material is given that is related to the performance of the corresponding exercise, mainly due to the lack of appropriate printed materials in the Macedonian language for their understanding. At the end of each exercise, several tasks are given that each student should perform, and in the corresponding spaces enter a part of the results that he received. In that way, students can recall the performance of the exercises during their studies. With the introduction of a course for Higher Vocational Schools at the Faculty of Medicine in Skopje, the subject Human Genetics was introduced for nurses with a fund of 15+0 hours, as well as for speech therapists with a fund of 30+30 hours. This practicum is intended for practical teaching for speech therapists, with a shortening of 5 exercises (one exercise from each block). The first edition of the Human Genetics Practicum-1 was printed in 2006. Comments from reviewers and students have been partially incorporated into this edition. We expect students to provide additional comments to improve the content and text of this practicum. I hope that the practicum will help students master the exercises from Human Genetics-1. Prof. Dr Mirko Spiroski Skopje, 2009Предметот хумана генетика за прв пат е воведен со Европскиот кредитен трансфер систем (ЕКТС) на Медицинскиот факултет во Скопје во учебата 2005/2006 година. Предметот се слуша во вториот семестар со вкупен фонд од 60 часови (30 часа теоретски и 30 часа вежби) и се вреднува со 4 кредити. Содржината на предметот е поделена во две функционални целини: Хумана генетика-1, со фонд од 30 часа, во која се изнесуваат основите на хумана генетика и Хумана генетика-2, со фонд од 30 часа, во која се изнесуваат генетски аспекти на болестите кај човекот, нивното дијагностицирање и лекување. Во овој практикум за Хумана генетика-1 внесени се текстови од 15 вежби, групирани во пет блока од по три вежби. На почетокот од блоковите се дадени уебните цели за секоја одделна вежба и поените кои ги носат присуството на вежбите и стекнатото знаење од нив. Во секоја вежба даден е обемен материјал кој е поврзан со изведувањето на соодветната вежба, главно заради недостаток од соодветни печатени материјали на македонски јазик за нивно разбирање. На крајот од секоја вежба дадени се неколку задачи кои треба секој студент да ги изведе, а во соодветните простори да внесе дел од резултатите кој ги добил. На тој начин студентите можат да се присетуваат на изведувањето на вежбите во текот на нивното учење. Со воведување насока за Високи стручни школи на Медицинскиот факултет во Скопје, воведен е предметот Хумана генетика за медицински сестри со фонд на часови 15+0, како и за логопеди со фонд на часови 30+30. Овој практикум е наменет за практичната настава за логопеди, со скратување на 5 вежби (по една вежба од секој блок).  Првото издание на Практикумот за хумана генетика-1 беше отпечатено во 2006 година. Забелешките од рецензентите и од студентите се делумно вградени во ова издание. Очекуваме студентите да дадат дополнителни забелешки за подобрување содржината и текстот на овој практикум. Се надевам дека практикумот ќе им помогне на студентите да ги совладаат вежбите од Хумана генетика-1.   Проф. д-р Мирко Спироски Скопје, 2009 годин

Имунолошки практикум: - лабораториска имунодијагностика -

The subject of immunology was introduced for the first time in the six-year study system of the Faculty of Medicine in Skopje in the academic year 1993/94. The subject was taught in the winter semester of the third year (5th semester) with a total fund of 30 hours (15 hours of theoretical teaching and 15 hours of practical teaching). In the beginning, the entire theoretical and practical teaching was carried out by teachers and assistants in physiology from the Institute of Physiology and teachers and assistants in transfusiology from the Republic Institute of Transfusiology. During 1994, elections were announced and the first teacher and the first assistants for the subject of immunology were chosen. On 02.03. In 1995, the first Department of Immunology was established at the Faculty of Medicine in Skopje. Since 2001, the subject Immunology has been taught in the fourth semester (second year) with a fund of 15 plus 15 hours and with an additional 15 hours of seminars. From the academic year 2005/06, the European Credit Transfer System (ECTS) of the Faculty of Medicine in Skopje started, according to which the subject Immunology is taught with a pool of hours 24 and 21 (45) in the third semester (second year). In June 1995, the first textbook on immunology was published, that is, the book Basic immunological methods intended for the practical teaching of this subject. In 2005, the book Immunologic practicum for the practical teaching of the immunology subject was published by the Institute of Immunobiology and Human Genetics. The employees of the Institute were busy with the task of writing an Immunology practicum - immuno-diagnostics according to the ECTS program and making it available to the students. In this practicum, seven blocks of exercises from immunodiagnostics to immunology have been introduced. Each block is composed of three exercises, the first two of which are laboratory methods for immunodiagnostics, and the third exercise is the interpretation of the results of the corresponding area of immunology. Along with these seven blocks, i.e. 21 exercises, additional materials are offered in the form of video clips (on compact disc) for easier mastering of the material. Case analyzes are added to each exercise on the interpretation of immunological results in order for students to connect the immunological results with future clinical disciplines in which they will apply the acquired knowledge of immunology. Students should master the provided materials before attending exercises in order to win the highest number of points and thus a higher grade. I hope that the practicum will be useful to the students and that it will be a good basis for the adoption of the new curriculum of this subject.   Prof. Dr Mirko Spiroski Skopje, November 2006Предметот имунологиjа за прв пат е воведен во шестогодишниот систем на студии на Медицинскиот факулет во Скопjе во учебната 1993/94 година. Предметот се слушаше во зимскиот семестар од трета година (5. семестар) со вкупен фонд од 30 часови (15 часа теоретска настава и 15 часа практична настава). Во почетокот целокупната теоретска и практична наставата jа изведуваа наставници и асистенти по физиологиjа од Институтот за физиологиjа и наставници и асистенти по трансфузиологиjа од Републичкиот завод за трансфузиологиjа. Во текот на 1994 година беа распишани избори и беа избрани првиот наставник и првите асистенти по предметот имунологиjа. На 02.03. 1995 година е конституирана првата Катедра за имунологиjа на Медицинскиот факултет во Скопjе. Од 2001 предметот Имунологиjа се слушаше во четвртиот семестар (втора година) со фонд на часови 15 и 15 и со дополнителни 15 часови семинари. Од учебната 2005/06 започна Европскиот кредитниот трансфер систем (ЕКТС) на Медицинскиот факултет во Скопjе, според коj предметот Имунологиjа се слуша со фонд на часови 24 и 21 (45) во третиот семестар (втора година). Во jуни месец 1995 година излезе од печат првиот учебник по имунологиjа, односно книгата Основни имунолошки методи наменета за практичната настава од овоj предмет. Во 2005 излезе од печат книгата Имунолошки практикум за практичната настава од предметот имунологиjа во издание на Институтот за имунобиологиjа и хумана генетика. Вработените од Институтот се зафатиjа со задача да напишат Имунолошки практикум - имуно-диjагностика според програмата за ЕКТС и да им го стават на располагање на студентите. Во овоj практикум се внесени седум блокови од вежби од имунодиjагностиката во имунологиjата. Секоj блок е сотавен од три вежби, од кои првите две се лабораториски методи за имунодиjагностика, а третата вежба е толкување на резултатите од соодветаната област на имунологиjата. Кон овие седум блокови, односно 21 вежба се понудени дополнителни материjали во облик на видео исечоци (на компакт диск) за полесно совладување на материjалот. Кон секоjа вежба за толкување на имунолошките резултати додадени се анализи на случаи со цел студентите да ги поврзат имунолошките резултати со идните клинички дисциплини во кои ќе го применат стекнатото знаење од имунологиjата. Студентите треба да ги совладаат предвидените материjали пред да присуствуваат на вежби за да освоjат наjголем броj поени и со тоа повисока оценка. Се надевам дека практикумот ќе им биде од корист на студентите и дека ќе претставува добра основа за донесување на новата наставна програма од овоj предмет.   Проф. д-р Мирко Спироски Скопjе, ноември 2006 годин

АНАЛИЗА НА СЛУЧАИ ОД ИМУНОЛОГИЈАТА

One of the most important goals of the modernization of Medical Faculties in the European Union is the unification of basic knowledge from pre-clinical courses with clinical judgment and that as early as possible (even in the first semester). In that sense, various novelties are introduced in the contents of the subjects and their connection in logical units. The main weight that immunology has as a subject for medical students is how to master the many types of cells and their specific ratios, the even greater number of immunological mechanisms, and especially the fitting of that knowledge into immunological deviations. The most important goal of the immunology course is to enable medical students to think immunologically so that they can successfully apply immunological knowledge when they encounter a specific clinical condition. This is achieved by analyzing immunology cases in order to explain basic immunological knowledge to students and specifically relate it to clinical practice. In clinical courses, immunological case presentations are used where students are introduced to the clinical approach in solving specific immunological diseases, starting from anamnesis, family history, current condition, clinical examinations, laboratory and other diagnostic examinations, differential diagnosis, treatment, rehabilitation and forecast. In this book, already published analyses of immunology cases are selected from the highest quality books used for that purpose in the world, grouped into seven blocks of two cases each, as provided in the Immunology Practicum. The names of the cases are invented so that students can remember them more easily. Although I expect reactions to this approach to the education of medical students by clinically oriented teachers, I believe that this book will be well received by students and that it will encourage the writing of similar and better textbooks with this approach for other subjects at the Faculty of Medicine in Skopje.   Prof. Dr Mirko Spiroski October, 2007Една од најзначајните цели од модернизацијата на Медицинските факултети во Европската Унија е обединувањето на базичните знаења од предклиничките предмети со клиничкото просудување и тоа што е можно порано (уште во првиот семестар). Во таа смисла се воведуваат различни новини во содржините на предметите и нивното поврзување во логични целини. Главната тежина што ја има имунологијата како предмет за студентите по медицина е како да се совладаат многуте видови клетки и нивните специфични соодноси, уште поголемиот број имунолошки механизми, а особено вклопувањето на тие знаења во имунолошките отстапувања. Најзначајна цел на предметот имунологија е да ги оспособи студентите по медицина имунолошки да размислуваат за да можат успешно да ги применат имунолошките сознанија кога ќе се сретнат со конкретна клиничка состојба. Тоа се постигнува со анализа на случаи од имунологијата со цел на студентите да им се објаснат базичните имунолошки знаења и конкретно да ги поврзат со клиничката пракса. Во клиничките предмети се користат прикази на имунолошки случаи каде што студентите се запознаваат со клиничкиот приод во разрешување на конкретни имунолошки заболувања, почнувајќи од анамнеза, фамилна анамнеза, сегашна состојба, клинички испитувања, лабораториски и други дијагностички испитувања, диференцијална дијагноза, лекување, рехабилитација и прогноза. Во оваа книга се одбрани веќе објавени анализи на случаи од имунологијата од најквалитетните книги кои се користат за таа намена во светот, групирани во седум блока од по два случаи, како што се предвидени во Имунолошкиот практикум. Имињата на случаите се измислени за да можат студентите полесно да ги запаметат. Иако очекувам реакции кон ваквиот приод за образование на студентите по медицина од страна на клинички ориентираните наставници, верувам дека книгава ќе биде добро прифатена од студентите и дека таа ќе поттикне пишување на слични и подобри учебници со ваков приод и за другите предмети на Медицинскиот факултет во Скопје.   Проф. д-р Мирко Спироски Октомври, 2007 годин

Association of Cytokine Gene Polymorphisms with Chronic Obstructive

The aim of this study was to examine the association of 22 cytokine gene polymorphism in Macedonians with chronic obstructive pulmonary disease (COPD). The sample of the population comprised of 301 normal respondents and 62 patients with COPD. Cytokine genotyping was performed by polymerase chain reaction with sequence-specific priming (PCR-SSP). Positive (susceptible) association was found between patient with COPD and IL-1α -889/C allele; where as negative (protective) association among was found for the following alleles IL-1β +3962/C; IL-12B -1188/A; IFNγ +874/T; IL-2 -330/G; IL-4 -1098/G and IL-4-33/C. We found positive (susceptible) association between patients with COPD and following genotypes: IL4 -33/T:T; IFNγ +874/A:A; IL-4 -1098/T:T ; IL-1α -889/C:C; IL-1β +3962/C:T; IL-12B -1188/C:C; IL-4Rα +1902/G:G; IL-10 -1082/G:G; IL-2 -330/T:T; IL-4 -590/C:C; and IL-1α -889/C:T. Negative (protective) association between patients with COPD and following genotypes was found: IFNγ +874/A:T; IL-4 -33/C:T; IL-4 -1098/G:T; IL-2 -330/G:T; IL-1β +3962/C:T; IL-4 -590/C:T; IL-10 -1082/A:G; and IL-4 -33/C:C. Positive (susceptible) association between patients with COPD and following haplotypes was found: IL-4/TCT; IL-10/ATC; and IL-2/TG, and negative (protective) association was found between the patients with COPD and haplotypes for: IL-4/TTC; and IL-4/GCC. It could be concluded that several cytokine polymorphisms are positively (susceptible), or negatively (protective) associated with COPD in Macedonians