The use of doxorubicine at low doses for elevation of LAK-activity toward explants and cells of MC-rhabdomyosarcoma and В16 melanoma resistant to doxorubicin

Aim: To study the influence of doxorubicin at low doses on antitumor action of activated (LAK) and non-activated lymphocytes from lymph nodes toward tumor cells of mice bearing doxorubicin-resistant and doxorubicin-sensitive transplantable MC-rhabdomyosarcoma and B16 melanoma. Materials and Methods: The study was carried out on BALB/c mice bearing MC-rhabdomyosarcoma and С57BL/6 mice bearing В16 melanoma. Explants, tumor cells and lymphocytes were cultivated in diffusion chambers, filters were stained with hematoxylin by Karachi, and morphology of preparations was examined. Results: At the day 7 of tumor growth in mice bearing resistant MC-rhabdomyosarcoma, non-activated lymphocytes pretreated with low-dose doxorubicin possess the highest antitumor activity, and in mice bearing doxorubicin-resistant B16 melanoma the highest antitumor activity was detected for lymphocytes after combined cultivation with IL-2 and doxorubicin. At the day 14 of tumor growth, LAK obtained from lymphocytes pretreated with doxorubicin possess the highest cytotoxic activity toward resistant tumor cells both of MC-rhabdomyosarcoma and B16 melanoma. There was no such effect in the case of sensitive tumors. Conclusion: To elevate antitumor activity of LAK toward MC-rhabdomyosarcoma and B16 melanoma cells, low doses of doxorubicin could be used at certain conditions of LAK generation.Цель: изучить влияние малых доз доксорубицина на противоопухолевое действие активированных (ЛАК) и неактивированных лимфоцитов лимфатических узлов по отношению к опухолевым клеткам мышей с резистентными и чувствительными к доксорубицину перевивной МХ-рабдомиосаркомой и меланомой В16. Материалы и методы: исследования проведены на мышах линии BALB/c с МХ-рабдомиосаркомой и С57BL/6 c меланомой В16. Эксплантаты, опухолевые клетки и лимфоциты культивировали в диффузионных камерах и окраской фильтров гематоксилином по Караччи. Исследовали морфологическую картину полученных препаратов с учетом критериев роста опухоли. Результаты: сопоставление результатов противоопухолевой активности активированных и неактивированных лимфоцитов, полученных в различных условиях, показало следующее. На 7-е сутки у мышей з резистентной МХ-рабдомиосаркомой наибольшей противоопухолевой активностью обладали неактивированные лимфоциты, предварительно обработанные малыми дозами докорубицина, а у мышей з резистентной меланомой В16 — лимфоциты после сочетанного культивирования с ИЛ-2 и доксорубицином. На 14-е сутки роста опухоли наибольшей цитотоксической активностью обладали ЛАК, полученные из лимфоцитов, предварительно обработанных доксорубицином, в отношении резистентных опухолевых клеток как перевивной МХ-рабдомиосаркомы, так и меланомы В16. Относительно чувствительных клеток указанных опухолей такой эффект не отмечался. Выводы: для усиления противоопухолевой активности ЛАК по отношению к клеткам МХ-рабдомиосаркомы и меланомы В16, резистентных к доксорубицину, могут быть использованы малые дозы доксорубицина при соблюдении определенных условий получения ЛАК

Expression of E-cadherin in drug resistant human breast cancer cells and their sensitivity to lymphokine-activated lymphocytes action

Aim: To analyze the correlation between the elevated sensitivity of drug resistant breast cancer cells to the action of lymphokine-activated lymphocytes (LAK) and expression of E-cadherin and other marker proteins by cancer cells and lymphocytes. Methods: Breast tumor explants were cultured with autologous lymphocytes in double diffusion chambers. The results were evaluated by morphological criteria of explants growth. Expression level of proteins on tumor cells was analyzed using immunohistochemical method on paraffin embedded sections, and by indirect immunofluorescence — on lymphocytes. Results: Significant decrease of E-cadherin expression and significant increase of nuclear antigen of proliferating cells expression have been detected on drug resistant malignant human breast tumor (DRHBT) cells compared with drug sensitive breast tumor (DSHBT) cells. Autologous LAK possessed the highest antitumor activity against DRHBT cells that was associated with high expression level of soybean lectin receptor. Conclusion: Malignant drug resistant tumors are characterized by reverse relation between E-cadherin expression level and their proliferative activity. Marked antitumor action of LAK against these tumors is associated with high expression level of soybean lectin receptor on the lymphocytes

Efficacy of different immunotherapy approaches toward treatment of doxorubicin-resistant and doxorubicinsensitive transplantable rhabdomyosarcoma

Aim: To evaluate the efficacy of different variants of immunotherapy, namely, adoptive LAK-therapy, vaccine therapy and their combination in vivo using transplantable murine MC-rhabdomyosarcoma resistant and sensitive to doxorubicin (Dox). Materials and Methods: The study was carried out on BALB/c mice bearing Dox-sensitive and Dox-resistant transplantable murine MC-rhabdomyosarcoma. LAK-therapy (using lymphocytes from lymph nodes of syngenic mice) was performed starting from day 7 after tumor cell transplantation for 5 days; LAK (3 x 106 cells in 0.2 ml medium) were injected in the region of tumor. The vaccine prepared on the base of tumor cell glycopeptides was administered intraperitoneally at the volume of 0.2 ml before or after tumor transplantation. Efficacy of immunotherapy was evaluated by tumor growth inhibition and life span of animals. Results: By the indexes of tumor growth inhibition and average life span, for animals bearing Dox-sensitive tumors vaccine therapy was the most effective, whilst adoptive LAK-therapy was the most effective for mice bearing Dox-resistant tumors. All applied variants of therapy — adoptive LAK-therapy, vaccine therapy and their combination were effective for treatment of mice bearing Dox-sensitive and Dox-resistant transplantable murine MC-rhabdomyosarcoma. Conclusion: The obtained data demonstrated that Dox-sensitive and Dox-resistant tumors differ by the sensitivity to different types of immunotherapy.Цель: изучить влияние различных видов иммунотерапии, а именно адоптивной ЛАК-терапии, вакцинотерапии, а также их комбинации, дать оценку их эффективности в условиях перевивной МХ-рабдомиосаркомы мышей, резистентной и чувствительной к доксорубицину. Материалы и методы: исследования проведены на мышах линии BALB/c с чувствительной и резистентной к доксорубицину перевивной МХ-рабдомиосаркомой. ЛАК-терапию (лимфоцитами лимфатических узлов сингенных мышей) проводили начиная с 7 сут после перевивки опухолевых клеток на протяжении 5 дней; ЛАК вводили в область опухоли в количестве 3 млн в 0,2 мл среды. Вакцину, полученную на основе гликопептидов опухолевых клеток, вводили мышам интраперитонеально в объеме 0,2 мл по двум схемам: до перевивки и после перевивки опухоли. Влияние иммунотерапии оценивали по проценту торможения роста опухоли и выживаемости животных. Результаты: данные проведенной иммунотерапии свидетельствуют, что у мышей с чувствительной к доксорубицину опухолью наиболее эффективна вакцинотерапия, а при резистентной опухоли — адоптивная ЛАК-терапия, что подтверждалось наибольшей протяженностью жизни и наиболее выраженным торможением роста опухоли у животных этой группы. Кроме того, сравнительный анализ результатов применения ЛАК-терапии, вакцинотерапии и их сочетания показал, что все ее виды эффективны у мышей как с чувствительной, так и резистентной к доксорубицину МХ-рабдомиосаркомой. Выводы: полученные данные свидетельствуют о том, что резистентные и чувствительные к доксорубицину опухоли отличаются чувствительностью к различным видам иммунотерапии, что, по всей вероятности, объясняется различными механизмами их действия

Expression of CD40 by the cells of benign and malignant breast tumors and antitumor action of autologous lymphocytes against chemoresistant and chemosensitive tumors

Aim: To study the expression of CD40 by cells of benign and malignant tumors of mammary gland, and to compare the efficacy of lymphocytes antitumor activity against drug resistant and sensitive breast tumors in relevance to CD40 expression. Methods: Breast tumor explants were cultured with autologous lymphocytes in double diffusion chambers. The results were evaluated by morphological criteria of explants growth. Expression level of molecules on tumor cells was analyzed using immunohistochemical method (paraffin embedded slides), and on lymphocytes — by the method of indirect immunofluorescence. Results: The highest level of CD40 expression was detected on cells of chemoresistant malignant breast tumors, and the lowest one — on cells of benign breast tumors. The decreased CD40 expression on lymphocytes from patients with drug resistant breast cancer was compared with that on lymphocytes of the patients with drug sensitive breast cancer. The study of antitumor activity of autologous lymphokine activated killer cells (LAK) has shown their pronounced antitumor activity against drug resistant malignant breast tumors. Conclusion: Marked antitumor activity of LAK from the patients with drug resistant breast cancer is associated with high expression level of CD40 on tumor cells and with its decreased expression on lymphocytes.Цель: изучение частоты экспрессии CD40 клетками злокачественных и доброкачественных опухолей молочной железы и сравнение эффективности противоопухолевого действия лимфоцитов в зависимости от экспрессии CD40 в отношении резистентных и чувствительных опухолей молочной железы. Методы: культивирование эксплантатов опухолей молочной железы с аутологичными лимфоцитами в двойных диффузионных камерах. Оценку результатов проводили на основании морфологических критериев роста эксплантатов. Для определения экспрессии молекул на опухолевых клетках использовался иммуногистохимический метод (парафиновые срезы), а на лимфоцитах — метод непрямой иммунофлуоресценции. Результаты: наиболее высокий уровень экспрессии молекул CD40 отмечен на клетках резистентных злокачественных опухолей молочной железыпо сравнению с опухолями, чувствительными к химиопрепаратам, а наиболее низкий — на клетках доброкачественных опухолей. Установлено снижение экспрессии CD40 лимфоцитами больных со злокачественными резистентными опухолями молочной железы по сравнению с лимфоцитами больных с чувствительными опухолями. На лимфоцитах больных с доброкачественными опухолями уровень экспрессии CD40 был значительно выше по сравнению со злокачественными. Изучение противоопухолевой активности аутологичных ЛАК показало, что противоопухолевое действие у больных со злокачественными опухолями, резистентными к химиопрепаратам, было более выражено. Выводы: выраженная противоопухолевая активность ЛАК больных со злокачественными опухолями, резистентными к химиопрепаратам, ассоциируется с высоким уровнем экспрессии CD40 на опухолевых клетках и со снижением его экспрессии на лимфоцитах

Antitumor action of lymphokin-activated сеlls of patients with soft tissue sarcomas and melanomas in dependence on expression of MHC classes I and II antigenes

Aim: To study expression of major histocompatibility complex (MHC) classes І and ІІ antigens and CD25, CD71, Ki-67, CD54, CD56, CD11b, PCNA on lymphocytes and tumor cells and antitumor action of lymphocytes activated with IL-2. Materials and Methods: Tumor explants (soft tissue sarcoma, n = 20, melanoma, n = 25) were co-cultivated in diffusion chambers with autologous lymphocytes; antitumor action was evaluated by morphologic patterns of explant’s growth. Expression of CD25, CD71, Ki-67, CD54, CD56, CD11b, PCNA was evaluated by the method of indirect fluorescence using respective monoclonal antibodies. Results: The highest antitumor action of lymphocytes toward soft tissue sarcoma and melanoma cells is observed if tumor cells are expressing MHC class I antigens. In the cases of soft tissue sarcoma no correlation between the level of antitumor activity of lymphocytes and expression of CD25, CD71, Ki-67, CD54, CD56, CD11b, PCNA has been found, whilst in the case of melanoma it is associated with the high level of CD11b expression. Conclusion: There is a direct correlation between sensitivity of soft tissue sarcoma and melanoma cells to action of lymphokin-activated killer cells and the level of MHC class I antigens.Цель: изучить экспрессию антигенов І и ІІ класса главного комплекса гистосовместимости (ГКГ) на лимфоцитах и опухолевых клетках (саркомы мягких тканей и меланома кожи) и противоопухолевое действие лимфоцитов, активированных и неактивированных ИЛ-2 параллельно с экспрессией некоторых рецепторов, характеризующих протеом. Материалы и методы: культивирование эксплантатов опухоли и аутологичных лимфоцитов в диффузионных камерах с дальнейшим изучением противоопухолевого действия лимфоцитов на основании морфологических особенностей роста эксплантатов. Экспрессию антигенов CD25, CD71, Ki-67, CD54, CD56, CD11b, ядерного антигена пролиферирующих клеток (ИПО-38) определяли методом непрямой флуоресценции с помощью соответствующих моноклональных антител. Результаты: наиболее выраженное противоопухолевое действие лимфоцитов как больных саркомами мягких тканей, так и меланомой проявляется по отношению к тем опухолевым клеткам, которые экспрессируют антигены I класса ГКГ. Установлено, что значение экспрессии указанных структур для противоопухолевого действия зависит от биологических особенностей опухоли: зависимости между уровнем противоопухолевой активности и экспрессией изученных рецепторов клетками больных саркомой не выявлено. В то же время наиболее выраженное противоопухолевое действие лимфоцитов больных меланомой сочеталось с высоким уровнем экспрессии ими CD11b. Выводы: установлена прямая зависимость чувствительности опухолевых клеток к действию лимфокинактивированных клеток от уровня экспрессии антигенов ГКГ I класса на клетках как меланомы, так и сарком

ОСТЕОПОРОЗ В РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ: ЭПИДЕМИОЛОГИЯ, МЕДИКО-СОЦИАЛЬНЫЕ И ЭКОНОМИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПРОБЛЕМЫ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

The authors performed an analysis of published stadies devoted to osteoporosis situation in Russian Federation including epidemiological, social, medical and economical aspects of this pathology. The analysis demonstrated that osteoporosis is reported in every third woman and every forth man of 50 years old and older. Seven vertebra fractures happen every minute and one fracture of proximal femur — every 5 minutes in Russia. An overall number of all key osteoporotic fractures will increase from 590 thousand up to 730 thousand cases by the year 2035. Osteoporosis is financially demanding for healthcare due to high treatment cost of fractures that are accompanied by life quality deterioration, high mortality and invalidization of patients. Epidemiological studies demonstrated that due to high fracture risk the osteoporosis therapy should be assigned to 31% of female and 4% of male patients over 50 years old. Such factors of osteoporosis risks are widespread in the society: smoking, low food calcium consumption, vitamin D deficit, low physical activity. The authors analyzed the problems in organization of medical care to patients with osteoporosis and osteoporotic fractures and possible solutions to existing issues. The organization of healthcare should be addressed at identification of high risk patient groups, early diagnosis and assignment of corresponding treatment aimed at decreasing potential fracture risk as well as at pathology prophylaxis.Проведен анализ литературы, посвященной проблеме остеопороза в России, включающей эпидемиологические, социальные, медицинские и экономические аспекты заболевания. Анализ показал, что остеопороз регистрируется у каждой третьей женщины и каждого четвертого мужчины в возрасте 50 лет и старше. Каждую минуту в стране происходит 7 переломов позвонков, а каждые 5 минут — перелом проксимального отдела бедренной кости. К 2035 г. общее число основных остеопорозных переломов увеличится с 590 тыс. до 730 тыс. случаев в год. Остеопороз затратен для здравоохранения из-за высокой стоимости лечения переломов, которые также сопровождаются существенным снижением качества жизни, инвалидизацией пациентов и летальностью. Эпидемиологические исследования показали, что в связи с высоким риском переломов в назначении терапии остеопороза нуждаются 31% женщин и 4% мужчин старше 50 лет. В обществе широко распространены факторы риска остеопороза: курение, низкое потребление кальция с продуктами питания, дефицит витамина D, слабая физическая активность. Проанализированы проблемы в организации помощи пациентам с остеопорозом и остеопорозными переломами и пути их решения. Организация медицинской помощи должна заключаться в выявлении групп высокого риска переломов, ранней диагностике и назначении соответствующего лечения, направленного на предотвращение будущих переломов и профилактику заболевания

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ВЕДЕНИЮ ПЕРВИЧНЫХ ПАЦИЕНТОВ С СИМПТОМАМИ ДИСПЕПСИИ

Aim: To develop evidence-based recommendations for primary care physicians and general practitioners (GP) on choosing the proper management tactics and making valuable & quick diagnostic decisions at outpatient phase for patients with symptoms of dyspepsia, and also reveal possible oncology on time. Summary of recommendations: Approximately 40% of the patients in Russia presenting to primary care with symptoms of dyspepsia. A doctor has to focus on the warning signs, which may require an urgent additional examination & the consultation with a surgeon/onco-surgeon or other specialists if required. With regard to a risk of cancer, a doctor should be more cautious in patients over 45 years of age. Early diagnosis of oncology depends mainly on cautiousness of GP, primary care physicians and their knowledge, future tactics with regard to the patients. From the mandatory diagnostic tests during the first visit, esophagogastroduodenoscopy and H. pylori diagnostics helps to exclude any organic esophagus and stomach pathology, possible oncology. While waiting for endoscopy results, a physician should use the preliminary diagnoses “Uninvestigated Dyspepsia” (ICD-10 К 31.9) (disease of stomach and duodenum, unspecified). After exclusion of all warning signs, therapy of dyspepsia should be in accordance to the order of the Ministry of Health No 248 which gives an option to use proton pump inhibitors (omeprazole or rabeprazole 20 mg daily) in combination with prokinetic (domperidone 30 mg daily). Fixed drug combination of omeprazole 20 mg and modified-release domperidone 30 mg/daily (Omez® DSR) is medically reasonable. Conclusion: The introduction of this recommendation into clinical practice will help clinicians to prevent diagnostic mistakes, unreasonable use of expensive diagnostic examinations and inappropriate treatment leads to improvement in the overall prognosis and quality of life for the patients.Цель. Представить рекомендации диагностики и лечения пациентов с симптомами диспепсии на этапе амбулаторно-поликлинической помощи, обобщающие зарубежный и отечественный опыт ведения данной категории больных. Основная цель рекомендаций - помочь терапевту и врачу общей практики (ВОП) на амбулаторном этапе принять правильное решение о тактике ведения больного, и в максимально короткий срок поставить правильный диагноз, а также вовремя выявить у пациента наличие онкологической патологии. Основные положения. Около 40% обращений пациентов на амбулаторно-поликлиническом приеме в России связано с симптомами диспепсии. Врач, в первую очередь, должен исключить наличие «тревожных признаков», которые требуют незамедлительного дополнительного обследования пациента, привлечения хирурга и/или других специалистов и госпитализации больного. Доктор должен иметь онкологическую настороженность, особенно, при обращении пациентов в возрасте 45 лет и старше, так как ранняя диагностика злокачественных новообразований (ЗНО) зависит главным образом от онкологической настороженности терапевтов, врачей общей практики и их знаний, дальнейшей тактики в отношении больного. Эзофагогастродуоденоскопия и тесты на H. pylori являются обязательными методами исследования на этапе диагностического поиска и позволяют исключить органические заболевания пищевода и желудка, наличие онкологии. До получения результатов эндоскопического исследования следует выставлять предварительный диагноз «Диспепсия Неуточненная» и шифровать под рубрикой МКБ-10 К 31.9 (болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки неуточненная). После исключения «тревожных признаков» терапия диспепсии проводится согласно Приказу МЗ РФ № 248 и включает назначение ингибиторов протонной помпы (омепразол или рабепразол 20 мг/сут) в комбинации с прокинетиком (домперидон 30 мг/сут). Оправдано применение фиксированной комбинации омепразола 20 мг с домперидоном модифицированного высвобождения 30 мг/сут (Омез® ДСР). Заключение. Внедрение рекомендаций в клиническую практику поможет врачу избежать ошибок при постановке диагноза, применения необоснованных и нередко дорогостоящих методов обследования, нерационального лечения, что позволит улучшить прогноз и качество жизни пациентов

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ВЕДЕНИЮ ПЕРВИЧНЫХ ПАЦИЕНТОВ С СИМПТОМАМИ ДИСПЕПСИИ

Aim: To develop evidence-based recommendations for primary care physicians and general practitioners (GP) on choosing the proper management tactics and making valuable & quick diagnostic decisions at outpatient phase for patients with symptoms of dyspepsia, and also reveal possible oncology on time. Summary of recommendations: Approximately 40% of the patients in Russia presenting to primary care with symptoms of dyspepsia. A doctor has to focus on the warning signs, which may require an urgent additional examination & the consultation with a surgeon/onco-surgeon or other specialists if required. With regard to a risk of cancer, a doctor should be more cautious in patients over 45 years of age. Early diagnosis of oncology depends mainly on cautiousness of GP, primary care physicians and their knowledge, future tactics with regard to the patients. From the mandatory diagnostic tests during the first visit, esophagogastroduodenoscopy and H. pylori diagnostics helps to exclude any organic esophagus and stomach pathology, possible oncology. While waiting for endoscopy results, a physician should use the preliminary diagnoses “Uninvestigated Dyspepsia” (ICD-10 К 31.9) (disease of stomach and duodenum, unspecified). After exclusion of all warning signs, therapy of dyspepsia should be in accordance to the order of the Ministry of Health No 248 which gives an option to use proton pump inhibitors (omeprazole or rabeprazole 20 mg daily) in combination with prokinetic (domperidone 30 mg daily). Fixed drug combination of omeprazole 20 mg and modified-release domperidone 30 mg/daily (Omez® DSR) is medically reasonable. Conclusion: The introduction of this recommendation into clinical practice will help clinicians to prevent diagnostic mistakes, unreasonable use of expensive diagnostic examinations and inappropriate treatment leads to improvement in the overall prognosis and quality of life for the patients.Цель. Представить рекомендации диагностики и лечения пациентов с симптомами диспепсии на этапе амбулаторно-поликлинической помощи, обобщающие зарубежный и отечественный опыт ведения данной категории больных. Основная цель рекомендаций - помочь терапевту и врачу общей практики (ВОП) на амбулаторном этапе принять правильное решение о тактике ведения больного, и в максимально короткий срок поставить правильный диагноз, а также вовремя выявить у пациента наличие онкологической патологии. Основные положения. Около 40% обращений пациентов на амбулаторно-поликлиническом приеме в России связано с симптомами диспепсии. Врач, в первую очередь, должен исключить наличие «тревожных признаков», которые требуют незамедлительного дополнительного обследования пациента, привлечения хирурга и/или других специалистов и госпитализации больного. Доктор должен иметь онкологическую настороженность, особенно, при обращении пациентов в возрасте 45 лет и старше, так как ранняя диагностика злокачественных новообразований (ЗНО) зависит главным образом от онкологической настороженности терапевтов, врачей общей практики и их знаний, дальнейшей тактики в отношении больного. Эзофагогастродуоденоскопия и тесты на H. pylori являются обязательными методами исследования на этапе диагностического поиска и позволяют исключить органические заболевания пищевода и желудка, наличие онкологии. До получения результатов эндоскопического исследования следует выставлять предварительный диагноз «Диспепсия Неуточненная» и шифровать под рубрикой МКБ-10 К 31.9 (болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки неуточненная). После исключения «тревожных признаков» терапия диспепсии проводится согласно Приказу МЗ РФ № 248 и включает назначение ингибиторов протонной помпы (омепразол или рабепразол 20 мг/сут) в комбинации с прокинетиком (домперидон 30 мг/сут). Оправдано применение фиксированной комбинации омепразола 20 мг с домперидоном модифицированного высвобождения 30 мг/сут (Омез® ДСР). Заключение. Внедрение рекомендаций в клиническую практику поможет врачу избежать ошибок при постановке диагноза, применения необоснованных и нередко дорогостоящих методов обследования, нерационального лечения, что позволит улучшить прогноз и качество жизни пациентов