Оценка метода конфокальной лазерной эндомикроскопии для диагностики альвеолярного протеиноза

Introduction. Probe-based confocal laser endomicroscopy (pCLE) of distal airways is a new technology allowing visualization of cells and structures that have autofluorescence. Endomicroscopic features of a number of rare lung diseases including pulmonary alveolar proteinosis (PAP) has not been yet investigated. The purpose of the study was to describe endomicroscopic features of PAP before and after the whole lung lavage (WLL). Methods. pCLE was performed during bronchoscopy in 6 PAP patients before and after the WLL. In certain lung segments, pCLE was done under the HRCT control. More than 1300 endomicroscopic images have been evaluated using a semiquantitative method. Results. We found floating fluorescent amorphous aggregates sticking with alveolar macrophages in all the patients. These changes reduced after the WLL. pCLE allowed to reveal PAP characteristic features not only in lung segments with «crazy paving» HRCT sign but also in lung zones without any HRCT changes. Conclusions. pCLE can detect specific PAP features both at presence and absence of HRCT signs that confirms diffuse injury of the lung parenchyma. pCLE could be a helpful tool for diagnosis and assessment of treatment efficacy in patients with PAP.Актуальность. Конфокальная лазерная эндомикроскопия нижних дыхательных путей (КЛЭМ) – новая технология, позволяющая визуализировать клетки и структуры, обладающие свойством аутофлюоресценции. Эндомикроскопическая картина ряда редких заболеваний легких, включая альвеолярный протеиноз (АП), до настоящего времени остается неизученной.Цель. Определение эндомикроскопических особенностей АП до и после тотального бронхоальвеолярного лаважа (тБАЛ).Материалы и методы. КЛЭМ выполнялась во время бронхоскопии пациентам (n = 6), страдающим АП, до и после тБАЛ. В определенных легочных сегментах КЛЭМ производилась под контролем компьютерной томографии высокого разрешения (КТВР). Проводилась полуколичественная оценка внутриальвеолярных включений на #≥ 1 300 качественных эндомикроскопических изображениях.Результаты. У всех пациентов обнаружены следующие изменения: флотирующие флюоресцентные аморфные массы, слипающиеся в просвете альвеол в конгломераты с альвеолярными макрофагами. Эти признаки становились менее выраженными после тБАЛ. При КЛЭМ выявлены характерные для АП альвеолярные включения не только в сегментах в виде «булыжной мостовой», но также и в участках без каких-либо изменений на КТВР.Выводы. При помощи КЛЭМ у больных АП выявляются характерные признаки заболевания как при наличии, так и в отсутствие изменений на КТВР, что свидетельствует о диффузном поражении паренхимы легких. КЛЭМ – полезный инструмент для диагностики и оценки эффективности лечения пациентов с АП

Эффекты ингаляционного и внутривенного введения аллогенных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга в блеомицин-индуцированной модели легочного фиброза у кроликов

Aim: to perform a comparative analysis of the effi cacy of the inhaled and intravenous delivery of equivalent doses of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs) in rabbits according to the standard model of bleomycin pulmonary fi brosis.Materials and methods. After bronchoscopic instillation of bleomycin, 5 rabbits received intravenous transplantation of 2 × 106 allogeneic BMMSCs, other 5 rabbits – 2 × 107 MSCs inhaled via compressor nebulizer; control healthy and bleomycin group included 5 animals each.Results. Both groups treated with BMMSCs had a signifi cantly lower Ashcroft fi brosis index than the bleomycin control group. Expression of collagen in lung tissue in all groups with bleomycin injury was superior to healthy controls, but in animals underwent intravenous BMMSC transplantation collagen score was 0.74 points, and in inhaled treated group – 0.51 points, while in bleomycin controls – 2.1 point. Levels of TNF-α and TGF-β1 in BAL fl uids tended to decrease in treatment groups, but did not differ signifi cantly from control. A similar picture was observed in the cytological analysis of BAL.Conclusion. In general, both methods of delivering of BMMSCs to the lungs demonstrated similar therapeutic effects in inhibiting the development of experimental fi brosis, indicating that both intravenous and inhalational way of introduction can be used for subsequent clinical studies. Проведен сравнительный анализ эффективности ингаляционного и внутривенного пути доставки эквивалентных доз мезенхимальных стромальных клеток костного мозга у кроликов на стандартной модели блеомицинового легочного фиброза. После бронхоскопической инсталляции блеомицина в заднюю правую долю 5 кроликов получили внутривенную трансплантацию 2 × 106 аллогенных МСК, 5 – 2 × 107 МСК ингаляционно через компрессорный небулайзер; по 5 животных использовались в качестве здорового и блеомицинового контроля без лечения.Результаты. Обе группы, получавшие лечение МСК, имели достоверно более низкий индекс фиброза по морфометрической шкале Эшкрофта, чем контрольная группа блеомицинового фиброза. Экспрессия коллагена в ткани легких была существенно выше во всех группах с блеомициновой травмой, но у животных, подвергшихся внутривенной трансплантации МСК, она составила 0,79 балла, а при ингаляционном введении – 0,51 балла, тогда как группа блеомицина без лечения – 2,1 балла. Уровни TNF-α и TGF-β1в жидкости БАЛ имели тенденцию к уменьшению в группах лечения, но достоверно не различались от контроля. Похожая картина имела место при цитологическом анализе БАЛ.Выводы. В целом оба метода доставки клеточного материала в легкие продемонстрировали сходные терапевтические эффекты в отношении сдерживания развития экспериментального фиброза, существенно не отличаясь между собой, что свидетельствует о возможности использования как внутривенного, так и ингаляционного пути введения для последующих клинических исследований.

Effects of inhalation and intravenous administration of allogeneic mesenchymal bone marrow stromal cells in a bleomycin-induced model of pulmonary fibrosis in rabbits

Aim: to perform a comparative analysis of the effi cacy of the inhaled and intravenous delivery of equivalent doses of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs) in rabbits according to the standard model of bleomycin pulmonary fi brosis.Materials and methods. After bronchoscopic instillation of bleomycin, 5 rabbits received intravenous transplantation of 2 × 106 allogeneic BMMSCs, other 5 rabbits – 2 × 107 MSCs inhaled via compressor nebulizer; control healthy and bleomycin group included 5 animals each.Results. Both groups treated with BMMSCs had a signifi cantly lower Ashcroft fi brosis index than the bleomycin control group. Expression of collagen in lung tissue in all groups with bleomycin injury was superior to healthy controls, but in animals underwent intravenous BMMSC transplantation collagen score was 0.74 points, and in inhaled treated group – 0.51 points, while in bleomycin controls – 2.1 point. Levels of TNF-α and TGF-β1 in BAL fl uids tended to decrease in treatment groups, but did not differ signifi cantly from control. A similar picture was observed in the cytological analysis of BAL.Conclusion. In general, both methods of delivering of BMMSCs to the lungs demonstrated similar therapeutic effects in inhibiting the development of experimental fi brosis, indicating that both intravenous and inhalational way of introduction can be used for subsequent clinical studies

Mobile Complexes of the Specialized Anti-Epidemic Teams (SAET) of the Rospotrebnadzor as an Effective Tool in the Implementation of Measures to Counter New Coronavirus Infection COVID-19

The mobile complexes of the specialized anti-epidemic teams (SAET) of the Rospotrebnadzor (mounted on the platform of auto chassis) have been actively involved in implementation of operational measures to counter COVID‑19 in the Russian Federation, aimed at management and conducting of diagnostic studies. Analysis of the activities of mobile SAET in Moscow and Makhachkala made it possible to formulate the basic principles of organizing their work in the most difficult period of negative development of the situation, increasing incidence and insufficient readiness of laboratory bases for mass research: tactics of advance actions, flexibility in using the potential of SAET mobile complexes, monitoring over the implementation of anti-contamination measures at all stages of PCR analysis and the development of a consultative and methodological (training) aspects of activities of the team specialists. The use of mobile SAETs of the Rospotrebnadzor once again demonstrated their significance as a universal tool to counter epidemics of infectious diseases

High-resolution analysis of Drosophila heterochromatin organization using SuUR Su(var)3-9 double mutants

The structural and functional analyses of heterochromatin are essential to understanding how heterochromatic genes are regulated and how centromeric chromatin is formed. Because the repetitive nature of heterochromatin hampers its genome analysis, new approaches need to be developed. Here, we describe how, in double mutants for Su(var)3-9 and SuUR genes encoding two structural proteins of heterochromatin, new banded heterochromatic segments appear in all polytene chromosomes due to the strong suppression of under-replication in pericentric regions. FISH on salivary gland polytene chromosomes from these double mutant larvae allows high resolution of heterochromatin mapping. In addition, immunostaining experiments with a set of antibodies against euchromatic and heterochromatic proteins reveal their unusual combinations in the newly appeared segments: binding patterns for HP1 and HP2 are coincident, but both are distinct from H3diMetK9 and H4triMetK20. In several regions, partial overlapping staining is observed for the proteins characteristic of active chromatin RNA Pol II, H3triMetK4, Z4, and JIL1, the boundary protein BEAF, and the heterochromatin-enriched proteins HP1, HP2, and SU(VAR)3-7. The exact cytological position of the centromere of chromosome 3 was visualized on salivary gland polytene chromosomes by using the centromeric dodeca satellite and the centromeric protein CID. This region is enriched in H3diMetK9 and H4triMetK20 but is devoid of other proteins analyzed