Papel do eixo simpático-CRH periférico-histamina na função imunológica de macrófagos de rato

Os componentes do eixo simpático-CRH (hormônio liberador de corticotropina) periférico-histamina atuam uns sobre os outros e podem influenciar de maneiras distintas o sistema imunológico tanto in vivo quanto in vitro, embora muitas vezes seus efeitos não sejam tão claros. Para avaliar o efeito da epinefrina, norepinefrina, histamina e CRH sobre o sistema imune inato in vitro, macrófagos peritoneais de ratos Wistar machos (200g – 250g, n=8) foram isolados e cultivados na presença de partículas de zimosan previamente opsonizadas por 30 minutos. Avaliou-se o efeito dos componentes do eixo nas suas concentrações fisiológicas com ou sem a coestimulação das células com forbol-miristato acetato (PMA) sobre a atividade fagocítica dos macrófagos. O número de partículas fagocitadas por cada célula num total de 50 células foi contado em microscópio de contraste de fase em aumento de 640X. Os resultados de fagocitose foram expressos pelo índice de Hishikawa. O efeito sobre a expressão de óxido nítrico sintase induzível (iNOS) foi verificado após 6 horas de cultura dos macrófagos em contato com os componentes estudados através de Western Blot. Todos os tratamentos foram capazes de aumentar o imunoconteúdo de iNOS. Sobre a fagocitose, a epinefrina e a norepinefrina tiveram efeitos sinérgicos ao PMA (aumentando a fagocitose em 63% e 72%, respectivamente) assim como a histamina, embora esta também tenha apresentado efeito menor (46% de aumento). O CRH não alterou o índice de fagocitose de zimosan. Enquanto o CRH parece ter influência somente em médio prazo sobre a atividade imunológica (expressão proteica), as catecolaminas e a histamina mostraram efeitos também em curto prazo (fagocitose)

Papel do eixo simpático-CRH periférico-histamina na função imunológica de macrófagos de rato

Os componentes do eixo simpático-CRH (hormônio liberador de corticotropina) periférico-histamina atuam uns sobre os outros e podem influenciar de maneiras distintas o sistema imunológico tanto in vivo quanto in vitro, embora muitas vezes seus efeitos não sejam tão claros. Para avaliar o efeito da epinefrina, norepinefrina, histamina e CRH sobre o sistema imune inato in vitro, macrófagos peritoneais de ratos Wistar machos (200g – 250g, n=8) foram isolados e cultivados na presença de partículas de zimosan previamente opsonizadas por 30 minutos. Avaliou-se o efeito dos componentes do eixo nas suas concentrações fisiológicas com ou sem a coestimulação das células com forbol-miristato acetato (PMA) sobre a atividade fagocítica dos macrófagos. O número de partículas fagocitadas por cada célula num total de 50 células foi contado em microscópio de contraste de fase em aumento de 640X. Os resultados de fagocitose foram expressos pelo índice de Hishikawa. O efeito sobre a expressão de óxido nítrico sintase induzível (iNOS) foi verificado após 6 horas de cultura dos macrófagos em contato com os componentes estudados através de Western Blot. Todos os tratamentos foram capazes de aumentar o imunoconteúdo de iNOS. Sobre a fagocitose, a epinefrina e a norepinefrina tiveram efeitos sinérgicos ao PMA (aumentando a fagocitose em 63% e 72%, respectivamente) assim como a histamina, embora esta também tenha apresentado efeito menor (46% de aumento). O CRH não alterou o índice de fagocitose de zimosan. Enquanto o CRH parece ter influência somente em médio prazo sobre a atividade imunológica (expressão proteica), as catecolaminas e a histamina mostraram efeitos também em curto prazo (fagocitose)

Short-term but not long-term hypoglycaemia enhances plasma levels and hepatic expression of HSP72 in insulin-treated rats : an effect associated with increased IL-6 levels but not with IL-10 or TNF–α

The inducible expression of the 70-kDa heat shock proteins (HSP70) is associated with homeostatically stressful situations. Stresses involving sympathetic nervous system (SNS) activation, including α1-adrenergic agonists and physical exercise, are capable of inducing HSP70 expression and release of the HSP70 inducible form, HSP72. However, whether hypoglycaemia is capable of influencing HSP70 status under a stressful situation such as insulin-induced hypoglycaemia (IIH), which also involves SNS activation, is unsettled. Hence, we decided to investigate whether the predominant signal for HSP70 expression and delivery into the blood comes from either low glucose, high insulin, or both during short-term IIH (STIIH) and long-term IIH (LTIIH). Our data indicated that low glucose level (up to 1.56 ± 0.14 mM), but not insulin, is the triggering factor responsible for a dramatic rise in HSP72 plasma concentrations (from 0.15 ± 0.01 in fed state to 0.77 ± 0.13 ng/mL during hypoglycaemic episodes). This was observed in parallel with up to 7-fold increases in interleukin-6 (IL–6) but not interleukin-10 (IL–10) or tumour necrosis factor-α (TNF–α) at STIIH. Together, the observations may suggest that HSP72 is released under hypoglycaemic conditions as a part of the homeostatic stress response, whereas at long-term, both hypoglycaemia and insulin may influence HSP72 expression in the liver, but not in kidneys. Secreted extracellular HSP72 (eHSP72) may be purely a danger signal to all the tissues of the body for the enhancement of immune and metabolic surveillance state or actively participates in glycaemic control under stressful situations

Premature activation of Cdk1 leads to mitotic events in S phase and embryonic lethality

Cell cycle regulation, especially faithful DNA replication and mitosis, are crucial to maintain genome stability. Cyclin-dependent kinase (CDK)/cyclin complexes drive most processes in cellular proliferation. In response to DNA damage, cell cycle surveillance mechanisms enable normal cells to arrest and undergo repair processes. Perturbations in genomic stability can lead to tumor development and suggest that cell cycle regulators could be effective targets in anticancer therapy. However, many clinical trials ended in failure due to off-target effects of the inhibitors used. Here, we investigate in vivo the importance of WEE1- and MYT1-dependent inhibitory phosphorylation of mammalian CDK1. We generated Cdk1(AF) knockin mice, in which two inhibitory phosphorylation sites are replaced by the non-phosphorylatable amino acids T14A/Y15F. We uncovered that monoallelic expression of CDK1(AF) is early embryonic lethal in mice and induces S phase arrest accompanied by gamma H2AX and DNA damage checkpoint activation in mouse embryonic fibroblasts (MEFs). The chromosomal fragmentation in Cdk1(AF) MEFs does not rely on CDK2 and is partly caused by premature activation of MUS81-SLX4 structure-specific endonuclease complexes, as well as untimely onset of chromosome condensation followed by nuclear lamina disassembly. We provide evidence that tumor development in liver expressing CDK1(AF) is inhibited. Interestingly, the regulatory mechanisms that impede cell proliferation in CDK1(AF) expressing cells differ partially from the actions of the WEE1 inhibitor, MK-1775, with p53 expression determining the sensitivity of cells to the drug response. Thus, our work highlights the importance of improved therapeutic strategies for patients with various cancer types and may explain why some patients respond better to WEE1 inhibitors