Modulation of calcium channels functional expression by testosterone at neuromuscular synapse

En la unión neuromuscular (UNM) de mamíferos adultos la liberación de neurotransmisor frente a un estímulo nervioso se produce por la entrada de ca^2+ a través de canales de calcio dependientes de voltaje (CCDV) de tipo PIQ exclusivamente. En la UNM del levator ani (LA), en cambio, la liberación evocada de neurotransmisor se produce por la entrada de ca^2+ por tres CCDV diferentes: el PIQ el N y el R. Como la UNM del LA es altamente dependiente de la testosterona tanto para su supervivencia como para su mantenimiento, en este trabajo se estudió el efecto de la gonadectomía sobre el perfil farmacológico de los canales que median la liberación en esta sinapsis. Los resultados indican que la gonadectomía desacopla a los canales N y R de la liberación de neurotransmisor, mientras que la suplementación con testosterona de 10s animales gonadectomizados recupera la función de estos canales. Estudios inmunohistoquímicos analizados con microscopía confocal nos han permitido estimar la cantidad de canales N y R presentes en cada situación fisiológica (control, gonadectomía y gonadectomía con reemplazo exógeno de testosterona): los resultados indican que no hay modificaciones significativas en la cantidad de canales presentes en la UNM del LA en cualquiera de estas condiciones. Esto nos permite sugerir que la modulación por testosterona observada no obedece a un efecto genómico de la hormona sobre la expresión de las subunidades principales de los canales N y R.Neurotransmitter release evoked by neural stimulation at adult mammals neuromuscular junction (NMJ) is sustained by calcium influx through calcium dependent calcium channels (VDCC) of PIQ-type only. In contrast, at levator ani (LA) NMJ neural evoked transmitter release is caused by calcium influx through three different types of VDCC: PIQ, N and R. As the LA NMJ is highly dependent on testosterone as much for their survival as for their maintenance, we have studied the effect of gonadectomy on the pharmacological profile of calcium channels that mediates transmitter release at this synapse. These results indicate that gonadectomy uncouples N and R channels to transmitter release whereas testosterone supply to gonadectomized animals recovers the function of these channels. Immunohistochemistry studies analyzed with confocal microscopy in order to estimate the amount of N and R calcium channels indicate that there are no significant modifications in the amount of channels presents in LA NMJ in each experimental condition (control, gonadectomy and gonadectomy with exogenous replacement of testosterone). These results indicate that modulation by testosterone is not a genomic effect on the expression of N and R channels main subunit.Fil: Nudler, Silvana Iris. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Nitric oxide sensitive-guanylyl cyclase subunits expression changes during estrous cycle in anterior pituitary glands

17β-Estradiol (E2) exerts inhibitory actions on the nitric oxide pathway in rat adult pituitary glands. Previously, we reported that in vivo E2 acute treatment had opposite effects on soluble guanylyl cyclase (sGC) subunits, increasing α1- and decreasing β1-subunit protein and mRNA expression and decreasing sGC activity in immature rats. Here we studied the E2 effect on sGC protein and mRNA expression in anterior pituitary gland from adult female rats to address whether the maturation of the hypothalamus-pituitary axis influences its effects and to corroborate whether these effects occur in physiological conditions such as during estrous cycle. E2 administration causes the same effect on sGC as seen in immature rats, and these effects are estrogen receptor dependent. These results suggest that E2 is the main effector of these changes. Since the sGC α-subunit increases while the sGC activity decreases, we studied if other less active isoforms of the sGC α-subunit are expressed. Here we show for the first time that sGCα2 and sGCα2 inhibitory (α2i) isoforms are expressed in this gland, but only sGCα2i mRNA increased after E2 acute treatment. Finally, to test whether E2 effects take place under a physiological condition, sGC subunit expression was monitored over estrous cycle. sGCα1, -β1, and -α2i fluctuate along estrous cycle, and these changes are directly related with E2 level fluctuations rather than to NO level variations. These findings show that E2 physiologically regulates sGC expression and highlight a novel mechanism by which E2 downregulates sGC activity in rat anterior pituitary gland. Copyright © 2009 the American Physiological Society.Fil: Cabilla, Jimena Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Ronchetti, Sonia Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Nudler, Silvana Iris. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Miler, Eliana Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Quinteros, Alnilan Fernanda. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaFil: Duvilanski, Beatriz Haydee. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; Argentin

Angiotensin II-upregulated MAP kinase phosphatase-3 modulates FOXO1 and p21 in adrenocortical H295R cells

MAPK phosphatases (MKP) downregulate the activity of mitogen-activated protein kinases (MAPK), such asERK1/2, and modulate the processes regulated by these kinases. ERK1/2 participate in a wide range of processesincluding tissue-specific hormone-stimulated steroidogenesis. H295R cells are a suitable model for the study ofhuman adrenal cortex functions, particularly steroid synthesis, and respond to angiotensin II (Ang II) triggeringERK1/2 phosphorylation in a transient fashion. MKP-3 dephosphorylates ERK1/2 and, as recently reported,forkhead box protein 1 (FOXO1). Here, we analyzed MKP-3 expression in H295R cells and its putative regulationby Ang II. Results showed the expression of MKP-3 full length (L) and a short splice variant (S), and the upregulationof both isoforms by Ang II. L and S messenger and protein levels increased 30 min after Ang II stimulationand declined over the next 3 h, a temporal frame compatible with ERK1/2 dephosphorylation. In addition, FOXO1activation is known to include its dephosphorylation and nuclear translocation. Therefore, we analyzed the effectof Ang II on FOXO1 modulation. Ang II induced FOXO1 transient phosphorylation and translocation and also theinduction of p21, a FOXO1-dependent gene, whereas MKP-3 knock-down reduced both FOXO1 translocation andp21 induction. These data suggest that, through MKP-3, Ang II counteracts its own effects on ERK1/2 activity andalso triggers the activation of FOXO-1 and the induction of cell cycle inhibitor p21. Taken together, the currentfindings reveal the participation of MKP-3 not only in turn?off but also in turn-on signals which control importantcellular processes.Fil: Mori Sequeiros, María de Las Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Cohen Sabban, Juan Manuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Dattilo, Melina Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Mele, Pablo Gustavo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Nudler, Silvana Iris. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Mendez, Carlos Fernando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Maloberti, Paula Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Paz, Cristina del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas; Argentin

Modulation of calcium channels functional expression by testosterone at neuromuscular synapse

En la unión neuromuscular (UNM) de mamíferos adultos la liberación de neurotransmisor frente a un estímulo nervioso se produce por la entrada de ca^2+ a través de canales de calcio dependientes de voltaje (CCDV) de tipo PIQ exclusivamente. En la UNM del levator ani (LA), en cambio, la liberación evocada de neurotransmisor se produce por la entrada de ca^2+ por tres CCDV diferentes: el PIQ el N y el R. Como la UNM del LA es altamente dependiente de la testosterona tanto para su supervivencia como para su mantenimiento, en este trabajo se estudió el efecto de la gonadectomía sobre el perfil farmacológico de los canales que median la liberación en esta sinapsis. Los resultados indican que la gonadectomía desacopla a los canales N y R de la liberación de neurotransmisor, mientras que la suplementación con testosterona de 10s animales gonadectomizados recupera la función de estos canales. Estudios inmunohistoquímicos analizados con microscopía confocal nos han permitido estimar la cantidad de canales N y R presentes en cada situación fisiológica (control, gonadectomía y gonadectomía con reemplazo exógeno de testosterona): los resultados indican que no hay modificaciones significativas en la cantidad de canales presentes en la UNM del LA en cualquiera de estas condiciones. Esto nos permite sugerir que la modulación por testosterona observada no obedece a un efecto genómico de la hormona sobre la expresión de las subunidades principales de los canales N y R.Neurotransmitter release evoked by neural stimulation at adult mammals neuromuscular junction (NMJ) is sustained by calcium influx through calcium dependent calcium channels (VDCC) of PIQ-type only. In contrast, at levator ani (LA) NMJ neural evoked transmitter release is caused by calcium influx through three different types of VDCC: PIQ, N and R. As the LA NMJ is highly dependent on testosterone as much for their survival as for their maintenance, we have studied the effect of gonadectomy on the pharmacological profile of calcium channels that mediates transmitter release at this synapse. These results indicate that gonadectomy uncouples N and R channels to transmitter release whereas testosterone supply to gonadectomized animals recovers the function of these channels. Immunohistochemistry studies analyzed with confocal microscopy in order to estimate the amount of N and R calcium channels indicate that there are no significant modifications in the amount of channels presents in LA NMJ in each experimental condition (control, gonadectomy and gonadectomy with exogenous replacement of testosterone). These results indicate that modulation by testosterone is not a genomic effect on the expression of N and R channels main subunit.Fil: Nudler, Silvana Iris. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Cadmium induced-oxidative stress in pituitary gland is reversed by removing the contamination source

Cadmium (Cd2+) is one of the most important environmental contaminants and acts as an endocrine disruptor. Previously, we have demonstrated that the simultaneous administration of Cd2+ and melatonin (Mel) in drinking water impaired metal-induced oxidative stress in rat anterior pituitary gland. The aim of this study was to investigate if a treatment started after the toxic manifestations of Cd 2+ became evident could reverse the effects of the metal. Animals exposed to Cd2+ (5 parts per million [ppm], 30 days) were treated with Mel or without the metal during the next 1 or 2 months. Cd2+ exposure increased the expression of heme oxygenase-1 (HO-1), a biomarker of oxidative stress, and an a posteriori Mel treatment reversed oxidative stress induced by Cd2+. This effect was also observed 1 month after metal removal. The Cd2+-induced increase in metallothionein-1 (MT-1) and nitric oxide synthase 1 (NOS1) expression were also reversed by metal removal. In addition, serum prolactin and luteinizing hormone levels affected by Cd 2+ exposure were normalized. Considering that the manifestations of Cd2+ intoxication become evident only after a certain period of metal accumulation, these results show that metal removal is enough to reverse Cd2+ effects in anterior pituitary gland and bring to light the relevance of moving away the individual from the contamination source.Fil: Miler, Eliana Andrea. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas; Argentina; ArgentinaFil: Nudler, Silvana Iris. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas; Argentina; ArgentinaFil: Quinteros, Fernanda A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas; Argentina; ArgentinaFil: Cabilla, Jimena Paula. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas; Argentina; ArgentinaFil: Ronchetti, Sonia Alejandra. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas; Argentina; ArgentinaFil: Duvilanski, Beatriz Haydee. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas; Argentina; Argentin