Fluorescent ligands for studying neuropeptide receptors by confocal microscopy

This paper reviews the use of confocal microscopy as it pertains to the identification of G-protein coupled receptors and the study of their dynamic properties in cell cultures and in mammalian brain following their tagging with specific fluorescent ligands. Principles that should guide the choice of suitable ligands and fluorophores are discussed. Examples are provided from the work carried out in the authors' laboratory using custom synthetized fluoresceinylated or BODIPY-tagged bioactive peptides. The results show that confocal microscopic detection of specifically bound fluorescent ligands permits high resolution appraisal of neuropeptide receptor distribution both in cell culture and in brain sections. Within the framework of time course experiments, it also allows for a dynamic assessment of the internalization and subsequent intracellular trafficking of bound fluorescent molecules. Thus, it was found that neurotensin, somatostatin and mu- and delta-selective opioid peptides are internalized in a receptor-dependent fashion and according to receptor-specific patterns into their target cells. In the case of neurotensin, this internalization process was found to be clathrin-mediated, to proceed through classical endosomal pathways and, in neurons, to result in a mobilization of newly formed endosomes from neural processes to nerve cell bodies and from the periphery of cell bodies towards the perinuclear zone. These mechanisms are likely to play an important role for ligand inactivation, receptor regulation and perhaps also transmembrane signaling

Efecto de cama de pollos, subproductos de cereales y caña sobre la fisiología ruminal de ovinos

Se determinó el efecto sobre el consumo y digestibilidad aparente de niveles crecientes de cama de pollo (Cp) con harina gruesa de subproductos de maíz (Hm) o pulitura de arroz (Pa) y bagacillo de caña amonificado (40%, Ba), en raciones para corderos en crecimiento en confinamiento total. Se realizó un experimento en un arreglo factorial 2x4 en diseño de cuadrado latino con 8 corderos canulados en el rumen, incorporando Hm o Pa (48, 39, 30 y 21%, en ambos casos) y Cp (11,4; 20,4; 29,4 y 38,4%). Las raciones con Cp y Hm fueron más consumidas que las de Cp y Pa (10 a 12,1% del peso metabólico en materia seca (MS), para Hm vs. 7,6 a 9,3% para Pa) y para la materia orgánica (MO) 8,1 a 8,5% del peso metabólico para Hm y 5,8 a 6,4% para Pa; respecto a la digestibilidad aparente (DA) se obtuvo un 34,2 a 43% de la MS y 67,8 a 67,1% de la MO para raciones con Hm vs. 30,5 a 37,2% de la MS y 65,5 a 66,1% de la MO para raciones con Pa. Se apreció que el pH y el nitrógeno amoniacal, no alcanzaron los valores indicativos de acidosis ni de intoxicación con amoniaco, lo cual se correspondió con valores normales de su fisiología sanguínea para raciones con Cp y Hm. Los resultados indican que Hm y Ba en raciones con Cp permitieron un consumo y digestibilidad de los nutrientes dentro de rangos normales para corderos, sin riesgos para la salud del animal, lo cual no ocurrió con las raciones que contenían Pa y Cp

Traitement de l'hypertension portale. Recommandations. Club Francophone pour l'Etude de l'Hypertension Portale.

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