Clonagem e sequenciamento parcial do gene para o transporte de amônio em Herbaspirillum seropedicae

Orientadora: Leda Satie ChubatsuMonografia(Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Curso de Graduaçao em Ciencias BiológicasResumo : Herbaspirillum seropedicae é um microrganismo diazotrofo e endofítico, encontrado em associação com diversas gramíneas de interesse agrícola, como cana-de-açúcar, arroz, sorgo e milho. Em vista do alto gasto energético envolvido na redução do N2 a NH3, o processo de fixação de nitrogênio é altamente regulado pelos níveis de oxigênio e amônia. Existem evidências de que a captação de amônio para dentro da célula ocorre de forma ativa, através de carreadores específicos presentes na membrana celular, conhecidos genericamente como proteínas Amt. O objetivo do nosso trabalho é a identificação do gene relacionado ao transporte de íons amônio em H. seropedicae. Seqüências de aminoácidos de possíveis transportadores de amônio de Escherichía co/i, Mycobacterium tubercu/osis e Bacíllus subtilis foram analisadas e as regiões mais conservadas foram escolhidas para o planejamento de oligonucleotídeos degenerados que foram utilizados como "primers" numa reação de peR utilizando o DNA genômico de H. seropedicae como molde. O produto obtido na reação de peR foi clonado no vetor pTZ19R, originando o plasmídeo recombinante pLN1. O inserto foi sequenciado e submetido a comparação com o banco de dados, mostrando-se bastante similar as seqüências de transportadores de amônio de diversos organismos, sugerindo a presença de um gene homólogo ao transportador de amônio em H. seropedicae. Este fragmento está sendo utilizado para a clonagem do gene amt compieto deste organismo

Role of PII proteins in nitrogen fixation control of Herbaspirillum seropedicae strain SmR1

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>The PII protein family comprises homotrimeric proteins which act as transducers of the cellular nitrogen and carbon status in prokaryotes and plants. In <it>Herbaspirillum seropedicae</it>, two PII-like proteins (GlnB and GlnK), encoded by the genes <it>glnB </it>and <it>glnK</it>, were identified. The <it>glnB </it>gene is monocistronic and its expression is constitutive, while <it>glnK </it>is located in the <it>nlmAglnKamtB </it>operon and is expressed under nitrogen-limiting conditions.</p> <p>Results</p> <p>In order to determine the involvement of the <it>H. seropedicae glnB </it>and <it>glnK </it>gene products in nitrogen fixation, a series of mutant strains were constructed and characterized. The <it>glnK^-</it>mutants were deficient in nitrogen fixation and they were complemented by plasmids expressing the GlnK protein or an N-truncated form of NifA. The nitrogenase post-translational control by ammonium was studied and the results showed that the <it>glnK </it>mutant is partially defective in nitrogenase inactivation upon addition of ammonium while the <it>glnB </it>mutant has a wild-type phenotype.</p> <p>Conclusions</p> <p>Our results indicate that GlnK is mainly responsible for NifA activity regulation and ammonium-dependent post-translational regulation of nitrogenase in <it>H. seropedicae</it>.</p

Identificação e caracterização do operon orf1glnKamtB e do gene amtH de Herbaspirillum seropedicae /

Orientadora : Leda Satie ChubatsuTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Defesa: Curitiba, 2006Inclui bibliografia e anexo