Einfluss der Oberflächenmarkerexpression auf Leukozyten von Hodentumorpatienten in fortgeschrittenen Stadien auf das rezidivfreie Überleben nach Hochdosischemotherapie und autologer Stammzelltransplantation

Hodentumore stellen die häufigste Tumorentität bei 15- bis 45-jährigen Männern dar. Auch in fortgeschrittenen Stadien hat die Erkrankung mit einer Überlebensrate von 70-80% eine vergleichsweise gute Prognose. Um die Prognose insbesondere in diesen Stadien besser abschätzen zu können, wurde von der „International Germ Cell Collaborative Group“ ein Punktesystem entwickelt (IPF-Score). In den letzten Jahren wurde intensiv auf dem Gebiet der Tumorimmunologie geforscht. Für Zellen des Nicht-kleinzelligen Lungenkarzinoms stellte sich heraus, dass insbesondere die Expression von Proteinen, die an der Leukozytenadhäsion beteiligt sind, einen signifikanten Einfluss auf die Rezidivhäufigkeit der Patienten haben. Des Weiteren korrelierte die Expression des Enzyms β-1,4-Galactosyltransferase (B4GALT1) signifikant mit der Rezidivwahrscheinlichkeit. Für testikuläre Keimzelltumore ist bislang wenig über tumorimmunologische Zusammenhänge bekannt. Um jene zu beleuchten, sollte in dieser Arbeit der Einfluss sowohl von B4GALT1, als auch von an der Leukozytenadhäsion beteiligten Oberflächenmolekülen auf die Rezidivwahrscheinlichkeit der Patienten untersucht werden. Dazu wurden drei an der Leukozytenadhäsion beteiligte Oberflächenmarker ausgewählt. Diese waren das Thrombozyten-Endothelzellen-Adhäsionsmolekül 1 (englisch platelet endothelial cell adhesion molecule 1, PECAM1), das α4-β1-Intergrin (englisch very late antigen 4, VLA-4) und der CXC Chemokin Rezeptor 4 (CXCR4). Des Weiteren wurde die Expression von IL10 bestimmt, welches durch immunregulatorische Funktionen ebenfalls Einfluss auf die Tumorkontrolle hat. Die Untersuchungen wurden im Gegensatz zu den oben genannten an den Leukozyten, nicht den Tumorzellen durchgeführt, um die tumorimmunologischen Zusammenhänge von anderer Seite zu betrachten. Bei den Patienten handelte es sich um 46 Hodentumorpatienten in fortgeschrittenen Stadien, die allesamt eine Hochdosischemotherapie mit anschließender autologer Stammzelltransplantation erhalten hatten. Im Rahmen der Stammzellapharese waren Rückstellproben eingefroren worden. In die Verwendung dieser zu Forschungszwecken hatten die Patienten schriftlich eingewilligt. Die Oberflächenexpression von PECAM-1, VLA-4 und CXCR4 wurde durchflusszytometrisch gemessen. Außerdem wurden die Zellen in die Fraktionen Monozyten, T-Lymphozyten und übrige mononukleären Zellen sortiert. Mittels quantitativer Polymerase-Kettenreaktion wurde die mRNA-Expression von B4GALT1 und IL10 bestimmt. Für die Analyse der Daten wurde der IPF-Score berechnet und die Patienten nach dem weiteren Krankheitsverlauf in die Gruppen „kein Rezidiv“, „Frührezidiv“ und „Spätrezidiv“ eingeteilt. Die Analyse der Oberflächenmarkerexpression zeigte keine signifikanten Unterschiede zwischen den drei Gruppen, weder auf Monozyten noch auf T-Lymphoyzten. Die Expression von B4GALT1 war auf T-Lymphozyten, nicht jedoch auf Monozyten oder der Gesamtpopulation, der Gruppe „kein Rezidiv“ signifikant höher als in den beiden anderen Gruppen. Eine Kaplan-Meier Analyse zeigte weiterhin, dass diejenigen Patienten mit einer hohen B4GALT1-Expression in T-Zellen ein signifikant längeres Rezidiv freies Überleben hatten. Die hier vorliegende Untersuchung fand an einer limitierten Anzahl von aufgetauten Patientenproben statt. Um die Ergebnisse zu validieren, sind in Zukunft noch weitere Untersuchungen, beispielsweise als prospektive Studie, nötig.

Broad genomic workup including optical genome mapping uncovers a DDX3X: MLLT10 gene fusion in acute myeloid leukemia

In acute myeloid leukemia (AML), treatment decisions are currently made according to the risk classification of the European LeukemiaNet (ELN), which is based on genetic alterations. Recently, optical genome mapping (OGM) as a novel method proved to yield a genome-wide and detailed cytogenetic characterization at the time of diagnosis. A young female patient suffered from a rather unexpected aggressive disease course under FLT3 targeted therapy in combination with induction chemotherapy. By applying a “next-generation diagnostic workup“ strategy with OGM and whole-exome sequencing (WES), a DDX3X: MLLT10 gene fusion could be detected, otherwise missed by routine diagnostics. Furthermore, several aspects of lineage ambiguity not shown by standard diagnostics were unraveled such as deletions of SUZ12 and ARPP21 , as well as T-cell receptor recombination. In summary, the detection of this particular gene fusion DDX3X: MLLT10 in a female AML patient and the findings of lineage ambiguity are potential explanations for the aggressive course of disease. Our study demonstrates that OGM can yield novel clinically significant results, including additional information helpful in disease monitoring and disease biology

Einfluss der Oberflächenmarkerexpression auf Leukozyten von Hodentumorpatienten in fortgeschrittenen Stadien auf das rezidivfreie Überleben nach Hochdosischemotherapie und autologer Stammzelltransplantation

Hodentumore stellen die häufigste Tumorentität bei 15- bis 45-jährigen Männern dar. Auch in fortgeschrittenen Stadien hat die Erkrankung mit einer Überlebensrate von 70-80% eine vergleichsweise gute Prognose. Um die Prognose insbesondere in diesen Stadien besser abschätzen zu können, wurde von der „International Germ Cell Collaborative Group“ ein Punktesystem entwickelt (IPF-Score). In den letzten Jahren wurde intensiv auf dem Gebiet der Tumorimmunologie geforscht. Für Zellen des Nicht-kleinzelligen Lungenkarzinoms stellte sich heraus, dass insbesondere die Expression von Proteinen, die an der Leukozytenadhäsion beteiligt sind, einen signifikanten Einfluss auf die Rezidivhäufigkeit der Patienten haben. Des Weiteren korrelierte die Expression des Enzyms β-1,4-Galactosyltransferase (B4GALT1) signifikant mit der Rezidivwahrscheinlichkeit. Für testikuläre Keimzelltumore ist bislang wenig über tumorimmunologische Zusammenhänge bekannt. Um jene zu beleuchten, sollte in dieser Arbeit der Einfluss sowohl von B4GALT1, als auch von an der Leukozytenadhäsion beteiligten Oberflächenmolekülen auf die Rezidivwahrscheinlichkeit der Patienten untersucht werden. Dazu wurden drei an der Leukozytenadhäsion beteiligte Oberflächenmarker ausgewählt. Diese waren das Thrombozyten-Endothelzellen-Adhäsionsmolekül 1 (englisch platelet endothelial cell adhesion molecule 1, PECAM1), das α4-β1-Intergrin (englisch very late antigen 4, VLA-4) und der CXC Chemokin Rezeptor 4 (CXCR4). Des Weiteren wurde die Expression von IL10 bestimmt, welches durch immunregulatorische Funktionen ebenfalls Einfluss auf die Tumorkontrolle hat. Die Untersuchungen wurden im Gegensatz zu den oben genannten an den Leukozyten, nicht den Tumorzellen durchgeführt, um die tumorimmunologischen Zusammenhänge von anderer Seite zu betrachten. Bei den Patienten handelte es sich um 46 Hodentumorpatienten in fortgeschrittenen Stadien, die allesamt eine Hochdosischemotherapie mit anschließender autologer Stammzelltransplantation erhalten hatten. Im Rahmen der Stammzellapharese waren Rückstellproben eingefroren worden. In die Verwendung dieser zu Forschungszwecken hatten die Patienten schriftlich eingewilligt. Die Oberflächenexpression von PECAM-1, VLA-4 und CXCR4 wurde durchflusszytometrisch gemessen. Außerdem wurden die Zellen in die Fraktionen Monozyten, T-Lymphozyten und übrige mononukleären Zellen sortiert. Mittels quantitativer Polymerase-Kettenreaktion wurde die mRNA-Expression von B4GALT1 und IL10 bestimmt. Für die Analyse der Daten wurde der IPF-Score berechnet und die Patienten nach dem weiteren Krankheitsverlauf in die Gruppen „kein Rezidiv“, „Frührezidiv“ und „Spätrezidiv“ eingeteilt. Die Analyse der Oberflächenmarkerexpression zeigte keine signifikanten Unterschiede zwischen den drei Gruppen, weder auf Monozyten noch auf T-Lymphoyzten. Die Expression von B4GALT1 war auf T-Lymphozyten, nicht jedoch auf Monozyten oder der Gesamtpopulation, der Gruppe „kein Rezidiv“ signifikant höher als in den beiden anderen Gruppen. Eine Kaplan-Meier Analyse zeigte weiterhin, dass diejenigen Patienten mit einer hohen B4GALT1-Expression in T-Zellen ein signifikant längeres Rezidiv freies Überleben hatten. Die hier vorliegende Untersuchung fand an einer limitierten Anzahl von aufgetauten Patientenproben statt. Um die Ergebnisse zu validieren, sind in Zukunft noch weitere Untersuchungen, beispielsweise als prospektive Studie, nötig.

Survival, prognostic factors, hospitalization time and clinical performance status after first cerebral relapse or progression in 54 patients with primary CNS lymphoma not eligible for high dose chemotherapy: a retrospective analysis

Abstract Background Treatment of relapsed or refractory primary CNS lymphoma (r/r PCNSL) is difficult, particularly in patients not eligible for high dose chemotherapy with autologous stem cell transplantation (HDC-ASCT). No standard treatment has been defined for these patients yet. Methods We retrospectively analyzed survival, prognostic factors, hospitalization time and Karnofsky performance score (KPS) before and after treatment in 54 r/r PCNSL patients with isolated cerebral relapse or progression (n = 23 refractory, n = 31 relapsed) not eligible for HDC-ASCT, who received heterogenous salvage treatments. Results Treatments were temozolomide (+ rituximab) (n = 21), high dose methotrexate (HD-MTX)-based therapy (n = 11), whole brain radiotherapy (WBRT)/focal radiotherapy (n = 11), other systemic treatments (n = 2) and best supportive care (BSC, n = 9). Median progression free survival (PFS) and overall survival (OS) were 2.6 months (95% CI 1.0–4.2 months) and 4.8 months (95% CI 3.3–6.3 months), respectively. Eight patients survived for ≥ 3 years (13.1%, n = 3 received temozolomide, n = 3 WBRT, n = 2 HD-MTX-based treatment). Application of any salvage treatment (vs. BSC), younger age at relapse and asymptomatic (vs. symptomatic) relapse were positive prognostic factors. No significant differences in OS were found for the different salvage treatments. Median hospitalization time for treatment was 15/13 days for temozolomide (+ rituximab)/radiotherapy compared to 55 days for HD-MTX-based therapy. Median KPS in assessable patients (n = 41) was 60 (range 30–100) before treatment and 50 (range 20–90) after treatment. In patients with response to treatment (n = 16) KPS improved from 60 (range 40–90) before treatment to 70 (range 50–90) after treatment, while patients with PD (n = 25) deteriorated from 60 (range 30–100) to 40 (range 20–70). Conclusion Survival for this cohort of r/r PCNSL patients with isolated cerebral relapse or progression was poor. Considering long hospital stays associated with HD-MTX-based chemotherapy and neurotoxicity associated with WBRT, temozolomide might be worth considering with a chance of prolonged survival and avoidance of long hospitalization. Novel therapeutic agents are urgently needed to improve survival in r/r PCNSL patients

High-Dose Chemotherapy with Autologous Hematopoietic Stem Cell Transplantation in Relapsed or Refractory Primary CNS Lymphoma: A Retrospective Monocentric Analysis of Long-Term Outcome, Prognostic Factors, and Toxicity

High-dose chemotherapy with autologous stem cell transplantation (HCT-ASCT) is reportedly an effective treatment strategy in relapsed or refractory primary CNS lymphoma (r/r PCNSL); however, only selected patients are eligible for this treatment. We retrospectively analyzed outcome, prognostic factors, and toxicity in 59 patients with r/r PCNSL planned to receive HCT-ASCT at our institution between January 2005 and December 2021 (n = 33 n = 26 ≥ 65 years). Median follow-up was 65 months (95% CI 21–109). Median age was 63 years (range 29–76), median Karnofsky performance score (KPS) was 80 (range 30–100). In the entire cohort of 59 patients, median overall survival (OS) was 14 months (95% CI 0–37). In 50/59 (84.7%) patients who completed HCT-ASCT, median progression free survival (PFS) was 12 months (95% CI 3–21) and median OS 30 months (95% CI 0–87). 1-year, 2-year, and 5-year OS rates of 61.2%, 52.3% and 47.1%, respectively, were observed. Six patients (10.2%) died related to treatment (1 during induction treatment, 5 post HCT-ASCT). Age was not prognostic. On univariate analysis, KPS ≥ 80 (p = 0.019) and complete or partial remission before HCT-ASCT (p = 0.026) were positive prognosticators of OS; on multivariate analysis, KPS (p = 0.043) and male gender (p = 0.039) had an impact on OS. The 5-year OS rate in patients with progressive or stable disease after induction treatment was 32.7%. In summary, HCT-ASCT was effective and feasible in this cohort of r/r PCNSL patients. Clinical state, remission status before HCT-ASCT, and gender influenced survival, whereas age did not influence outcome in this study

Optical genome mapping reveals and characterizes recurrent aberrations and new fusion genes in adult ALL

Optical genome mapping results files on single patient level: SV (Structural Variants) CNV (Copy number Variants) Aneuploidies OGM raw data sets a are available from the corresponding author upon request

High-dose chemotherapy with autologous hematopoietic stem cell transplantation in relapsed or refractory primary CNS lymphoma

High-dose chemotherapy with autologous stem cell transplantation (HCT-ASCT) is reportedly an effective treatment strategy in relapsed or refractory primary CNS lymphoma (r/r PCNSL); however, only selected patients are eligible for this treatment. We retrospectively analyzed outcome, prognostic factors, and toxicity in 59 patients with r/r PCNSL planned to receive HCT-ASCT at our institution between January 2005 and December 2021 ($\it n$ = 33 < 65 years; $\it n$ = 26 $\geq$ 65 years). Median follow-up was 65 months (95% CI 21–109). Median age was 63 years (range 29–76), median Karnofsky performance score (KPS) was 80 (range 30–100). In the entire cohort of 59 patients, median overall survival (OS) was 14 months (95% CI 0–37). In 50/59 (84.7%) patients who completed HCT-ASCT, median progression free survival (PFS) was 12 months (95% CI 3–21) and median OS 30 months (95% CI 0–87). 1-year, 2-year, and 5-year OS rates of 61.2%, 52.3% and 47.1%, respectively, were observed. Six patients (10.2%) died related to treatment (1 during induction treatment, 5 post HCT-ASCT). Age was not prognostic. On univariate analysis, KPS $\geq$ 80 ($\it p$ = 0.019) and complete or partial remission before HCT-ASCT ($\it p$ = 0.026) were positive prognosticators of OS; on multivariate analysis, KPS ($\it p$ = 0.043) and male gender ($\it p$ = 0.039) had an impact on OS. The 5-year OS rate in patients with progressive or stable disease after induction treatment was 32.7%. In summary, HCT-ASCT was effective and feasible in this cohort of r/r PCNSL patients. Clinical state, remission status before HCT-ASCT, and gender influenced survival, whereas age did not influence outcome in this study

Novel NUP98::ASH1L\it NUP98::ASH1L gene fusion in acute myeloid leukemia detected by optical genome mapping

Optical genome mapping (OGM) recently has demonstrated the potential to improve genetic diagnostics in acute myeloid leukemia (AML). In this study, OGM was utilized as a tool for the detection of genome-wide structural variants and disease monitoring. A previously unrecognized $\it NUP98::ASH1L$ fusion was detected in an adult patient with secondary AML. OGM identified the fusion of $\it NUP98$ to $\textit {Absent, Small, or Homeotic-Like Histone Lysine Methyltransferase (ASH1L)}$ as result of a complex structural rearrangement between chromosomes 1 and 11. A pipeline for the measurement of rare structural variants (Rare Variant Pipeline, Bionano Genomics, San Diego, CA, USA) was used for detection. As $\it NUP98$ and other fusions are relevant for disease classification, this demonstrates the necessity for methods such as OGM for cytogenetic diagnostics in AML. Furthermore, other structural variants showed discordant variant allele frequencies at different time points over the course of the disease and treatment pressure, indicating clonal evolution. These results support OGM to be a valuable tool for primary diagnostics in AML as well as longitudinal testing for disease monitoring and deepening our understanding of genetically heterogenous diseases

Successful chimeric antigen receptor (CAR) T-cell treatment in aggressive lymphoma despite coronavirus disease 2019 (CoVID-19) and prolonged severe acute respiratory syndrome Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) replication

In patients with compromised immune function, severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) infection and coronavirus disease 2019 (CoVID-19) impose particular challenges. Especially in hematological malignancies, including lymphoma, the demands by this novel virus disease are further enhanced during sophisticated treatments, such as chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy. Here, we present the first case of a patient with refractory diffuse-large B-cell lymphoma, who underwent CAR T-cell treatment in the context of SARS-CoV-2. Irrespective of prolonged and active SARS-CoV-2 infection, T cells were successfully isolated by apheresis and processed to anti-CD19 CAR T cells (axicabtagene-ciloleucel). In light of the aggressive lymphoma course, lymphodepleting chemotherapy and CAR-T cells were administered in early recovery after oxygen-dependent CoVID-19 pneumonia. Except for moderate cytokine release, this cellular immunotherapy was well tolerated. Notably, there is no deterioration of the SARS-CoV-2 infection; however, complete lymphoma response and full clinical recovery were observed. In conclusion, CAR T-cell treatment in aggressive lymphoma in the setting of SARS-CoV-2 infection is feasible and may offer significant therapeutic activity in refractory disease