Quality control in veterinary blood banks : evaluation of canine platelet concentrates stored for five days

Background: Platelets undergo structural, biochemical and functional alterations when stored, and platelet storage lesions reduce platelet function and half-life after transfusion. The objective of this study was to evaluate stored canine platelet concentrates with platelet aggregation, flow cytometry and biochemistry assays. Twenty-two bags of canine platelet concentrates were obtained by the platelet-rich plasma method and were assessed on days 1, 3 and 5 after collection. Parameters such as platelet counts, residual leukocytes, platelet swirling, glucose, lactate, pH, CD62P expression (platelet activation), JC-1 (mitochondrial function) and annexin V (apoptosis and cell death) were assessed. Results: Over the five days of storage there was a significant decrease in glucose, HCO3, pCO2, ATP, pH, swirling and mitochondrial function, associated with a significant increase in lactate levels and pO2. At the end of storage pH was 5.9 ± 0.6 and lactate levels were 2.8 ± 1.2 mmol/L. Results of the quality parameters evaluated were similar to those reported in human platelets studies. The deleterious effects of storage were more pronounced in bags with higher platelet counts (> 7.49 × 1010/unit), suggesting that canine platelet concentrates should not contain an excessive number of platelets. Conclusions: Quality parameters of canine platelets under standard storage conditions were similar to those observed in human platelets. Our results have potential to be used for the routine evaluation and quality control in veterinary blood banks

Evaluation of platelet parameters in healthy dogs: temperature, time and anticoagulant effects

A contagem de plaquetas é um exame de rotina utilizado no auxilío do diagnóstico de diversos distúrbios hemostáticos, além de ser usada no monitoramento de pacientes, portanto existe a necessidade de obter parâmetros fidedignos para assegurar a existência de plaquetopenia ou plaquetose e alterações morfológicas destas células. A comum ocorrência de agregação plaquetária “in vitro” dificulta a análises destes parâmetros, evento devido ao uso incorreto da metodologia de coleta, armazenamento inadequado da amostra, assim como o uso incorreto do anticoagulante. O diagnóstico errôneo de plaquetopenia ou plaquetose pode ter como consequência o direcionamento terapêutico inadequado do paciente. O objetivo deste estudo foi comparar quantitativa e qualitativamente os parâmetros plaquetários em amostras com diferentes anticoagulantes, e diferentes tempo e temperatura de armazenagem. Além disso, foram também objetivos averiguar a diferença entre os métodos de contagem de plaquetas (automático, manual e estimado em lâmina), e a correlação entre o volume plaquetário médio (MPV) e a porcentagem de macroplaquetas, assim como definir um intervalo de referência para a porcentagem de macroplaquetas em uma população de cães sadios. Amostras de sangue foram coletadas através do sistema a vácuo em tubos de EDTA K2 e citrato de sódio 3,2% de 54 cães clinicamente saudáveis. As amostras foram separadas em duas alíquotas e posteriormente armazenadas em pares, um par a temperatura ambiente (25°C) e outro a 4°C por até 6 horas após coleta. Cada alíquota foi avaliada em três momentos diferentes, nos quais as contagens plaquetárias, o MPV, e o escore de agregação foram realizados. A porcentagem de macroplaquetas foi feita apenas nas amostras de EDTA armazenadas a 25°C, no tempo zero após a coleta. Foi observada uma diminuição significativa nas contagens plaquetárias com o passar do tempo e em amostras sob refrigeração, e uma tendência ao aumento dos valores de MPV. As contagens realizadas em amostras de EDTA foram mais elevadas do que aquelas em citrato, e não houve correlação entre o volume de plaquetário médio e a porcentagem de macroplaquetas e, além de que a freqüência de aglomeração foi maior em amostras citratadas armazenadas a 4°C.The platelet count is a routine examination used in the diagnosis of bleeding disorders and patient monitoring. Therefore, reliable parameters are needed to ensure the existence of thrombocytopenia or thrombocytosis and morphological changes of these cells. The common occurrence of platelet aggregation difficult the analysis of these parameters, this often occurs due to incorrect venipuncture methodology, improper storage of the sample, as well as the incorrect use of anticoagulants. The misdiagnosis of thrombocytopenia or thrombocytosis may result in inappropriate treatment guidance. The aim of this study was to compare the quantitative and qualitative platelet parameters in samples with different anticoagulants, times and temperatures. Additional objectives were to, ascertain the difference between platelet count methods (automatic, manual and estimated) and to verify a possible correlation between the mean platelet volume (MPV) and macroplatelets percentage, as well as to define a reference range for macroplatelets percentage in a healthy population of dogs. Blood was collected from 54 clinically healthy dogs via vacuum system into EDTA K2 and sodium citrate 3.2% tubes. The samples were separated into two aliquots and then stored in pairs, one pair at room temperature (25°C) and another at 4°C for up to 6 hours post sampling. Each sample was evaluated at three different times, in which platelet counts, MPV, and clumping scores were performed. The macroplatelets percentage was done only in EDTA samples stored at 25°C, at zero hour post sampling. The authors observed a statistically significant decrease in platelet counts over time and in refrigerated samples, and a tendency to increased values of MPV. Counts performed in EDTA samples were higher than those in citrate, and there was no correlation between the mean platelet volume and macroplatelets percentage; and besides the frequency of clumping was higher in citrated samples stored at 4°C

Evaluation of platelet parameters in healthy dogs: temperature, time and anticoagulant effects

A contagem de plaquetas é um exame de rotina utilizado no auxilío do diagnóstico de diversos distúrbios hemostáticos, além de ser usada no monitoramento de pacientes, portanto existe a necessidade de obter parâmetros fidedignos para assegurar a existência de plaquetopenia ou plaquetose e alterações morfológicas destas células. A comum ocorrência de agregação plaquetária “in vitro” dificulta a análises destes parâmetros, evento devido ao uso incorreto da metodologia de coleta, armazenamento inadequado da amostra, assim como o uso incorreto do anticoagulante. O diagnóstico errôneo de plaquetopenia ou plaquetose pode ter como consequência o direcionamento terapêutico inadequado do paciente. O objetivo deste estudo foi comparar quantitativa e qualitativamente os parâmetros plaquetários em amostras com diferentes anticoagulantes, e diferentes tempo e temperatura de armazenagem. Além disso, foram também objetivos averiguar a diferença entre os métodos de contagem de plaquetas (automático, manual e estimado em lâmina), e a correlação entre o volume plaquetário médio (MPV) e a porcentagem de macroplaquetas, assim como definir um intervalo de referência para a porcentagem de macroplaquetas em uma população de cães sadios. Amostras de sangue foram coletadas através do sistema a vácuo em tubos de EDTA K2 e citrato de sódio 3,2% de 54 cães clinicamente saudáveis. As amostras foram separadas em duas alíquotas e posteriormente armazenadas em pares, um par a temperatura ambiente (25°C) e outro a 4°C por até 6 horas após coleta. Cada alíquota foi avaliada em três momentos diferentes, nos quais as contagens plaquetárias, o MPV, e o escore de agregação foram realizados. A porcentagem de macroplaquetas foi feita apenas nas amostras de EDTA armazenadas a 25°C, no tempo zero após a coleta. Foi observada uma diminuição significativa nas contagens plaquetárias com o passar do tempo e em amostras sob refrigeração, e uma tendência ao aumento dos valores de MPV. As contagens realizadas em amostras de EDTA foram mais elevadas do que aquelas em citrato, e não houve correlação entre o volume de plaquetário médio e a porcentagem de macroplaquetas e, além de que a freqüência de aglomeração foi maior em amostras citratadas armazenadas a 4°C.The platelet count is a routine examination used in the diagnosis of bleeding disorders and patient monitoring. Therefore, reliable parameters are needed to ensure the existence of thrombocytopenia or thrombocytosis and morphological changes of these cells. The common occurrence of platelet aggregation difficult the analysis of these parameters, this often occurs due to incorrect venipuncture methodology, improper storage of the sample, as well as the incorrect use of anticoagulants. The misdiagnosis of thrombocytopenia or thrombocytosis may result in inappropriate treatment guidance. The aim of this study was to compare the quantitative and qualitative platelet parameters in samples with different anticoagulants, times and temperatures. Additional objectives were to, ascertain the difference between platelet count methods (automatic, manual and estimated) and to verify a possible correlation between the mean platelet volume (MPV) and macroplatelets percentage, as well as to define a reference range for macroplatelets percentage in a healthy population of dogs. Blood was collected from 54 clinically healthy dogs via vacuum system into EDTA K2 and sodium citrate 3.2% tubes. The samples were separated into two aliquots and then stored in pairs, one pair at room temperature (25°C) and another at 4°C for up to 6 hours post sampling. Each sample was evaluated at three different times, in which platelet counts, MPV, and clumping scores were performed. The macroplatelets percentage was done only in EDTA samples stored at 25°C, at zero hour post sampling. The authors observed a statistically significant decrease in platelet counts over time and in refrigerated samples, and a tendency to increased values of MPV. Counts performed in EDTA samples were higher than those in citrate, and there was no correlation between the mean platelet volume and macroplatelets percentage; and besides the frequency of clumping was higher in citrated samples stored at 4°C

Additive solutions for canine platelet concentrates storage: biochemical evaluation

A prática da transfusão sanguínea teve início no século passado na medicina humana, e vem evoluindo desde então. A pesquisa nesta área é essencial para a melhor capacitação de médicos veterinários e para garantir a qualidade e a rapidez do atendimento dos animais que necessitam de transfusão. O curto tempo de armazenamento limita a quantidade de concentrados de plaquetas (CP) que podem ser efetivamente utilizados nos centros de hemoterapia, o que resulta em muitas unidades sendo descartadas, com consequente geração de despesas e necessidade de busca de novos doadores para atender a contínua demanda por este hemocomponente. O desenvolvimento de meios e soluções de preservação de plaquetas possibilita o armazenamento de CP por tempo prolongado e são capazes de diminuir ou evitar os efeitos prejudiciais durante o seu armazenamento, chamados de lesão plaquetária de estoque, para que, ao final, se obtenha um CP de melhor qualidade para ser transfundido. O presente trabalho teve como objetivos avaliar o CP canino armazenado com diferentes soluções aditivas plaquetárias sintéticas (SAP) durante 13 dias, e comparar as soluções aditivas com base no metabolismo plaquetário in vitro. Neste estudo foram utilizadas 40 unidades de CP canino, obtidos através do método de plasma rico em plaquetas, conservadas nas soluções aditivas a seguir: Grupo controle (100% plasma; n= 13), Grupo SSP+ (n= 13) e Grupo Composol (n= 14). . Os parâmetros avaliados nos dias 1, 5, 9 e 13 incluíram: ATP, lactato, glicose, lactato desidrogenase (LDH), pH, sódio, potássio, bicarbonato, pO2, pCO2, swirling, contagem de plaquetas, leucócitos residuais, agregação plaquetária, cultura bacteriana, marcação com anticorpos monoclonais CD61 e CD62P (p selectina), exposição da fosfatidilserina (PS) (Anexina V) e viabilidade mitocondrial (ΔΨm) (sondas JC-1 e Mitotracker Red e Green). Durante o tempo de armazenamento foi observado comportamento metabólico semelhante ao relatado em trabalhos com plaquetas humanas. Houve redução de ATP, pCO2, pH, ΔΨm (JC-1 agregado e Mitotracker Red), bicarbonato e glicose; e aumento marcação de CD62-P, Mitotracker Green e JC-1 monômero, aumento de pO2, LDH, PDW e lactato. Ao comparar as SAP com os CP 100% plasma houve diferença significativa nos seguintes parâmetros: swirling, PDW, CD62-P, glicose, lactato, pH, pO2, pCO2, bicarbonato, PS e em ambas técnicas de avaliação de ΔΨm. De forma geral pode-se afirmar que o grupo 100% plasma manteve os parâmetros de viabilidade até o quinto dia de armazenamento, exceto o valor médio de pH (6,1± 0,59). As SAP avaliadas mantiveram os parâmetros até o nono dia, com destaque para a solução SSP+ que manteve estes parâmetros estáveis até o 13° dia de estoque. SSP+ e Composol parecem ser uma excelente alternativa de SAP para serem utilizadas no lugar do plasma na produção dos CP em bancos de sangue veterinários. O estoque prolongado, com manutenção da qualidade in vitro parece ser viável e com resultados semelhantes aos observados em trabalhos com plaquetas humanas.The practice of blood transfusion began in the last century in human medicine, and has been evolving ever since. Research in this area is essential for better capacitating of veterinarians and to ensure the quality and promptness in assistance of the animals that require transfusion. The short storage time limits the amount of platelet concentrates (PC) that can be effectively used in transfusion centers which result in many units being discarded, with subsequent generation of expenditures and the need of finding new donors to meet the continuous demand for this blood component. The development of platelets preserving solutions provides storage of PC for long periods and is capable of reducing or avoiding adverse effects during storage, called platelet storage lesion. So, it will be possible to have a concentrate of better quality platelet to be transfused. This study aimed to evaluate the canine CP stored in different synthetic platelet additive solutions (SAP) for 13 days, and compare the additive solutions based on in vitro platelet metabolism. This study used 40 canine CP units, obtained with platelet rich plasma method, stored in the following additive solutions: Control group (100% plasma; n=13), SSP+ Group (n=13) and Composol Group (n=14). The parameters were evaluated on days 1, 5, 9 and 13 included: ATP, lactate, glucose, lactate dehydrogenase (LDH), pH, sodium, potassium, bicarbonate, pO2, pCO2, swirling, platelet count, residual leukocyte, platelet aggregation, bacterial culture labeling with monoclonal antibodies CD61 and CD62P (p-selectin), exposure of phosphatidylserine (PS) (Annexin V) and mitochondrial viability (ΔΨm) (JC-1 and Mitotracker Red and Green dyes). During the storage time was observed if the metabolic behavior is similar to that reported in studies with human platelets. In the storage period there was a reduction of ATP, pCO2, pH, ΔΨm (JC-1 aggregate and Mitotracker Red), bicarbonate and glucose; and increased percentage of CD62-P, Mitotracker Green and JC-1 monomer, increase of pO2, LDH, lactate and PDW levels. When comparing the SAP with the CP 100% plasma there were no significant differences in the following parameters: swirling, PDW, CD62-P, glucose, lactate, pH, pO2, pCO2, bicarbonate, PS and both ΔΨm techniques. In general it can be said that the 100% plasma group maintained the viability parameters until the fifth day of storage, with the exeption of pH average (6.1 ± 0.59). SAP evaluated parameters remained until the ninth day, highlighting the SSP+ solution that kept these parameters stable until the 13th day of storage. SSP+ and Composol seems to be an excellent alternative for use in place of the plasma in the production of the CP in veterinary blood banks. Prolonged storage time and in vitro quality maintenance appears to be feasible and have similar results to those observed in studies with human platelets

Aspectos epidemiológicos, clínicos e imuno-histoquímicos do linfoma canino na região de Porto Alegre

This paper describes the epidemiological, clinical and immunohistochemical characteristics of canine lymphomas diagnosed in the region of Porto Alegre, Brazil. Thirty dogs were enrolled in the study; most of them were male (60%), mixed-breed (23%) and middle- aged or older. The majority (87%) of affected dogs showed the multicentric form. The B-cell phenotype was most frequently detected (62%); 37% of the animals were in clinical stage IV, and 83% were classified as sub-stage “b”. Lymphadenopathy was observed in 67% of the cases, and dyspnea, prostration, decreased appetite and vomiting were the most common clinical signs encountered. Anemia was a frequently encountered laboratory alteration (57%), as were leukocytosis (40%), thrombocytopenia (33%), lymphopenia (30%), hyperglobulinemia (20%) and hypercalcemia (13%). The results of this study indicate that the clinical features of dogs with lymphoma in the region of Porto Alegre are similar to those observed worldwide.Esse trabalho apresenta os achados epidemiológicos, clínicos e imuno-histoquímicos de linfomas caninos diagnosticados na região de Porto Alegre. Trinta cães foram incluídos no estudo; sendo principalmente machos (60%), sem raça definida (23%) e de meia-idade a idosos. A maioria (87%) dos cães afetados apresentou a forma anatômica multicêntrica. O imunofenótipo B foi detectado com mais frequência (62%); 37% dos cães apresentavam estadiamento clínico IV e 83% encontravam-se no subestádio “b”. Linfadenopatia foi observada em 67% dos casos; outros sinais clínicos comumente detectados foram dispneia, prostração, diminuição do apetite e vômitos. Anemia foi a alteração laboratorial mais frequente (57%), seguida por leucocitose (40%), trombocitopenia (33%), linfopenia (30%), hiperglobulinemia (20%), hiperproteinemia (17%) e hipercalcemia (13%). Os resultados do presente estudo indicam que as características epidemiológicas e clínicas de cães com linfoma na região de Porto Alegre são semelhantes às observadas em todo o mundo

Hipercalemia em cães da raça Akita : achados clínicos, nutricionais e laboratoriais

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Anemia hemolítica causada por la deficiencia de piruvato quinasa hereditaria en un perro West Highland White Terrier

La deficiencia de piruvato quinasa (PK) es un desorden hemolítico autosómico recesivo descrito en perros y gatos. La piruvato quinasa es una de las enzimas regulatorias esenciales de la glicólisis anaeróbica, la deficiencia de esta enzima causa una destrucción prematura de los eritrocitos. El presente es un estudio de caso y relata los hallazgos clínicos y paraclínicos en un perro brasileño de la raza West Highland White Terrier (WHWT) con historia de debilidad e intolerancia al ejercicio. El paciente presentaba mucosas pálidas, anemia hemolítica bastante regenerativa y osteoclerosis. La deficiencia de PK fue confirmada a través de una prueba de ADN raza específica para la inserción 6bp en el extremo 3’ del exón 10 de la secuencia del gen de la piruvato quinasa eritrocitaria (R-PK) como fue descrito. Al perro se le practicó eutanasia a los 20 meses de edad debido al deterioro de su estado clínico, el cual incluyó anemia e incompatibilidad sanguínea. En otros casos descritos en perros de la raza WHWT con esta deficiencia, existen relatos hasta de nueve años de sobrevivencia. Los defectos hereditarios deben ser objeto de diagnóstico diferencial importante en casos de anemias hemolíticas crónicas en animales jóvenes después de la exclusión diagnóstica de disturbios inmunomediados y causas infecciosas. Adicionalmente, perros de razas puras para las cuales la prueba de ADN está disponible para enfermedades hereditarias deben ser evaluados antes de la edad reproductiva para limitar la diseminación del alelo mutante y la generación futura de animales deficientes

Hipercalemia em cães da raça Akita : achados clínicos, nutricionais e laboratoriais

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