The hepatic clearance of recombinant tissue-type plasminogen activator decreases after an inflammatory stimulus

We have shown that tissue-type plasminogen activator (tPA) and plasma kallikrein share a common pathway for liver clearance and that the hepatic clearance rate of plasma kallikrein increases during the acute-phase (AP) response. We now report the clearance of tPA from the circulation and by the isolated, exsanguinated and in situ perfused rat liver during the AP response (48-h ex-turpentine treatment). For the sake of comparison, the hepatic clearance of a tissue kallikrein and thrombin was also studied. We verified that, in vivo, the clearance of 125I-tPA from the circulation of turpentine-treated rats (2.2 ± 0.2 ml/min, N = 7) decreases significantly (P = 0.016) when compared to normal rats (3.2 ± 0.3 ml/min, N = 6). The AP response does not modify the tissue distribution of administered 125I-tPA and the liver accounts for most of the 125I-tPA (>80%) cleared from the circulation. The clearance rate of tPA by the isolated and perfused liver of turpentine-treated rats (15.5 ± 1.3 µg/min, N = 4) was slower (P = 0.003) than the clearance rate by the liver of normal rats (22.5 ± 0.7 µg/min, N = 10). After the inflammatory stimulus and additional Kupffer cell ablation (GdCl3 treatment), tPA was cleared by the perfused liver at 16.2 ± 2.4 µg/min (N = 5), suggesting that Kupffer cells have a minor influence on the hepatic tPA clearance during the AP response. In contrast, hepatic clearance rates of thrombin and pancreatic kallikrein were not altered during the AP response. These results contribute to explaining why the thrombolytic efficacy of tPA does not correlate with the dose administered.Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)UNIFESPSciEL

Behavioral alterations and Fos protein immunoreactivity in brain regions of bile duct-ligated cirrhotic rats

Hepatic encephalopathy (HE) encompasses a variety of neuropsychiatric symptoms, including anxiety and psychomotor dysfunction. Although HE is a frequent complication of liver cirrhosis, the neurobiological substrates responsible for its clinical manifestations are largely unclear. In the present study, male Wistar rats were bile duct-ligated (BDL), a procedure which induces liver cirrhosis, and on the 21st day after surgery tested in the elevated plus-maze (EPM) and in an open field for anxiety and locomotor activity measurements. Analysis of Fos protein immunoreactivity (Fos-ir) was used to better understand the neurobiological alterations present in BDL animals. Plasma levels of ammonia were quantified and histopathological analysis of the livers was performed. BDL rats showed a significant decrease in the percentage of entries and time spent in the open arms of the EPM, an anxiogenic effect. These animals also presented significant decreases in Fos-ir in the lateral septal nucleus and medial amygdalar nucleus. Their ammonia plasma levels were significantly higher when compared to the sham group and the diagnosis of cirrhosis was confirmed by histopathological analysis. These results indicate that the BDL model induces anxiogenic results, possibly related to changes in the activation of anxiety-mediating circuitries and to increases in ammonia plasma levels.A Encefalopatia hepática (HE) engloba uma variedade de sintomas neuropsiquiátricos, incluindo ansiedade e disfunção psicomotora. Embora seja uma complicação frequente da cirrose hepática, os substratos neurobiológicos responsáveis por suas manifestações clínicas são em grande parte desconhecidos. No presente estudo, ratos Wistar machos foram submetidos ao procedimento cirúrgico de ligação e secção do ducto biliar (BDL; bile-duct ligation), para indução da cirrose hepática e, no 21º dia após a cirurgia, submetidos aos testes comportamentais no labirinto em cruz elevado (LCE) e campo aberto para avaliação da ansiedade e atividade locomotora. A análise da imunorreatividade à proteína Fos (Fos-ir) foi utilizada para melhor compreender as alterações neurobiológicas presentes nos animais do grupo BDL. Foi realizada a quantificação da concentração de amônia plasmática e análise histopatológica dos fígados. Os ratos do grupo BDL mostraram diminuição significativa na porcentagem de entradas e tempo gasto nos braços abertos do LCE, caracterizando efeito ansiogênico. Estes animais também apresentaram redução significativa na Fos-ir no núcleo septal lateral e núcleo medial da amígdala. A concentração plasmática de amônia foi significativamente mais elevada que a do grupo sham e o diagnóstico de cirrose foi confirmado por análise histopatológica. Estes resultados indicam que o modelo de HE induzido por BDL induz efeito ansiogênico possivelmente relacionado à ativação de circuitos mediadores da ansiedade e à hiperamonemia.Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) Departamento de BiociênciasUniversidade de São Paulo Instituto de Ciências Biomédicas Departamento de AnatomiaUNIFESP, Depto. de BiociênciasSciEL

Plasma-kallikrein and recombinant tissue plasminogen activator in ligante hepatic cells

Nesta tese comparamos caracteristicas de depuracao da calicreina plasmatica de rato (RPK) e do ativador tecidual do plasminogenio (tPA) em modelo experimental de perfusao de ligado isolado de rato e em celulas hepaticas isoladas. Especificamente testamos a hipotese destas duas proteinas competirem pelo mesmo receptor. Como controle para a perfusao de figado, realizamos perfusao de veia cava inferior e verificamos que o tPA e removido eficientemente tanto veia cava como pelo ligado perfundido. Em contraste, a depuracao da RPK pela veia cava e desprezivel, comparada a depuracao pelo figado perfundido, O tPA e depurado da CIRCULACAO de ratos em fase aguda e de ratos submetidos ao modelo de cirrose experimental com velocidade menor quando comparado aos ratos normais. A flbrose experimental nao altera a depuracao do tpA da circulacao. A depuracao do tPA pelo figado perfundido de ratos submetidos ao modelo experimental de fase aguda e/ou inativacao das celulas de Kupffer e menor que em ratos normais. Por outro lado, a depuracao hepatica da RPK aumenta nos animais submetidos ao modelo de fase aguda ou inativacao das celulas de Kupffer. A fibrose ou a cirrose experimental diminui a depuracao do tPA pelo figado perfundido de rato. Por outro lado, a fibrose nao altera a depuracao hepatica da RPK. A depuracao hepatica do tPA e inibida pela adicao de b-galactosideos (b-lactose octacetato ou metil b-galactosideo) ou a-metil manosideo ao liquido de perfusao, sugerindo a participacao de lectinas S (inibicao por b-galactosideos) e receptor manosil-especifico (inibicao por manosideo). A depuracao hepatica da RPK diminui somente na presenca de metil b-galactosideo. Entretanto, na depuracao das duas proteinas nao houve completa inibicao pelos carboidratos utilizados sugerindo a presenca de outro sistema de reconhecimento para estas proteinas, possivelmente via parte proteica. A ligacao do 125I-tPA aos hepatocitos isolados e inibida por metil b-galactosideo (50 e 100 mM), tiodigalactosideo (50 mM), tio-b-galactosideo (O,8 e 3,2 MM). Dextran T-40 nao inibe esta ligacao. Estes dados reafirmam a participacao de lectinas S no reconhecimento do tPA. A marcacao indireta da RPK com inibidores marcados radioativamente foi desenvolvida com sucesso. A 125I-a5CK-RPK ou a 3H-DFP-RPK sao depuradas eficientemente pelo figado perfundido de rato, em contraste com a 125I-RPK. O tPA e)...(au)BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe

Acessibilidade nas aulas à distância Guia Básico

Com o objetivo de facilitar o processo de ensino-aprendizagem e proporcionar maior acessibilidade e inclusão à todos os estudantes, o e-book trás conteúdos, plataformas e dicas básicas referente a temática de acessibilidade e inclusão para auxiliar os docentes na produção das aulas remotas e materiais digitais

Guia Básico para aulas à distância: Alunos

Com o objetivo de auxiliar os estudantes durante as aulas de ensino remoto, sobretudo os estudantes com deficiência da Universidade Federal de São Paulo, este e-book trás passo a passo de como acessar as plataformas mais usadas pelos docentes, além de alguns Apps de acessibilidade e inclusão para computadores e smartphones, que facilitam no aprendizado e no maior rendimento deste período

Aula online, e agora?

Durante a pandemia da Covid-19 foi necessário uma adaptação tanto dos docentes quanto dos estudantes, fazendo com que as aulas remotas virassem o novo cenário do processo de ensino aprendizado. Desta forma, este e-book elaborado a partir do curso "How to Learn Online" da plataforma edX, trás estratégias e técnicas fundamentais de gestão de tempo, sono, autocuidado e muito mais, para auxiliar no alcance dos objetivos de aprendizagem e ter melhor rendimento neste períod

INCREASE OF GLYCOSAMINOGLYCANS AND METALLOPROTEINASES 2 AND 9 IN LIVER EXTRACELLULAR MATRIX ON EARLY STAGES OF EXTRAHEPATIC CHOLESTASIS

Context Cholestasis produces hepatocellular injury, leukocyte infiltration, ductular cells proliferation and fibrosis of liver parenchyma by extracellular matrix replacement. Objective Analyze bile duct ligation effect upon glycosaminoglycans content and matrix metalloproteinase (MMPs) activities. Methods Animals (6-8 weeks; n = 40) were euthanized 2, 7 or 14 days after bile duct ligation or Sham-surgery. Disease evolution was analyzed by body and liver weight, seric direct bilirubin, globulins, gamma glutamyl transpeptidase (GGT), alkaline phosphatase (Alk-P), alanine and aspartate aminotransferases (ALT and AST), tissue myeloperoxidase and MMP-9, pro MMP-2 and MMP-2 activities, histopathology and glycosaminoglycans content. Results Cholestasis caused cellular damage with elevation of globulins, GGT, Alk-P, ALT, AST. There was neutrophil infiltration observed by the increasing of myeloperoxidase activity on 7 (P = 0.0064) and 14 (P = 0.0002) groups which leads to the magnification of tissue injuries. Bile duct ligation increased pro-MMP-2 (P = 0.0667), MMP-2 (P = 0.0003) and MMP-9 (P<0.0001) activities on 14 days indicating matrix remodeling and establishment of inflammatory process. Bile duct ligation animals showed an increasing on dermatan sulfate and/or heparan sulfate content reflecting extracellular matrix production and growing mitosis due to parenchyma depletion. Conclusions Cholestasis led to many changes on rats&#8217; liver parenchyma, as so as on its extracellular matrix, with major alterations on MMPs activities and glycosaminoglycans content