Immune Reconstitution following Myeloablative Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation: The Impact of Expanding CD28negative CD8+ T Cells on Relapse

AbstractAllogeneic stem cell transplantation has become standard therapy for hematologic malignancies through the positive immunologic graft-versus-leukemia effect. Initial immune recovery relies on peripheral expansion of infused T cells, which switch to a memory-like phenotype. This study prospectively investigated whether changes in subset composition precedes complications after myeloablative HLA-matched transplantation for hematologic malignancies. Of 80 allograft recipients, 18 were still free of clinical complication throughout 395 to 1564 days of follow-up. Compared with this complication-free subgroup, patients who developed chronic graft-versus-host disease (cGVHD) without relapsing recovered similar numbers of circulating T cells with predominance of CD8+ T cells lacking CC-chemokine receptor-7 and CD28 expression throughout the first year after transplantation. Conversely, poor CD8+ T cell recovery with diminished numbers of CD28neg CD8+ T cells (∼1/4th of that of relapse-free patients) preceded occurrence of malignant relapse. In multivariate analysis, lower CD28neg CD8+ T cell counts by day 60 postallograft were associated with a greater risk of subsequent relapse (hazard ratio [HR] 0.33; 95% confidence interval [CI]: 0.14-0.76; P = .01). Enumeration of CD28neg CD8+ T cells in patients could assist in predicting risk of relapse and help build an algorithm for accelerating the immune recovery by reducing the immunosuppressive treatment and considering the introduction of preemptive donor lymphocyte infusions

Classical pathway activity C3c, C4 and C1-inhibitor protein reference intervals determination in EDTA plasma

Introduction: Reference intervals (RIs) for complement assays in EDTA plasma samples have not previously been published. The objectives of the present study were to validate and/or determine RIs for classical pathway (CP50) activity and C3c, C4 and C1 inhibitor protein (C1INH) assays and to assess the need for age-specific RIs in EDTA plasma. Materials and methods: We retrospectively evaluated a cohort of 387 patients attending our university hospital and known to be free of complement- modifying diseases. The need for age partitioning was assessed and RIs were calculated according to the CLSI protocol. Results: No need for age partitioning was evidenced for CP50 activity, C3c and C4 concentrations and RIs (90% CI) were calculated from the pooled data: 35.4 (33.1-37.2) to 76.3 (73.7-83.6) U/mL for CP50 activity, 0.80 (0.75-0.87) to 1.64 (1.59-1.72) g/L for C3c, and 0.12 (0.10-0.14) to 0.38 (0.36- 0.40) g/L for C4. Our results highlight a positive association between age and C1INH concentrations. We derived 3 age partitions (6 months to 30 years, 30-50 and > 50 years) and the related RIs: 0.20 (0.18-0.21) to 0.38 (0.36-0.40) g/L, 0.22 (0.20-0.24) to 0.39 (0.36-0.41) g/L and 0.25 (0.22-0.27) to 0.41 (0.40-0.43) g/L, respectively). Conclusions: The newly determined RIs for CP50 activity were higher than those provided by the manufacturer for EDTA plasma samples, whereas those for C3c and C4 RIs were similar to the values provided for serum samples. The C1INH concentration and activity were found to be associated with age and age-specific RIs are mandatory for this analyte

Alloimmunisation to Donor Antigens and Immune Rejection Following Foetal Neural Grafts to the Brain in Patients with Huntington's Disease

BACKGROUND: The brain is deemed “immunologically privileged” due to sparse professional antigen-presenting cells and lymphatic drainage, and to the blood-brain barrier. Although the actual extent of this privilege is controversial, there is general consensus about the limited need in intracerebral neural grafts for immunosuppressive regimens comparable to those used in other cases of allotransplantation. This has led over the past fifteen years to the use of either short-term or even no immunosuppression in most clinical trials with foetal neural transplant in patients with Parkinson's and Huntington's disease. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS: We report biological demonstration of alloimmunisation without signs of rejection in four grafted patients out of 13 studied during the course of a clinical trial involving fetal neural transplantation in patients with Huntington's Disease. Biological, radiological and clinical demonstration of an ongoing rejection process was observed in a fifth transplanted patient. The rejection process was, however, fully reversible under immunosuppressive treatment and graft activity recovered within six months. CONCLUSIONS/SIGNIFICANCE: There had been, up to date, no report of documented cases that could have cast a doubt on those procedures. Our results underline the need for a reconsideration of the extent of the so-called immune privilege of the brain and of the follow-up protocols of patients with intracerebral grafts. It also suggests that some of the results obtained in past studies with foetal neural transplants may have been biased by an unrecognized immune response to donor cells

Mise en place du T-SPOT®.TB au laboratoire d'immunologie du CHRU de Lille (évaluation des tests immunologiques sanguins de dépistage de l'infection tuberculeuse latente chez les patients infectés par le VIH, ou candidats à un traitement par antiTNF)

: Découverte il y a plus de 130 ans, la tuberculose reste de nos jours pour l OMS une préoccupation majeure de santé publique. Son incidence mondiale ne cesse d augmenter, sous la coupe de la co-infection par le VIH et la malnutrition dans les pays en voie de développement. Les pays développés quant à eux doivent lutter contre l infection latente par Mycobacterium tuberculosis, silencieuse, mais pouvant se réactiver en tuberculose maladie chez les patients immunodéprimés. La connaissance des mécanismes de l immunité anti-tuberculeuse nous permet de comprendre comment la co-infection par le VIH ou la mise en place d une biothérapie par anti TNF sont deux situations à risque très important de formes graves, voire fatales, de tuberculose. La détection et le traitement adapté des patients infectés est donc primordiale dans ces deux situations. En France, la détection de l infection tuberculeuse repose sur l intradermoréaction (IDR) à la tuberculine, test peu reproductible, mais surtout non spécifique de l infection par le bacille de Koch dans les pays à faible incidence de tuberculose et à couverture vaccinale élevée par le BCG. Nous disposons depuis peu de temps de nouveaux tests prometteurs, qui permettent de diagnostiquer de manière spécifique les patients infectés, indépendamment de leur statut vaccinal : les IGRAs (Interferon Gamma Release Assays) sont des tests mesurant la production d interféron gamma (IFN-g) par les cellules spécifiques immunitaires présentes dans le sang des patients infectés par M. tuberculosis. Deux formats de tests, basés sur des principes de détection de l IFN-g différents, sont commercialisés : le QuantiFERON-TB® Gold In Tube correspond à une technique ELISA, alors que le T-SPOT®.TB, plus récent, correspond à une technique plus complexe associant culture cellulaire à la détection de l IFN-g par ELISpot. En 2006 en France, la Haute Autorité de Santé (HAS) a émis un avis favorable quant au remplacement de l IDR par les tests IGRAs pour certaines indications, sous réserve de données supplémentaires . Le STIC-BK, protocole d étude multicentrique national auquel participe le CHRU de Lille, a donc été proposé pour valider certaines de ces indications, dont fait partie le dépistage de l infection tuberculeuse chez les patients à haut risque de réactivation, infectés par le VIH, ou candidats à un traitement par anti TNF. Ce premier travail français de thèse sur le T-SPOT®.TB a pour but de mettre l accent sur les difficultés rencontrées lors de la mise au point au laboratoire d un tel type de test, ainsi que de montrer la supériorité diagnostique des tests in vitro sur l IDR à travers l analyse des résultats lillois du STIC-BK. Malgré un corpus d études et de méta-analyses sur les tests IGRAs de plus en plus conséquent, plusieurs questions demeurent encore sans réponse. Cependant, de nombreux pays développés ont déjà modifié leur stratégie de dépistage de l infection tuberculeuse, soit en abandonnant totalement l IDR au profit des tests IGRAs, soit en combinant les deux tests. Globalement, les tests IGRAs ont le potentiel pour devenir de puissants outils de diagnostic pour le bon contrôle de la tuberculose et un important pas vers la réussite des objectifs que s est fixée l OMS : stopper la tuberculose en inversant son incidence mondiale en 2015.LILLE2-BU Santé-Recherche (593502101) / SudocSudocFranceF

Les lymphocites T CD4+ naïfs dans l'allogreffe de cellules de souches hématopoïétiques (principaux acteurs responsables de l'alloréacticité aux antigènes mineurs d'histocompatibilité)

Lors d une allogreffe de cellules souches hématopoïétiques (CSH) HLA compatible, les lymphocytes T du greffon activés par l alloreconnaissance des antigènes mineurs d histocompatibilité (mHAs) exercent un rôle essentiel dans le déclenchement de la réaction aiguë de greffon contre hôte (GvH). Par une étude clinique prospective, notre équipe a montré qu un greffon à proportion élevée de lymphocytes T CD4+CCR7+ est un facteur de risque indépendant de la survenue, la précocité et la sévérité de la GvH aiguë. Dans le cas des greffons riches en cellules TCD4+CCR7+ (cellules naïves (TN) et mémoires centrales (TCM)), une réduction cellulaire sélective pourrait respecter le compromis entre diminution du risque de GvH et maintien des effets bénéfiques de l allogreffe. Dans cette perspective, notre objectif est de démontrer l existence dans la fraction CCR7+ d une fréquence supérieure de cellules Talloréactivesaux mHAs. Notre modèle d étude est une réaction lymphocytaire mixte unidirectionnelle primaire sensibilisée où les cellules stimulantes sont des cellules dendritiques et les cellules répondeuses chacune des sous-populations T CD4+ purifiées, provenant respectivement de paires de sujets sains HLA-identiques. Cinq paires frères-sœurs ont été testées pour nous assurer au minimum de l incompatibilité en antigène mineur H-Y, présentable par certaines molécules HLA de classe II. Une paire sœur/sœur a été étudiée afin d évaluer le poids des mHAs autres que H Y. La réponse proliférative est évaluée à J5 et la réponse fonctionnelle cytokinique à J4, J6 et J10.Pour quatre paires avec sexe-mismatch, les cellules T CD4+ naïves développent la réponse proliférative maximale avec un indice de prolifération en thymidine tritiée de 1,75 à 3,85. Cette alloréactivité prédominante des lymphocytes TCD4+ naïfs s accompagne d une différenciation Th1: ces cellules constituent alors la seule sous-population capable, à J6 puis à J10, d une production soutenue d IL-6, de TNF et d'IFN g. La réponse est similaire mais moindre en absence de mismatch H-Y. Notre étude démontre la capacité de réponse primaire alloréactive des lymphocytes T CD4+ naïfs aux antigènes mineurs d histocompatibilité avec une intensité supérieure à celle des cellules mémoires. Ainsi, au sein du contingent T CD4+, la sous population naïve est celle qui possède in vitro le pouvoir alloréactif le plus intense et dont la proportion élevée in vivo au sein des greffons majore le risque de GvH aiguë.Nous avons ensuite comparé les réponses alloréactives des cellules T CD4+ naïves de sang de cordon ombilical et de sang périphérique d adulte pour expliquer la tolérance du sang placentaire, source de CSH dont les cellules T sont majoritairement naïves. Nos premiers résultats montrent la capacité proliférative des cellules T naïves du sang de cordon mais un défaut de différenciation fonctionnelle dont l origine doit maintenant être approfondie: blocage réel du processus de différenciation ou apoptose précoce et/ou réponse fonctionnelle précoce mais abortive, mal objectivée à J5?LILLE2-BU Santé-Recherche (593502101) / SudocSudocFranceF

DYNAMIQUE D'EXPRESSION DU RECEPTEUR CD28 AU COURS DES PROCESSUS D'ACTIVATION DES LYMPHOCYTES T HUMAINS (UN CONTROLE DIFFERENT POUR LES LYMPHOCYTES T CD4+ ET LES LYMPHOCYTES T CD8+ (DES BIOL. MED.))

LILLE2-BU Santé-Recherche (593502101) / SudocPARIS-BIUM (751062103) / SudocSudocFranceF

La dynamique des lymphocytes T CD8+ humains du compartiment lymphocytaire périphérique (de l'in-vivo, l'infection à cytomégalovirus chez les receveurs d'organes, à l'in-vitro, la différenciation des cellules T CD8+CD28+ naïves)

LILLE2-BU Santé-Recherche (593502101) / SudocSudocFranceF

Development and evaluation of a simulation procedure to take into account various assays for the Bayesian dose adjustment of tacrolimus.

International audienceBACKGROUND AND OBJECTIVES: Several analytical techniques with different performances are available for the measurement of tacrolimus blood concentrations. The performance of Bayesian estimators (MAP-BEs) allowing dose adjustments of tacrolimus is dependent on the precision of the analytical technique. Hence, any Bayesian estimator should only be used for concentration data obtained with the same assay employed for its development. The present study aimed at evaluating the feasibility of developing Bayesian estimators dedicated to different immunoassays, using the concentrations obtained with the reference high-performance liquid chromatography with mass spectrometric detection (LC-MS/MS) method and a simulation approach. PATIENTS AND METHODS: One hundred thirty-five full pharmacokinetic profiles of tacrolimus were obtained from 45 renal transplant patients using 3 different analytical techniques: 2 immunoassays [enzyme-multiplied immunoassay technique (EMIT) and chemiluminescent microparticle immunoassay (CMIA)] and LC-MS/MS. In a first step, 3 MAP-BEs were developed using the concentrations measured with the 3 techniques. Taking into account the correlation equations between the concentrations obtained with each of the immunoassays and LC-MS/MS, as well as the analytical error of the techniques, 2 hybrid MAP-BEs dedicated to the immunoassays were then developed after simulation of 100 pharmacokinetic profiles. Their performances were compared with those of the respective MAP-BEs developed using the actual immunoassay concentrations. RESULTS: The mean concentrations measured over the dosing interval using EMIT and CMIA were significantly higher than those measured using LC-MS/MS (+15% and +11% in the AUC₀₋₂₄ h value, respectively, P 20% in 33% and 27% of the patients, respectively. In contrast, the "CMIA" and "EMIT" hybrid MAP-BEs provided a good AUC₀₋₂₄ h estimation in 85%-93% of the patients. CONCLUSIONS: This study showed the impact of the analytical technique on the performance of Bayesian estimators dedicated to tacrolimus dose adjustment and the feasibility to develop MAP-BE for a specific assay using results from a different assay, based on a limited method comparison study. This methodology could offer clinicians the opportunity to dose adjust tacrolimus whatever the assay used in their center