Estandarización de un ensayo de actividad para la atpasa de calcio del eritrocito

Se describe la estandarización de un ensayo de actividad para la ATPasa de calcio del eritrocito. De acuerdo con el ensayo, la actividad máxima de la enzima corresponde a 3.79 micromoles de fosfato por miligramo de proteína de membrana por hora y la actividad basal representa aproximadamente el 10% de la actividad máxima. El comportamiento de la curva de actividad contra el tiempo es lineal durante los primeros 30 minutos y se presenta una alta correlación entre aumento en la actividad de la enzima y concentración de Calmodulina. Gracias al ensayo es posible cuantificar Calmodulina en concentraciones menores a I^iM

PfGBP: una proteína de unión al telómero de Plasmodium falciparum

Los telómeros son estructuras complejas de ADN y proteína localizadas en el extremo de los cromosomas eucariotes. Su principal función es proteger el extremo cromosomal de ser reconocido y procesado como ADNs fracturado, evitando así eventos de recombinación y fusión que conducen a inestabilidad cromosomal. El ADN telomérico consta de secuencias cortas, repetidas una tras otra, ricas en guanina; la cadena rica en guanina se extiende formando una región de cadena sencilla denominada extremo 3´ protuberante. Las proteínas por su parte, se pueden clasificar en: dsBPs, o proteínas de unión a la cadena doble, GBPs aquellas que reconocen específicamente el extremo protuberante y, proteínas que las interconectan mediante interacciones proteína-proteína. El gen PF3D7_1006800 de Plasmodium falciparum codifica para una proteína putativa similar a una GBP de Criptosporidium parvum, con el fin de establecer si esta proteína de P. falciparum presenta la capacidad de unión al ADN telomérico del parásito, se produjo una proteína recombinante a partir de la región codificante del gen, se purificó y se utilizó en ensayos de unión a ADN, y en la generación de anticuerpos policlonales específicos contra PfGBP. Nuestros resultados indican que la proteína de P. falciparum es una proteína nuclear con capacidad de unión al ADN telomérico in vitro, por lo que podría ser parte del complejo proteico encargado de proteger y/o mantener el telómero in vivo.Telomeres are specialized structures at the end of chromosomes that consist of repetitive DNA sequences and associated proteins. The primary role of telomeres is to protect the end of linear chromosomes from recombination, fusion, and recognition as broken DNA ends. This protective function can be achieved through association with specific telomere binding proteins. Telomeric DNA consists of G-rich double-stranded arrays followed by a single-stranded G-rich overhang. The telomeric proteins can be classified in dsBPs, which bind double-stranded DNA, GBPs those that bind specifically to G-rich overhang, and proteins that interact with telomeric factors. Plasmodium falciparum gene PF3D7_1006800 codifies for a protein highly similar to Cryptosporidium parvum GBP. In order to investigate whether the P. falciparum protein binds telomeric DNA, a recombinant protein was produced, purified and DNA binding assays were performed. Polyclonal antibodies against rPfGBP were produced and tested in western blot. Our results indicate that PfGBP is a nuclear protein that binds telomeric DNA in vitro, which could be part of the protein complex responsible for protecting and/or maintaining the telomere in vivo

Short communication - detection of telomerase activity in Plasmodium falciparum using a nonradioactive method

A simple, quick and sensitive method was used to detect telomerase activity in Plasmodium falciparum . The telomeric repeat amplification protocol (TRAP assay) was modified using electrophoresis and staining with SYBR-green I to detect telomerase activity in a range of 102 to 107 parasites. This might be a useful way to ascertain telomerase activity in different types of nontumor cells

Detection of telomerase activity in Plasmodium falciparum using a nonradioactive method

A simple, quick and sensitive method was used to detect telomerase activity in Plasmodium falciparum. The telomeric repeat amplification protocol (TRAP assay) was modified using electrophoresis and staining with SYBR-green I to detect telomerase activity in a range of 10² to 10(7) parasites. This might be a useful way to ascertain telomerase activity in different types of nontumor cells

ESTANDARIZACIÓN DE UN ENSAYO DE ACTIVIDAD PARA LA ATPasa DE CALCIO DEL ERITROCITO

Se describe la estandarización de un ensayo de actividad para la ATPasa de calcio del eritrocito. De acuerdo con el ensayo, la actividad máxima de la enzima corresponde a 3.79 micromoles de fosfato por miligramo de proteína de membrana por hora y la actividad basal representa aproximadamente el 10% de la actividad máxima. El comportamiento de la curva de actividad contra el tiempo es lineal durante los primeros 30 minutos y se presenta una alta correlación entre aumento en la actividad de la enzima y concentración de Calmodulina. Gracias al ensayo es posible cuantificar Calmodulina en concentraciones menores a I^iM

PfGBP: una proteína de unión al telómero de Plasmodium falciparum

Los telómeros son estructuras complejas de ADN y proteína localizadas en el extremo de los cromosomas eucariotes. Su principal función es proteger el extremo cromosomal de ser reconocido y procesado como ADNs fracturado, evitando así eventos de recombinación y fusión que conducen a inestabilidad cromosomal. El ADN telomérico consta de secuencias cortas, repetidas una tras otra, ricas en guanina; la cadena rica en guanina se extiende formando una región de cadena sencilla denominada extremo 3´ protuberante. Las proteínas por su parte, se pueden clasificar en: dsBPs, o proteínas de unión a la cadena doble, GBPs aquellas que reconocen específicamente el extremo protuberante y, proteínas que las interconectan mediante interacciones proteína-proteína. El gen PF3D7_1006800 de Plasmodium falciparum codifica para una proteína putativa similar a una GBP de Criptosporidium parvum, con el fin de establecer si esta proteína de P. falciparum presenta la capacidad de unión al ADN telomérico del parásito, se produjo una proteína recombinante a partir de la región codificante del gen, se purificó y se utilizó en ensayos de unión a ADN, y en la generación de anticuerpos policlonales específicos contra PfGBP. Nuestros resultados indican que la proteína de P. falciparum es una proteína nuclear con capacidad de unión al ADN telomérico in vitro, por lo que podría ser parte del complejo proteico encargado de proteger y/o mantener el telómero in vivo