Estimation of total bacteria by real-time PCR in patients with periodontal disease

Introduction Periodontal diseases are associated with the presence of elevated levels of bacteria within the gingival crevice. Objective The aim of this study was to evaluate a total amount of bacteria in subgingival plaque samples in patients with a periodontal disease. Methods A quantitative evaluation of total bacteria amount using quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) was performed on 20 samples of patients with ulceronecrotic periodontitis and on 10 samples of healthy subjects. The estimation of total bacterial amount was based on gene copy number for 16S rRNA that was determined by comparing to Ct values / gene copy number of the standard curve. Results A statistically significant difference between average gene copy number of total bacteria in periodontal patients (2.55×107) and healthy control (2.37×106) was found (p=0.01). Also, a trend of higher numbers of the gene copy in deeper periodontal lesions (>7 mm) was confirmed by a positive value of coefficient of correlation (r=0.073). Conclusion The quantitative estimation of total bacteria based on gene copy number could be an important additional tool in diagnosing periodontitis.Uvod Parodontopatija se povezuje sa postojanjem povećanog broja bakterija u parodontalnom džepu. Cilj rada Cilj rada je bila kvantifikacija ukupnih bakterija u uzorcima subgingivalnog dentalnog plaka kod osoba obolelih od parodontopatije. Metode rada U 20 uzoraka subgingivalnog plaka ispitanika sa ulceronekroznom parodontopatijom i 10 uzoraka osoba sa zdravim parodoncijumom izvršena je kvantifikacija ukupnog broja bakterija korišćenjem metode qRT- PCR. Kvantifikacija bakterija je zasnovana na određivanju ukupnog broja genskih kopija za rRNK poređenjem sa CT vrednošću standarda. Rezultati Ustanovljena je statistički značajna razlika u prosečnom broju genskih kopija ukupnih bakterija između ispitanika sa parodontopatijom (2,55×107) i ispitanika kontrolne grupe (2,37×106), (p=0,01). Takođe, trend porasta broja genskih kopija ukupnih bakterija s povećanjem dubine parodontalnog džepa (>7 mm) potvrđen je pozitivnom vrednošću koeficijenta korelacije (p=0,073). Zaključak Procena ukupnog broja bakterija na osnovu broja genskih kopija za 16S rRNK može biti važan dodatni parametar u dijagnostikovanju parodontopatije