Aprimoramento na manutenção de animais de laboratório: avaliação microbiológica de rações irradiadas e autoclavadas oferecidas ad libitum para camundongos da linhagem C57BL/6J / Improvement in laboratory animal maintenance: microbiological evaluation of irradiated and autoclaved feeds offered ad libitum to C57BL/6J mice

É comprovado que a qualidade da ração peletizada disponível para animais de laboratório irá influenciar a condição sanitária destes biomodelos. Mesmo havendo esterilização prévia das rações que serão utilizadas nos comedouros, estas podem se contaminar devido ao manuseio, estocagem e contato com o próprio animal e ambiente. Devido a estas possíveis vias de contaminação, este trabalho teve como objetivo verificar a qualidade microbiológica de rações irradiadas e autoclavadas e avaliar por quanto tempo elas mantêm a qualidade higiênico-sanitária quando dispostas nos comedouros. Essa verificação se torna relevante já que, geralmente, as rações são trocadas integralmente semanalmente, mas poderiam somente ser repostas gerando economia. Para atingir esse objetivo foi realizada a pesquisa de microrganismos indicadores durante o período de manutenção da ração (7 e 14 dias) nas gaiolas dos camundongos. O experimento foi realizado com quatro grupos de camundongos da linhagem C57BL/6J para cada ração. As rações foram marcadas permitindo assim a sua diferenciação para comparação da sua qualidade/tempo de exposição. Após as análises microbiológicas das rações, os resultados apontaram ausência de Salmonella spp. e também contagem de microrganismos mesófilos totais, bolores, leveduras, coliformes totais e termotolerantes abaixo dos limites máximos estabelecidos na literatura. A análise mostrou que após todo o período de exposição, as rações mantiveram boa qualidade higiênico-sanitária e que é possível repor a ração por cima da previamente utilizada em até 14 dias sem prejuízo de sua qualidade

Produção de itens de ensaio de proficiência contendo bactérias em matriz frango utilizando a técnica de liofilização

Introduction: Participation in proficiency testing (PT) is used to evaluate the competence of testing and calibration laboratories. Objective: To evaluate the viability of the freeze-drying technique to produce six lots of PT items containing two Escherichia coli, two containing Bacillus cereus and Staphylococcus aureus concomitantly, and two containing  Salmonella Enteritidis in baked shredded chicken matrix. Method: Homogeneity according to harmonized protocol and long and short-term stability testing according to ISO GUIDE 35  were carried out. Results: All lots produced were sufficiently homogeneous. In the long-term stability study, all lots were sufficiently stable at temperatures of -80 ± 10°C and  -20 ± 4°C, except for the lot containing B. cereus and S. aureus. The other lots presented stability for at least 126 days at -80 ± 10°C and 84 days at -20 ± 4°C. The short-term stability was carried out only with the lots sufficiently stable in the long-term stability study. The lots were sufficiently stable at temperatures of 5 ± 3°C and at 35 ± 2°C, except for the lot containing Salmonella Enteritidis at 35 ± 2°C due to the significant decrease in cell concentration. Conclusions: The freeze-drying technique was satisfactory for the production of test items containing E. coli e Salmonella Enteritidis in the chicken matrix viable to use in a PT, but the lot containing Salmonella Enteritidis must be transported to the laboratories at the temperature ≤ 8°C for up to four days. Lots containing S. aureus e B. cereus simultaneously  presented insufficient stability, indicating that the production of individual lots containing each bacteria individually is necessary.  Introdução: A participação em ensaios de proficiência (EP) é utilizada para avaliar a competência de laboratórios de ensaio e calibração. Objetivo: Avaliar a viabilidade da   técnica de liofilização na produção de seis lotes de itens de EP, dois contendo Escherichia   coli, dois contendo Bacillus cereus e Staphylococcus aureus concomitantemente, e dois contendo Salmonella Enteritidis em matriz frango desfiado cozido. Método: Foram realizados testes de homogeneidade segundo o protocolo harmonizado e de estabilidade em longo prazo pelo modelo clássico e curto prazo pelo modelo isócrono segundo a ISO Guide 35. Resultados: Todos os lotes produzidos foram considerados suficientemente homogêneos. No estudo de estabilidade em longo prazo, todos os lotes se apresentaram suficientemente estáveis nas temperaturas de -80 ± 10ºC e -20 ± 4ºC, exceto o lote contendo B. cereus e S. aureus. Os outros lotes apresentaram estabilidade por pelo menos 126 dias a -80 ± 10ºC e 84 dias a -20 ± 4ºC. Na avaliação da estabilidade em curto prazo, foram analisados apenas os lotes suficientemente estáveis no estudo em longo prazo. Os lotes foram suficientemente estáveis nas temperaturas de 5 ± 3ºC e 35 ± 2ºC, com exceção do lote contendo Salmonella Enteritidis a 35 ± 2ºC, devido ao decréscimo significativo da concentração celular. Conclusões: A técnica de liofilização foi satisfatória para produção de itens de ensaio contendo E. coli e Salmonella Enteritidis em matriz  frango viáveis para utilização em um EP, sendo que o lote contendo Salmonella Enteritidis deve ser transportado aos laboratórios participantes em temperatura ≤ 8ºC por até quatro dias. Lotes contendo S. aureus e B. cereus, simultaneamente, apresentaram estabilidade insuficiente, indicando que a produção de lotes individuais contendo cada bactéria individualmente é necessária

Produção de material de referência para ensaio de proficiência de enumeração de Bacillus cereus em leite

The participation in proficiency testing (PT) is essential for testing laboratories to prove their technical competence. The aim of this study was to produce a quantitative reference material (RM) for PT containing Bacillus cereus in milk powder. A sterile solution of 10% skim milk containing 100 mM sucrose was contaminated with a B. cereus strain in a specific concentration. The homogenized matrix was distributed into vials and freeze-drying. The batch produced was considered sufficiently homogeneous assigning a target standard deviation of 0.25. The RM was stable at ≤ -70 ºC and (-20 ± 4) ºC for 1,058 and 60 days, respectively. In the evaluation of temperatures for the transport of material, the RM was stable at 4, 25 and 35 ºC during four days. It is  concluded that the batch produced had all the necessary requirements to be used as items of PT.A participação em ensaios de proficiência é essencial para que um laboratório de ensaio possa ter seu desempenho avaliado por meio de uma comparação interlaboratorial. O objetivo deste trabalho foi produzir um material de referência (MR) quantitativo para EP contendo Bacillus cereus em leite em pó. Uma solução estéril de leite desnatado a 10% contendo 100 mM de sacarose foi contaminada com uma cepa de B. cereus em uma concentração previamente determinada. A matriz foi homogeneizada, distribuída em frascos e liofilizada. O lote produzido foi considerado suficientemente homogêneo atribuindo-se um desvio-padrão alvo de 0,25 log10 UFC/mL. O MR apresentou-se estável a ≤ -70 ºC e (-20 ± 4) ºC durante 1.058 e 60 dias, respectivamente. Na avaliação da influência de diferentes temperaturas para o transporte deste material, o MR se apresentou estável a 4 ºC, 25 ºC e 35 ºC durante o período de quatro dias de estudo. Conclui-se que o lote produzido apresentou todos os requisitos necessários para ser utilizado como itens de EP

Desenvolvimento de itens de ensaio de proficiência para pesquisa de Salmonella spp. em matriz chocolate

The aim of this study was to develop lyophilized test items (TI) containing Salmonella spp., in chocolate matrix to be used in proficiency testing programs (PTP). Microbial analysis was conducted on samples of granulated chocolate to verify that the sample was free of the target microorganisms. Homogeneity and stability studies in long and short term were carried out to monitor TI quality; the presence of vacuum in the samples was also verified, to ensure the efficiency of the lyophilization process. The results of the microbial testing indicated no contamination by Salmonella spp.; thus, the sample was appropriate to be used as matrix. The lyophilization technique, using trehalose as cryoprotectant, has proven to be effective for desiccation of TI produced. The Salmonella batch proved to be sufficiently homogeneous, because the microorganism was present in all analyzed flasks. The batch was held stable at -20°C (five weeks) and -70°C (26 weeks). As for the transportation stability, the batch was considered stable at 4°C (in four days). The TI produced batch in this study showed a quality level that makes it suitable to be used in PTP, to contribute to the increasing reliability of the test results from laboratories and to provide subsidies for identification of problems and troubleshooting.O objetivo desse estudo foi desenvolver itens de ensaio (IE) liofilizados contendo Salmonella spp., em matriz chocolate, para utilização em ensaio de proficiência (EP). Foi realizada a análise microbiológica de uma amostra de chocolate granulado para verificar se estava livre do micro-organismo alvo. Para monitoramento da qualidade dos IE, realizou-se estudos de homogeneidade e estabilidade em longo e curto prazo, bem como verificou-se a presença de vácuo nas amostras garantindo a eficiência do processo de liofilização. A análise microbiológica do chocolate indicou ausência de contaminação por Salmonella spp., estando apto para ser utilizado como matriz. A técnica de liofilização, com uso de trealose como crioprotetor, se mostrou eficaz para dessecação dos IE produzidos. O lote produzido se apresentou suficientemente homogêneo, pois o micro-organismo estava presente em todos os frascos analisados. O lote se apresentou estável à temperatura de -20ºC (em cinco semanas) e -70ºC (em 26 semanas); na estabilidade de transporte, foi considerado estável a 4ºC (em quatro dias). O lote de IE produzido nesse estudo apresentou qualidade que o torna apto para uso em EP, o que visou contribuir para o aumento da confiabilidade dos resultados das análises dos laboratórios e propiciar subsídios para a identificação e solução de problemas

Preparo de Itens de Ensaio de Proficiência em Matriz Queijo para a Pesquisa de Salmonella spp.

The participation of analytical laboratories in proficiency testing allows the verification of the reliability of results in analysis of quality control. The aim of this study was to produce a batch of test items (TI) to be used in a proficiency assay for Salmonella spp. research in a cheese matrix. Ultrafiltered Minas cheese was used as the matrix and spiked with a strain of Salmonella Enteritidis. Trehalose was used as cryoprotectant, and freeze-drying was used as the preservation technique. The batch was evaluated for vacuum verification, homogeneity study, and long-term stability testing at temperatures of -70ºC  (reference temperature) and -20ºC (storage temperature). The batch was also evaluated for short-term stability at temperatures of 4ºC, 25ºC, and 35ºC (transport temperatures). The results showed vacuum in 95.6% of the bottles, and the batch was considered sufficiently homogeneous. TI remained stable at -70ºC for more than 360 days and at -20ºC for more than 160 days. TI was shown to be stable for up 6 days at 4ºC and 25ºC but not at 35ºC. It is concluded that the methodology used was satisfactory for this TI production for Salmonella spp. research in a cheese matrix.A participação de laboratórios analíticos em ensaio de proficiência permite a verificação da confiabilidade dos resultados gerados nas análises de controle da qualidade. O objetivo deste estudo foi produzir um lote de itens de ensaio (IE) a ser utilizado em ensaio de proficiência (EP) para pesquisa de Salmonella spp. em matriz queijo. Queijo Minas Frescal (QMF) Ultrafiltrado foi utilizado como matriz e fortificado com uma cepa de Salmonella Enteritidis. A trealose foi utilizada como crioprotetor e a liofilização como técnica de preservação. O lote foi avaliado quanto a verificação do vácuo, teste da homogeneidade, estudo da estabilidade em longo prazo nas temperaturas de -70oC (referência) e -20oC (armazenamento) e em curto prazo nas temperaturas de 4, 25 e 35ºC (transporte). O lote apresentou presença de vácuo em 95,6% dos frascos e foi considerado suficientemente homogêneo. Os IE apresentaram estabilidade a -70ºC superior a 360 dias e a -20ºC superior a 160 dias. Os IE demonstraram ser estáveis por até seis dias nas temperaturas de 4 e 25ºC, mas não a 35ºC. Conclui-se que a metodologia utilizada foi satisfatória para produção de IE para o ensaio de pesquisa de Salmonella spp. em matriz queijo

A Reutilizaçao de um Cardioversor-Desfibrilador Implantável como "Ponte" para o Transplante Cardíaco

Relata-se o caso de uma paciente portadora de cardiomiopatia chagásica, internada no Hospital Beneficência Portuguesa, com insuficiência cardíaca congestiva classe funcional IV e arritmia ventricular complexa. Após avaliaçao, iniciou-se o protocolo para a realizaçao de transplante cardíaco. A paciente apresentou fibrilaçao ventricular, sendo recuperada por manobras de ressuscitaçao cárdio-pulmonar. Submetida a um estudo eletrofisiológico invasivo, desencadearam-se duas taquicardias ventriculares de origens distintas, mal toleradas hemodinamicamente, sendo indicado o implante de um cardioversor-desfibrilador. Reutilizou-se por 84 dias uma prótese com 3 meses de uso, explantada de outro paciente, até a realizaçao do transplante cardíaco, o que foi fundamental para garantir a sobrevida da paciente nesse período. Verificou-se que é possível reutilizar cardioversores-desfibriladores implantáveis uma vez que o alto custo da prótese, na época nao era coberto pelo SUS, o que impossibilitava o acesso da grande maioria dos pacientes a esse tipo de terapia. Justifica-se assim a adoçao dessa conduta, principalmente nos casos em que a perspectiva de uso do aparelho é por tempo limitado

A Reutilizaçao de um Cardioversor-Desfibrilador Implantável como "Ponte" para o Transplante Cardíaco

Relata-se o caso de uma paciente portadora de cardiomiopatia chagásica, internada no Hospital Beneficência Portuguesa, com insuficiência cardíaca congestiva classe funcional IV e arritmia ventricular complexa. Após avaliaçao, iniciou-se o protocolo para a realizaçao de transplante cardíaco. A paciente apresentou fibrilaçao ventricular, sendo recuperada por manobras de ressuscitaçao cárdio-pulmonar. Submetida a um estudo eletrofisiológico invasivo, desencadearam-se duas taquicardias ventriculares de origens distintas, mal toleradas hemodinamicamente, sendo indicado o implante de um cardioversor-desfibrilador. Reutilizou-se por 84 dias uma prótese com 3 meses de uso, explantada de outro paciente, até a realizaçao do transplante cardíaco, o que foi fundamental para garantir a sobrevida da paciente nesse período. Verificou-se que é possível reutilizar cardioversores-desfibriladores implantáveis uma vez que o alto custo da prótese, na época nao era coberto pelo SUS, o que impossibilitava o acesso da grande maioria dos pacientes a esse tipo de terapia. Justifica-se assim a adoçao dessa conduta, principalmente nos casos em que a perspectiva de uso do aparelho é por tempo limitado

Use of Bolton broth for selective enrichment and comparative analysis of its performance with direct plating methodology for isolating Campylobacter spp. from chilled chicken carcasses

Submitted by Alexandre Sousa ([email protected]) on 2014-11-26T12:44:39Z No. of bitstreams: 1 RIAL_71_456-461.pdf: 161912 bytes, checksum: f29424a2473c94f26ef42a280a0c7bc1 (MD5)Approved for entry into archive by Alexandre Sousa ([email protected]) on 2014-11-26T12:44:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RIAL_71_456-461.pdf: 161912 bytes, checksum: f29424a2473c94f26ef42a280a0c7bc1 (MD5)Made available in DSpace on 2014-11-26T12:58:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RIAL_71_456-461.pdf: 161912 bytes, checksum: f29424a2473c94f26ef42a280a0c7bc1 (MD5) Previous issue date: 2012Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Departamento de Microbiologia. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Departamento de Microbiologia. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Departamento de Bacteriologia. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Departamento de Microbiologia. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.O objetivo deste estudo foi comparar o enriquecimento seletivo e o plaqueamento direto no isolamento das espécies termofílicas de Campylobacter spp. em 30 amostras de carcaças de frango resfriadas adquiridas em supermercados, feiras livres e abatedouros no município do Rio de Janeiro, no período de julho de 2009 a julho de 2010. Foi realizada a enxaguadura da carcaça com água peptonada tamponada a 1% para recuperação das bactérias. Para o plaqueamento direto, foram utilizados ágar carvão cefoperazone desoxicolato modificado e ágar campy-cefex. Para o enriquecimento seletivo, foi empregado o caldo Bolton em concentrações simples e dupla. Foi detectada a presença de Campylobacter spp. em 21 amostras (70%), sendo 6 (28,6%) de abatedouros (3 com Serviço de Inspeção Estadual e 3 sem inspeção), 8 (38,1%) de supermercados e 7 (33,3%) de feiras livres. Não houve diferença estatisticamente significativa entre os resultados obtidos nesses estabelecimentos. As 21 amostras positivas foram isoladas do plaqueamento direto, 2 (9,5%) foram isoladas também no caldo Bolton simples e nenhuma no caldo Bolton duplo. O plaqueamento direto foi considerado o método mais rápido e eficiente, e apresenta menor custo que o enriquecimento seletivo na recuperação de Campylobacter spp. em carcaças resfriadas de frango.This study aimed at comparing the use of selective enrichment and direct plating for isolating the thermophilic species of Campylobacter spp. from 30 samples of chilled chicken carcasses purchased in supermarkets, marketplaces and slaughterhouses in the Rio de Janeiro city, from July 2009 to July 2010. Chicken carcasses were rinsed out with 400 mL of 1% buffered peptone water for bacteria recovering. Charcoal Cefoperazone Deoxycholate agar and Campy Cefex agar were used for direct plating. Selective enrichment was performed employing Bolton broth in single and double concentrations. The presence of Campylobacter spp. was detected in 21 samples (70%), being 6 (28.6%) from slaughterhouses (3 with State inspection service and 3 without inspection), 8 (38.1%) from supermarkets and 7 (33.3%) from marketplaces. No statistically significant differences were found among the results obtained from different establishments. Of 21 positive samples, 2 (9.5%) were isolated from single Bolton broth and none of them was positive in double Bolton broth. Therefore, the direct plating was considered easier, faster and more cost-effective than the selective enrichment methodology for recovering Campylobacter spp. from chilled chicken carcasses

Pesquisa de fatores de virulência em Pseudomonas aeruginosa isoladas de águas minerais naturais

O objetivo deste estudo foi avaliar a formação de biofilme e o perfil de susceptibilidade a antimicrobianos de Pseudomonas aeruginosa isoladas na avaliação da qualidade microbiológica de 80 amostras de águas minerais naturais comercializadas em garrafões de 20 L. Foi realizada a quantificação de P. aeruginosa e enterococos; a pesquisa de coliformes totais, coliformes termotolerantes e de clostrídios sulfito redutores (CSR). A produção de biofilme de P. aeruginosa foi avaliada em caldo infusão cérebro-coração (BHI) e em água mineral natural estéril nas temperaturas de 25 e 35ºC por 24 e 48 h. A avaliação da susceptibilidade a antimicrobianos foi realizada pelo teste de difusão em ágar (Kirby-Bauer). De 80 amostras analisadas, 40 (50%) apresentaram qualidade microbiológica insatisfatória segundo a RDC nº275/05. Trinta e oito (47,5%) amostras apresentaram P. aeruginosa, nove (11,2%) coliformes totais, quatro (5,0%) CSR e uma (1,2%) coliformes termotolerantes. Nenhuma amostra apresentou contaminação por enterococos. Dezesseis cepas (51,6%) de P. aeruginosa foram classificadas como não aderentes ou fracamente aderentes, tanto no BHI quanto na água mineral. Contudo, cinco cepas (16,1%) apresentaram-se fortemente aderentes nas duas matrizes, principalmente no caldo BHI e na temperatura de 25ºC. Cepas resistentes ou com resistência intermediária a antibióticos da classe dos aminoglicosídeos e/ou β-lactâmicos foram isoladas neste estudo. Concluiu-se que os isolados de P. aeruginosa foram capazes de produzir biofilme nas matrizes estudadas e apresentaram resistência a antimicrobianos. Metade das amostras apresentou qualidade microbiológica insatisfatória, principalmente devido à contaminação por P. aeruginosa (47,5%)