2 research outputs found
Investigation of LPS pathobiology in endodotic infections and its susceptibility to different therapeutic modalities
Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida GomesTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Estratégias clínicas devem voltar-se para a máxima desagregação/redução da carga microbiana, assim como para eliminação e/ou inativação de lipopolissacarídeos (LPS) e demais produtos tóxicos e assim, reduzir o potencial inflamatório do conteúdo endodôntico aos tecidos periapicais. Os objetivos do presente estudo foram: 1) Avaliar a efetividade do sistema Reciproc (R25) em comparação com diferentes sistemas rotatórios na remoção de bactérias e endotoxinas de canais radiculares contaminados (artigo 1); Investigar a influência da interação entre substâncias antimicrobianas utilizadas na terapia endodôntica e o substrato Limulus Amebocyte Lysate (LAL) para quantificação de endotoxinas, com o objetivo de identificar substâncias interferentes quando da leitura dos níveis de endotoxinas em amostras clínicas (artigo 2); Monitorar "in vivo" a efetividade do preparo químico-mecânico (PQM) com NaOCl 2,5% e Clorexidina (CHX) gel 2% (tendo como controle o soro fisiológico [SS]) após o uso do EDTA 17% e medicação intracanal na redução de LPS, elucidando a contribuição de cada etapa da terapia endodôntica na redução de endotoxinas (artigo 3); Estudar o perfil da microbiota e níveis de endotoxinas nas infecções endodônticas primárias com lesão periapical, determinando o potencial inflamatório do conteúdo endodôntico contra macrófagos através da produção de IL1- ß e TNF-?. Além disso, comparar "in vivo" a efetividade do preparo químico-mecânico (PQM) com NaOCl 2,5% e Clorexidina (CHX) gel 2% e após o uso do EDTA 17% e medicação intracanal na eliminação de LPS, tendo como controle, soro fisiológico (SS) (artigo 4); Investigar a influência de diferentes substâncias químicas auxiliares utilizadas no tratamento endodôntico e da medicação à base de hidróxido de cálcio por diferentes períodos na estrutura e bioatividade do lipopolissacarídeo bacteriano, visando elucidar a ocorrência de possíveis implicações na detecção do lipideo A/ LPS e posteriormente, seu potencial imunoestimulador em receptores TLR-4 (artigo 5). Métodos: Amostras foram coletadas de canais radiculares utilizando cones de papel estéreis/despirogenizados. PCR (16s rDNA), contagem de unidades formadoras de colônias e método LAL foram utilizados. Macrófagos Raw 264.7 foram estimulados com conteúdo endodôntico infeccioso e determinação dos níveis de IL1- ß e TNF-? foi realizada por meio de ELISA. Espectrometria de massa (MALDI-TOF) e silver staining determinaram a presença de picos de lipídeo A e bandas correspondentes à presença de LPS após tratamentos, respectivamente. Em paralelo, ativação de TLR-4 foi realizada para determinação do potencial imunoestimulador do LPS. Resultados: Artigo 1- Não houve diferença entre o sistema Reciproc R25 e os diferentes sistemas rotatórios na remoção de bactérias e endotoxinas de canais radiculares contaminados, respectivamente: Reciproc (99.34% e 91.69%); GII - Mtwo (99.86% e 83.11%); GIII- ProTaper (99.93% e 78.56%); and GIV- FKG RaceTM (99.99% e 82.52%). Artigo 2- Água oxigenada 30%, Otosporin® e pasta tripla antibiótica causaram inibição/superestimação dos níveis de endotoxina em todas as diluições testadas. Artigo 3- PQM foi capaz de reduzir significativamente os níveis de LPS: NaOCl 2.5% (99.65%) (GI), CHX 2% (94.27%) (GII), e SS (96.79%) (GIII) (p 0.01). Article 2- Hydrogen peroxide 30%, Otosporin® and triple antibiotic paste caused inhibition/ enhancement of endotoxin levels in all dilutions. Article 3- Irrespective of the irrigant, CMP was able to significantly reduce LPS levels: NaOCl 2.5% (99.65%) (GI), CHX 2% (94.27%) (GII), and SS (96.79%) (GIII) (p .05). IL-1? and TNF-? were produced by macrophages stimulated with initial endodontic content. A proportional decrease of cytokine levels was found after each root canal procedure (p <0.05). Article 5- 5.25% NaOCl and Ca(OH)2 induced both loss of peak of lipid A and LPS detection, while no structural alteration was observed after LPS treatment with other auxiliary chemical substances. In parallel, LPSs treated with 5.25% NaOCl and Ca(OH)2 were significantly less potent in activating TLR4 when compared to other substances (p <0.0001). It was concluded that: Reciproc (R25) was as effective as the rotary multifile systems for bacteria and endotoxin removal from contaminated root canals (Article 1); The performance characteristics - accuracy and reproducibility- of the turbidimetric kinetic assay for quantification of endotoxins are influenced by the interaction of LAL substrate with Hydrogen peroxide 30%, Otosporin® and triple antibiotic paste (Article 2); High endotoxin reduction occurs after chemical-mechanical preparation and after the use of calcium hydroxide paste (Article 3). Additional endodontic procedures enhance endotoxin reduction (Article 3). Consequently, it was found a progressively lower activation of macrophages for IL-1? and TNF-? production (Article 4); 5.25% NaOCl and calcium hydroxide paste were capable of inducing loss of lipid A peaks and LPS detection, rendering a lower immunostimulatory potential against TLR-4 (Article 5)DoutoradoEndodontiaDoutora em Clínica Odontológica2013/02402-9FAPES
Effect of chemo-mechanical preparation in the levels of endotoxin in primary endodontic infections and inflammatory potential of the infectious content regarding the production of pro-inflammatory cytokines
Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida GomesDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Lipopolisacarídeos (LPS) - endotoxinas são capazes de estimular células a produzirem citocinas pró-inflamatórias envolvidas na destruição tecidual periapical. Os objetivos do presente estudo foram: 1) Verificar e quantificar endotoxinas em canais radiculares infectados de dentes com periodontite apical crônica e sua relação com sinais e sintomas clínicos de origem endodôntica; 2) Avaliar a efetividade do preparo químico-mecânico (PQM) com hipoclorito de sódio (NaOCl) 2,5%; clorexidina gel (CLX) 2% e soro fisiológico (SS-controle) na eliminação de endotoxinas; 3) Avaliar o potencial inflamatório do conteúdo endodôntico, antes (C1) e após a instrumentação do canal radicular (C2) com NaOCl 2,5%, CLX 2% ou soro fisiológico e após uso de EDTA 17% (C3) em cultura de células de macrófagos quanto à produção de citocinas pró-inflamatórias - IL-1?, TNF-?. Amostras foram coletadas de 30 canais radiculares com necrose pulpar e presença de lesão periapical em C1, C2 e C3 utilizando cones de papel estéreis/apirogênicos. Endotoxina foi detectada em 100% dos canais radiculares estudados, representada pela mediana de 18,70 EU/mL. Dentes com presença de dor à percussão e exsudação intracanal foram relacionados com níveis elevados de endotoxina (pC2>C3). Foi possível concluir que 1) Endotoxinas estavam presentes em todos os casos investigados, apresentando níveis mais elevados nos dentes com dor à percussão e exsudato intracanal. 2) O preparo químico-mecânico foi eficaz na redução do conteúdo de endotoxinas, independente da substância química auxiliar testada; 3) O potencial inflamatório do conteúdo endodôntico foi demonstrado pela produção de IL1- ? e TNF-?, exercendo maior atividade inflamatória contra macrófagos nas amostras iniciais, quando comparado com as obtidas após o preparo químico-mecânicoAbstract: Lipopolysaccharide (LPS)-endotoxin are able to stimulate cells to produce proinflammatory cytokines involved in the periapical tissue destruction. The aims of this study were: 1) To verify and quantify endotoxin in infected root canals of teeth with apical periodontitis and correlate the levels with clinical signs and symptoms of the primary endodontic infections; 2) To assess the effectiveness of chemo-mechanical preparation (CMP) with 2.5% sodium hypochlorite (NaOCl), 2% chlorhexidine (CHX) and saline solution (SS), as negative control, for the elimination of endotoxins; 3) To evaluate the inflammatory potential of endodontic content before (C1) and after the CMP (C2) with 2.5% NaOCl, 2% CHX or SS and after final rinse with 17% EDTA (C3) in macrophage cell culture regarding the production of proinflammatory cytokines - IL-1 ? and TNF-?- via the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Samples were collected from 30 canals with pulpal necrosis and apical periodontitis in C1, C2 and C3 using sterile non-pyrogenic/paper points. Endotoxin was detected in 100% of root canals studied, represented by the median of 18.70 EU/mL. Teeth with tenderness to percussion and intracanal exudate were related to high levels of endotoxin (pC2>C3). It was possible to conclude that 1) Endotoxin were present in all cases investigated, showing higher levels in the teeth with tenderness to percussion and intracanal exudate; 2) CMP was effective in reducing the endotoxic content, regardless of the auxiliary chemical substance; 3) The inflammatory potential of endodontic content was demonstrated by the production of IL1-? and TNF-? in all cases. The infectious content present in the root canal in the initial samples exerted greater inflammatory activity against macrophages compared to the residual content after CMPMestradoEndodontiaMestra em Clínica Odontológic