Seleção de peptídeos reconhecidos por imunoglobulinas Y anti-metacestódeo de Taenia solium por phage display

The Taenia solium metacestodes localization in humans occours mainly in the central nervous system (CNS) promoting the disease named neurocysticercosis (NC), the most frequent parasitosis in the CNS. The pathological presentation of NC differs about localization and viability of metacestodes, and host immunological response. For its diagnosis stabelishment is necessary a right interpretation of clinical signs, neuroimagin and immunological tests, and epidemiological data. The frequent inviability of parasite material has stimutaled the development and usage of recombinant antigens in the immunodiagnosis, and since describition of the phage-display tecnology this technique has presented increseier utilization in several cientific areas, as selection of peptides that could be used for immunodiagnostic test. The aim of this study was to obtain mimetopes of T. solium through biopanning using IgY specific to T. solium metacestodes. The IgY obtained from immunizated chicken with T. solium metacetodes saline extract was coated on microplate wells to select peptides from phage library in a three rounds biopanning. The phagetopes selected were tested in NC diagnosis by ELISA assay with 110 serum samples, 40 from NC patients and patients infected with others parasitic diseases, and 30 samples of health individuals. Seven mimetopes shown the best results in diagnostic patients with NC, and also they were capable to distinguish active from inactive NC form, detecting almost even 100% of inactive NC patients. None of the clones reacted with Echinococcus granulosus sera and the specificity ranged from 85.7% to 94.3%. This study was the first utilizing chicken immunization using T. solium metacetodes saline extract. The phage clones Cc6, Cc8, Cc25, Cc27, Cc30, Cc45 e Cc48, shown the better results, can be potentials candidates as NC inactive phase markers and a uselles tool in disease prognostic, and reinforcement to neuroimaging tests.Mestre em Imunologia e Parasitologia AplicadasOs metacestódeos de Taenia solium no homem instalam-se principalmente no sistema nervoso central (SNC) causando neurocisticercose (NC), a parasitose mais freqüente do SNC. A apresentação patológica da NC difere em relação à localização e viabilidade do cisticerco, e mecanismos da resposta imunológica. Para estabelecer o diagnóstico de NC é necessária uma interpretação correta dos sintomas clínicos, dos testes de neuroimagem e de imunodiagnósticos, e dos dados epidemiológicos. A freqüente indisponibilidade de material do parasito tem estimulado o desenvolvimento e uso de antígenos recombinantes nas análises imunodiagnósticas, e desde a descrição da tecnologia de phage-display esta técnica tem apresentado uma utilização cada vez mais crescente em diversas áreas das ciências, como a de definir peptídeos para testes imunodiagnósticos. O objetivo deste estudo foi o isolamento de mimetopos de metacestódeos de T. solium a partir da realização de biopanning utilizando IgY anti-metacéstodeo de T. solium. A IgY, obtida através da imunização de galinhas com extrato salino de metacéstodeos de T. solium, foi adsorvida em poços de microplacas para selecionar peptídeos a partir de uma biblioteca de fagos em três rounds de biopanning. Os fagotopos selecionados foram testados para o diagnóstico de NC através de ensaio de ELISA com 110 amostras de soro, sendo 40 de pacientes com NC e com outras doenças parasitárias, e 30 amostras de indivíduos saudáveis. Sete mimetopos apresentaram os melhores resultados no diagnóstico da NC, e foram capazes de diferenciar a forma ativa da forma inativa de NC, detectando aproximadamente 100% dos pacientes com a forma inativa. Nenhum dos clones foi reativo com soros de pacientes com Echinococcus granulosus, e a especificidade variou de 85,7% a 94,3%. Esse trabalho foi o primeiro a utilizar a imunização de galináceos com extrato salino de metacestódeos de T. solium. Os clones Cc6, Cc8, Cc25, Cc27, Cc30, Cc45 e Cc48, apresentaram os melhores resultados, podendo ser considerados como potenciais marcadores de fase inativa e uma ferramenta útil no prognóstico da doença, e também um reforço para os testes de neuroimagem

Evaluation of peptides in the control of experimental cysticercosis

Human cysticercosis is caused by installation of metacestodes of Taenia solium. The most serious condition is the infection of the central nervous system, which leads to neurocysticercosis. Despite attempts to eradicate the disease, cysticercosis remains a serious public health issue, and the development of a vaccine may be an alternative to control the disease. The aim of this study was to test the feasibility of mimotope Cc48 from T. solium to control of experimental murine cysticercosis. Peptide Cc48 was tested as expressed in bacteriophage M13 (mCc48) and as a synthetic peptide (sCc48). A total of 160 BALB/c mice were used, being divided into four groups: G1 (n = 40): mice immunized with mCc48, G2 (n = 40): immunized with peptide Cc48, G3 (n = 40) and G4 (n = 40): inoculated with saline. After immunization, mice from groups G1, G2 and G3 were challenged with Taenia crassiceps metacestodes, while those in group G4 did not received cysticercus for being the negative control of the experiment. The animals were sacrificed at four points: 15, 30, 45 and 60 days after infection (dai), to collect blood samples and perform cysticerci count. The count of cysticerci was used to analyze the protection achieved by immunization. Serum samples were obtained from collected blood and were tested by ELISA to verify the production of antibodies (IgM, IgG, IgA, and IgE), test IgG avidity and quantify cytokines (IL-4, INF-gamma). Total and differential leukocyte counts were performed in blood samples. Indirect immunofluorescence tests were done with sera from mice against cysticerci of T. crassiceps and T. solium. Immunization with sCc48 decreased the number of cysticerci and infected animals, inducing 90% of protection and efficacy of 98% in point 60 dai. G1 had higher IgM and IgG production and presence of IgE, while in G2 IgG was the main antibody detected. G1 presented significant increase in leukocytes production. IL-4 production was detected in all groups, and some animals in groups G1, G2 and G3 presented IFN-gamma. Cross-reactivity of antibodies produced with both tested species was observed through immunofluorescence. The ability of synthetic peptide sCc48 to induce protection makes it a potential compound against cysticercosis.Doutor em Imunologia e Parasitologia AplicadasA cisticercose humana é uma parasitose causada pela infecção por metacestódeos de Taenia solium. O quadro mais grave é o acometimento do sistema nervoso central, causando neurocisticercose. Apesar das tentativas de erradicação da doença, a cisticercose continua sendo um grave problema de saúde pública, e o desenvolvimento de uma vacina pode ser uma alternativa para o seu controle. O objetivo desse estudo foi testar o mimotopo Cc48 de T. solium no controle da cisticercose murina experimental. O peptídeo Cc48 foi testado expresso em bacteriófagos M13 (mCc48) e como peptídeo sintético (sCc48). Foram utilizados 160 camundongos BALB/c divididos em quatro grupos: G1 (n = 40), camundongos imunizados com mCc48; G2 (n = 40), imunizados com peptídeo sCc48; G3 (n = 40) inoculados com salina e G4 (n = 40) inoculados com salina. Após a imunização, os camundongos dos grupos G1, G2 e G3 foram desafiados com metacestódeos de Taenia crassiceps, e G4 não recebeu metacestódeos por ser o controle negativo do experimento. Os animais foram sacrificados em quatro pontos: 15, 30, 45 e 60 dias após infecção (dpi), para recolher amostras de sangue e realizar da contagem de metacestódeos. A contagem de metacestódeos foi usada para determinar a proteção conseguida pela imunização. Amostras de soro obtidas a partir do sangue coletado foram testadas por ELISA para verificar a produção de anticorpos (IgM, IgG, IgA e IgE), testar a avidez de IgG e quantificar citocinas (IL-4, INF-gama). Contagens totais e diferenciais de leucócitos foram realizadas com amostras de sangue. Foi realizado o teste de imunofluorescência indireta com os soros dos camundongos, contra metacestódeos de T. crassiceps e T. solium. Em relação à contagem de metacestódeos, apenas a imunização com sCc48 diminuiu o número de metacestódeos e de animais infectados, induzindo 90% de proteção e eficácia de 98% no ponto 60 dpi. O G1 apresentou uma alta produção de IgM e IgG, e teve detecção de IgE, enquanto no G2 o principal anticorpo detectado foi IgG. IgG dos animais do G2 apresentou alta avidez. Houve um aumento significante na contagem de leucócitos no G1. Detectou-se IL-4 em todos os grupos, e alguns animais dos grupos G1, G2 e G3 apresentaram IFN-gama. Pela imunofluorescência verificou-se a reatividade cruzada dos anticorpos produzidos com as espécies testadas. A capacidade do peptídeo sintético sCc48 para induzir proteção o torna um potencial composto contra cisticercose

IgA1 levels in milk and serum samples from intestinal parasite-infected or normal puerperae

In this study, IgA1 levels in the milk and serum of puerperae were compared and a correlation was established between the levels of this immunoglobulin and the occurrence of parasitism. Eighty-three paired milk and serum samples were obtained from puerperal and IgA1 levels were analyzed. In addition, the presence of intestinal parasites in stool samples from these puerperae was determined. Twelve puerperae tested positive for intestinal parasites and all their samples presented an IgA1 ELISA Index > 1. There was a correlation between serum and milk IgA1 levels and puerperae with any parasite in their stool (r = 0.6723; p = 0.0166). This finding may reinforce the importance of breast-feeding for the protection of neonates