Immune Monitoring of Patients With Primary Immune Regulation Disorders Unravels Higher Frequencies of Follicular T Cells With Different Profiles That Associate With Alterations in B Cell Subsets

Primary immune regulation disorders lead to autoimmunity, allergy and inflammatory conditions due to defects in the immune homeostasis affecting different T, B and NK cell subsets. To improve our understanding of these conditions, in this work we analyzed the T and B cell compartments of 15 PID patients with dysregulation, including 3 patients with STAT1 GOF mutation, 7 patients with CVID with dysregulation, 3 patients with mutations in CTLA4, 1 patient with CD25 mutation and 1 patient with STAT5b mutation and compared them with healthy donors and with CVID patients without dysregulation. CD4+ and CD8+ T cells from the patients exhibited a significant decreased frequency of naïve and regulatory T cells with increased frequencies of activated cells, central memory CD4+ T cells, effector memory CD8+ T cells and terminal effector CD8+ T cells. Patients also exhibited a significantly increased frequency of circulating CD4+ follicular helper T cells, with altered frequencies of cTfh cell subsets. Such cTfh cells were skewed toward cTfh1 cells in STAT1 GOF, CTLA4, and CVID patients, while the STAT5b deficient patient presented a skew toward cTfh17 cells. These alterations confirmed the existence of an imbalance in the cTfh1/cTfh17 ratio in these diseases. In addition, we unraveled a marked dysregulation in the B cell compartment, characterized by a prevalence of transitional and naïve B cells in STAT1 GOF and CVID patients, and of switched-memory B cells and plasmablast cells in the STAT5b deficient patient. Moreover, we observed a significant positive correlation between the frequencies cTfh17 cells and switched-memory B cells and between the frequency of switched-memory B cells and the serum IgG. Therefore, primary immunodeficiencies with dysregulation are characterized by a skew toward an activated/memory phenotype within the CD4+ and CD8+ T cell compartment, accompanied by abnormal frequencies of Tregs, cTfh, and their cTfh1 and cTfh17 subsets that likely impact on B cell help for antibody production, which likely contributes to their autoimmune and inflammatory conditions. Therefore, assessment of these alterations by flow cytometry constitutes a simple and straightforward manner to improve diagnosis of these complex clinical entities that may impact early diagnosis and patients’ treatment. Also, our findings unravel phenotypic alterations that might be associated, at least in part, with some of the clinical manifestations observed in these patients.Fil: Caldirola, Maria Soledad. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Martínez, María Paula. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; ArgentinaFil: Bezrodnik, Liliana. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Zwirner, Norberto Walter. Universidad de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Gaillard, María Isabel. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentin

Características de la infección por EBV y análisis de poblaciones NK en amígdalas comparados con pacientes sanos

La respuesta de NK juega un rol importante en el control de la infección y la transformación mediada por virus de Epstein Barr (EBV) en niños de países desarrollados. Se desconoce la respuesta de NK en el marco de la infección asintomática en niños de países subdesarrollados. Nuestro objetivo fue caracterizar la infección por virus de Epstein-Barr (EBV) y su relación con las células NK presentes en el sitio de entrada y reactivación viral, las amígdalas.Analizamos 61 pacientes (rango etario 1-15 años, mediana 5 años), que fueron amigdalectomizados en el servicio de otorrinolaringología del HNRG. El estatus de infección viral fue determinado por serología, identificando pacientes no infectados (NI), primoinfectados (PI), portadores (HC) y cursando reactivación viral (R). La carga viral se determinó por PCR en tiempo real. La expresión de antígenos virales se evaluó por Inmunohistoquímica (IHQ) para LMP1, LMP2A, EBNA2 y BMRF1 y por hibridación in situ (HIS) para EBERS. Para identificar las subpoblaciones de NK presentes en el tejido y su funcionalidad se realizó IHQ para CD56, CD16, IFNg y GrzB. Los resultados se expresaron como células positivas/mm2. Además, en un subgrupo de 34 pacientes se realizó citometría de flujo para CD3, CD56, CD16, CD94 y NKG2D con el objetivo de analizar los subgrupos de NK.A partir del suero de 61 pacientes se identificaron 21 PI, 28 HC, 8 R y 4 NI. Si bien la CV resultó ser baja en todos los grupos, fue mayor en PI ( p=0.0306, Kruskal-Wallis test).Respecto del perfil de latencia, la latencia III se observó casi exclusivamente en HC (p= 0.0429, test de X2), mientras que los PI sólo presentaron Latencias I y II, no se observaron diferencias en la expresión de BMRF1 entre grupos de pacientes, sin embargo se hallaron diferencias significativas solamente en el recuento de células CD16+ en presencia o ausencia de este antígeno lítico (p=0.0370. test de Mann-Whitney). Las células CD56+ e IFNg+ analizadas por IHC presentaron correlación positiva entre ellas en el conjunto de pacientes (r=0.4012, p=0,0047) y específicamente en PI (r=0.7, p=0.002). El análisis por CF demostró correlación negativa entre CD56+ y la CV en todos los pacientes (r=-0,5469, p=0.039). En PI observamos correlación entre la edad y las células CD94+NKG2D+ (r=0,6685, p=0.0245) , mientras que en HC se demostró correlación positiva entre la edad y las células CD94-NKG2D- ( r= 0,5903, p= 0,0099)En PI encontramos baja carga viral, expresión restringida de antígenos virales de latencia y/o de ciclo lítico -que gatilla la respuesta inmune mediada por NK-, factores que pueden estar relacionados a la ausencia de síntomas. La menor carga viral asociada a un mayor recuento de células CD56+ puede estar reflejando un reclutamiento de células NK para controlar la infección por EBV, particularmente en pacientes mayores, en los que predomina la población CD94+NKG2D+. A su vez, el control por parte de las NK podría estar mediado por la producción de IFNg.Fil: Ferressini Gerpe, Natalia Marina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Vistarop, Aldana Georgina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Caldirola, Maria Soledad. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Gaillard, M. I.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; ArgentinaFil: de Matteo, Elena Noemí. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Preciado, Maria Victoria. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Chabay, Paola Andrea. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaXXXVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de VirologíaArgentinaSociedad Argentina de Virologí

Partial growth hormone insensitivity and dysregulatory immune disease associated with de novo germline activating STAT3 mutations

Germinal heterozygous activating STAT3 mutations represent a novel monogenic defect associated with multi-organ autoimmune disease and, in some cases, severe growth retardation. By using whole-exome sequencing, we identified two novel STAT3 mutations, p.E616del and p.C426R, in two unrelated pediatric patients with IGF-I deficiency and immune dysregulation. The functional analyses showed that both variants were gain-of-function (GOF), although they were not constitutively phosphorylated. They presented differences in their dephosphorylation kinetics and transcriptional activities under interleukin-6 stimulation. Both variants increased their transcriptional activities in response to growth hormone (GH) treatment. Nonetheless, STAT5b transcriptional activity was diminished in the presence of STAT3 GOF variants, suggesting a disruptive role of STAT3 GOF variants in the GH signaling pathway. This study highlights the broad clinical spectrum of patients presenting activating STAT3 mutations and explores the underlying molecular pathway responsible for this condition, suggesting that different mutations may drive increased activity by slightly different mechanisms.Fil: Gutiérrez, Mariana Lilián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Scaglia, Paula Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Keselman, Ana Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Martucci, Lucia Camila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Karabatas, Liliana Margarita. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Domene, Sabina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Martin, Ayelen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Pennisi, Patricia Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Blanco, Miguel. Hospital Universitario Austral; ArgentinaFil: Sanguineti, Nora María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Bezrodnik, Liliana. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Area de Inmunología. Grupo de Inmunología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Di Giovanni, Daniela. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Area de Inmunología. Grupo de Inmunología; ArgentinaFil: Caldirola, Maria Soledad. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Area de Inmunología. Grupo de Inmunología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Esnaola Azcoiti, María. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Area de Inmunología. Grupo de Inmunología; ArgentinaFil: Gaillard, María Isabel. Cincinnati Children's Hospital Medical Center; Estados UnidosFil: Denson, Lee A.. Cincinnati Children's Hospital Medical Center; Estados UnidosFil: Zhang, Kejian. Cincinnati Children's Hospital Medical Center; Estados UnidosFil: Husami, Ammar. Cincinnati Children's Hospital Medical Center; Estados UnidosFil: Yayah Jones, Nana Hawa. Cincinnati Children's Hospital Medical Center; Estados UnidosFil: Hwa, Vivian. Cincinnati Children's Hospital Medical Center; Estados UnidosFil: Revale, Santiago. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Rosario. Instituto de Agrobiotecnología de Rosario; ArgentinaFil: Vazquez, Martin Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Rosario. Instituto de Agrobiotecnología de Rosario; ArgentinaFil: Jasper, Hector Guillermo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Kumar, Ashish. Cincinnati Children's Hospital Medical Center; Estados UnidosFil: Domene, Horacio Mario. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; Argentin

Human STAT5 Deficiency Results in an Increase of Follicular T Cells Leading to Expanded Germinal Center B Cells and Autoimmunity

Introduction: The fate of effector T cells is strongly dependent on the expression of Bcl-6 or Blimp-1, which are inhibited reciprocally through a complex signaling pathway. Several studies have shown that Bcl-6 is a key transcription factor for differentiation towards the follicular helper T cells (Tfh) lineage able to collaborate with B lymphocytes (BL). On the contrary, the transcription factor Blimp-1 is highly expressed in T lymphocytes Th1, Th2 and Treg, thus regulating the differentiation towards Tfh. Materials and methods: whole fresh blood and peripheral mononuclear cells from a patientwith homozygous mutation in STAT5b were analysed by flow cytometry. Analysis of cTfh (CD4+CD45RA-CXCR5+), cTfh1 (CXCR3+), cTfh17 (CCR6+), cTfh2 (CXCR3-CCR6-), naïve BL (LB IgM+IgD+CD27-), memory (MBL) (LB IgM+ IgD- CD27+), switched (MBL-Sw) (IgD-IgM-) andplasmablast (PBC) (CD27+CD38++) cells was performed. Immunoglobulins were measured in serum. Results: the patient with STAT5b deficiency showed increased values of cTfh (38%) (Healthy donors p10-p90: 7,9-17,8 %) that presented an activated phenotype (ICOS+ and PD-1+) with a skewed to a Th17 profile (CCR6+), consistent with her hipergammaglobulinemia and the marked and sustained increase in the switched MBL and PBC subpopulations in peripheral blood over the years. Discusion: This immunological phenotype described in the patient with STAT5b deficiency could explain in part the pathophysiology of the autoimmune disorders. This patient (as well as the other two patients withmutations in STAT5b previously described by our group), have had chronichypergammaglobulinemia, autoantibodies and consequently autoimmune processes (psoriasis, hypothyroidism, eczema, alopecia and celiac disease, among others).We believe that the link between this clinical symptomatology and the molecular defect relies in the fact that the absence of STAT5b promotes a greater expression of Bcl-6, which generates a bias towards the production of cTfh cells, that give rise to a greater activation of LB, generation of LBMand plasma cells (dysregulation in the CG), events thatmanifest as hypergammaglobulinemia and autoimmunity. In summary, we provide promising evidence of the mechanisms that lead to autoimmunity in thistype of patients that could also be a consequence of the defect in the regulation of GC, highlighting the crucial role of STAT5b in the humoral immune response and maintenance of the tolerance of the immune system.Fil: Caldirola, Maria Soledad. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Gaillard, María Isabel. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Zwirner, Norberto Walter. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Bezrodnik, Liliana. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Area de Inmunología. Grupo de Inmunología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaAnnual Meeting: Immune Deficiency & Dysregulation North American ConferenceAtlantaEstados UnidosClinical Immunology Societ

Pediatric inborn errors of immunity causing hemophagocytic lymphohistiocytosis: Case report and review of the literature

Inborn errors of immunity are a group of genetic disorders caused by mutations that affect the development and/or function of several compartments of the immune system, predisposing patients to infections, autoimmunity, allergy and malignancies. In this regard, mutations that affect proteins involved in trafficking, priming, docking, or membrane fusion will impair the exocytosis of lytic granules of effector NK and cytotoxic T lymphocytes. This may predispose patients to hemophagocytic lymphohistiocytosis, a life-threatening immune disorder characterized by systemic lymphocyte and macrophage activation, and increased levels of cytokines, which lead to an uncontrolled hyperinflammation state and progressive multiorgan damage. In this review, we will describe a clinical case and recent advances in inborn errors of immunity predisposing to hemophagocytic lymphohistiocytosis. Summary sentence: Review of recent advances in inborn errors of immunity predisposing to hemophagocytic lymphohistiocytosis.Fil: Caldirola, Maria Soledad. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Gómez Raccio, Andrea Cecilia. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Area de Inmunología. Grupo de Inmunología; ArgentinaFil: Di Giovanni, Daniela. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Area de Inmunología. Grupo de Inmunología; ArgentinaFil: Gaillard, María Isabel. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Area de Inmunología. Grupo de Inmunología; ArgentinaFil: Preciado, María Victoria. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; Argentin

Chronic Hepatitis C Pathogenesis: Immune Response in the Liver Microenvironment and Peripheral Compartment

Chronic hepatitis C (CHC) pathogenic mechanisms as well as the participation of the immune response in the generation of liver damage are still a topic of interest. Here, we evaluated immune cell populations and cytokines in the liver and peripheral blood (PB) to elucidate their role in CHC pathogenesis. B, CTL, Th, Treg, Th1, Th17, and NK cell localization and frequency were evaluated on liver biopsies by immunohistochemistry, while frequency, differentiation, and functional status on PB were evaluated by flow cytometry. TNF-α, IL-23, IFN-γ, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-17A, IL-21, IL-10, and TGF-β expression levels were quantified in fresh liver biopsy by RT-qPCR and in plasma by CBA/ELISA. Liver CTL and Th1 at the lobular area inversely correlated with viral load (r = −0.469, p =0.003 and r = −0.384, p = 0.040). Treg correlated with CTL and Th1 at the lobular area (r = 0.784, p < 0.0001; r = 0.436, p = 0.013). Th17 correlated with hepatic IL-8 (r = 0.52, p < 0.05), and both were higher in advanced fibrosis cases (Th17 p = 0.0312, IL-8 p = 0.009). Hepatic cytokines were higher in severe hepatitis cases (IL-1β p = 0.026, IL-23 p = 0.031, IL-8 p = 0.002, TGF-β, p= 0.037). Peripheral NK (p = 0.008) and NK dim (p = 0.018) were diminished, while NK bright (p = 0.025) was elevated in patients vs. donors. Naïve Th (p = 0.011) and CTL (p = 0.0007) were decreased, while activated Th (p = 0.0007) and CTL (p = 0.0003) were increased. IFN-γ production and degranulation activity in NK and CTL were normal. Peripheral cytokines showed an altered profile vs. donors, particularly elevated IL-6 (p = 0.008) and TGF-β (p = 0.041). Total hepatic CTLs favored damage. Treg could not prevent fibrogenesis triggered by Th17 and IL-8. Peripheral T-lymphocyte differentiation stage shift, elevated cytokine levels and NK-cell count decrease would contribute to global disease.Fil: Rios, Daniela Alejandra. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Casciato, Paola Cecilia. Italian's Hospital Of Buenos Aires; ArgentinaFil: Caldirola, Maria Soledad. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Gaillard, María Isabel. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Giadans, Cecilia Graciela. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Ameigeiras, Beatriz. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos "Ramos Mejía"; ArgentinaFil: de Matteo, Elena Noemí. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Preciado, María Victoria. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Valva, Pamela. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Epidemiological presentation of EBV infection and characterization of NK subpopulations in the tonsils of pediatric patients compared with non-infected patients

Several studies demonstrated the keyrole of NK cells in the control of early infection and EBVmediated transformation in children from developed countries. Therefore, our aim wasto characterizeEBV infectionin relation to NK cell subsets at the tonsils, site of viral entry and reactivation, inchildren from Argentina.We analyzed 76 patients (1-15 years, median 5) undergoing tonsillectomy. EBV primary infection(PI), reactivation (R), carrier (HC), or non-infected (NI) status was defined by serology. Viral load(VL) was evaluated by qPCR.Viral antigen expression was assessed by Immunohistochemistry(IHC) for LMP1, LMP2A, EBNA2 and BMRF1, and byEBERS in situ Hybridization (ISH). CD56,CD16, IFNg and GrzB IHC (expressed as positive cells/mm2) was performed tocharacterize NKcells. CD3, CD56, CD16, NKG2A and NKG2DNK subsets were identifiedin 44patients by FlowCytometry (FC). EBV typification was performed using primers directed against EBNA3C gene.Twenty-three PI patients,38HC,10 R patients and 5 NI patients were discriminated. No significantdifferences regarding age and VL among groups were demonstrated(p> 0.05) even though PI patientshad a higher VL mean. Unexpectedly, latency III pattern was observed exclusively in HC (p=0.0342,X2 test). CD56+ and IFNg+ cells by IHC displayed a positive correlation between them in the wholeseries (r=0.3009, p=0,0256) and specifically in PI (r=0.5298, p=0.0163). FC analysis revealed nospecific NK cell population in the three groups of EBV- infected patients (p>0.05), while a negativecorrelation between CD56+ and VL in all patients (r=-0,6623, p=0.005) and particularly in PI (r=-0,6623, p=0.005) was proved. In PI we observed correlation between age and NKG2A+NKG2D+NK cells (r=0,6685, p=0.0245).Regarding EBV types in cases with good quality DNA, EBV1 was prevalent in the whole series,given that 19 patients were positive for EBV-1, 6 for EBV-2 and one PI patient was co- infected,moreover, EBV1 was statistically distributed in patients younger than 10 years (p=0.0468, Fisherexact test)The low viral inoculum along with restricted expression of EBV latent and lytic proteins was foundin PI, maybe related to the lack of symptoms. Even though no specific NK subpopulation wasdescribed, IFNg- producing NK cells may be involved the control of viral infection in all EBV-infectedpatients.Fil: Ferressini Gerpe, Natalia Marina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Moyano, Agustina Ayelén. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Caldirola, Maria Soledad. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Gaillard, M. I.. No especifíca;Fil: de Matteo, Elena Noemí. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Preciado, Maria Victoria. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Chabay, Paola Andrea. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaInternational Centre for Genetic Engineering and Biotechnology DNA Tumour Virus MeetingTriesteItaliaInternational Centre for Genetic Engineering and Biotechnolog

Caracterización de poblaciones NK presentes en amígdalas de pacientes pediátricos infectados por EBV

En Argentina el 90% de la población se encuentra infectada por EBV a la edad de 3 años, en su mayoría de forma asintomática. Varios estudios determinaron la participación fundamental de las células NK en el control de la infección temprana en niños de países desarrollados, y en la transformación celular mediada por EBV. Objetivo: Determinar la presencia de EBV y las distintas subpoblaciones de NK en el sitio de ingreso del virus, la amìgdala, en pacientes pediátricos. Métodos: Se estudiaron 14 pacientes amigdalectomizados (2 a 10 años). Se definió el tipo de infección por serología IgM e IgG anti EBV. Se determinó la carga viral por qPCR y se identificaron las subpoblaciones de NK (CD3,CD56,CD16,NKG2A y NKG2D) por citometría de flujo. Se realizó inmunohistoquìmica para caracterizar la presencia y funcionalidad de NK por el recuento de poblaciones CD56, CD16, IFN, GRZ B y se expresaron como células/mm2.Resultados: Se identificaron 9 pacientes primoinfectados (IgM+/IgG+o-), 5 portadores (IgM-/IgG+) y ningún paciente seronegativo. No se observaron diferencias significativas en las medias de edades de los grupos, ni en las cargas virales (p>0,05 test de t).Se observó diferencia significativa en la media del recuento de la población CD56+ en portadores vs primoinfectados (p=0,03 test de t), mientras que el resto de los marcadores analizados no mostraron diferencias significativas (p>0,05, test de t). Se encontró una tendencia a una correlación positiva entre el recuento de CD56 y la carga viral en los pacientes primoinfectados (r=0,68; p=0,0503, test correlación Spearman). No se observaron diferencias en las subpoblaciones estudiadas por citometría de flujo entre primoinfectados y portadores (p>0,05 test de t), ni correlación con la carga viral. Conclusiones: Este trabajo es el primero de la región caracterizar las células NK en el sitio de entrada y reactivación de EBV en pacientes pediátricos. La baja carga viral observada en primoinfectados podría ser responsable de la infección asintomática, y de la escasa presencia de células NK en el sitio de ingreso. Por otro lado, el aumento de dicha población en portadores podría estar asociado a eventuales reactivaciones. Se describió in vitro que la población NKG2A+NKG2D+ cumpliría un rol importante en el control de la infección, sin embargo, no prevaleció dicha población en el marco de la primoinfección por EBV, indicando que no estaría cumpliendo un rol predominante.Fil: Ferressini Gerpe, Natalia Marina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Servicio de Anatomía Patológica; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Vistarop, Aldana Georgina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Servicio de Anatomía Patológica; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Cohen, Melina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Servicio de Anatomía Patológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Caldirola, Maria Soledad. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Área de Inmunología; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Gaillard, María Emilia. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Área de Inmunología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: de Matteo, Elena Noemí. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Servicio de Anatomía Patológica; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Preciado, Maria Victoria. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Servicio de Anatomía Patológica; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaFil: Chabay, Paola Andrea. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Niños "Ricardo Gutiérrez". Servicio de Anatomía Patológica; Argentina. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto Multidisciplinario de Investigaciones en Patologías Pediátricas; ArgentinaXII Congreso Argentino de Virología; V Simposio de Virología Clínica y III Simposio de Virología VeterinariaBuenos AiresArgentinaSociedad Argentina de Virologí

Distinct interferon signatures and cytokine patterns define additional systemic autoinflammatory diseases

© 2020, American Society for Clinical Investigation. BACKGROUND. Undifferentiated systemic autoinflammatory diseases (USAIDs) present diagnostic and therapeutic challenges. Chronic interferon (IFN) signaling and cytokine dysregulation may identify diseases with available targeted treatments. METHODS. Sixty-six consecutively referred USAID patients underwent underwent screening for the presence of an interferon signature using a standardized type-I IFN-response-gene score (IRG-S), cytokine profiling, and genetic evaluation by next-generation sequencing. RESULTS. Thirty-six USAID patients (55%) had elevated IRG-S. Neutrophilic panniculitis (40% vs. 0%), basal ganglia calcifications (46% vs. 0%), interstitial lung disease (47% vs. 5%), and myositis (60% vs. 10%) were more prevalent in patients with elevated IRG-S. Moderate IRG-S elevation and highly elevated serum IL-18 distinguished 8 patients with pulmonary alveolar proteinosis (PAP) and recurrent macrophage activation syndrome (MAS). Among patients with panniculitis and progressive cytopenias, 2 patients were compound heterozygous for potentially novel LRBA mutations, 4 patients harbored potentially novel splice variants in IKBKG (which encodes NF-κB essential modulator [NEMO]), and 6 patients had de novo frameshift mutations in SAMD9L. Of additional 12 patients with elevated IRG-S and CANDLE-, SAVI- or Aicardi-Goutières syndrome-like (AGS-like) phenotypes, 5 patients carried mutations in either SAMHD1, TREX1, PSMB8, or PSMG2. Two patients had anti-MDA5 autoantibody-positive juvenile dermatomyositis, and 7 could not be classified. Patients with LRBA, IKBKG, and SAMD9L mutations showed a pattern of IRG elevation that suggests prominent NF-κB activation different from the canonical interferonopathies CANDLE, SAVI, and AGS. CONCLUSIONS. In patients with elevated IRG-S, we identified characteristic clinical features and 3 additional autoinflammatory diseases: IL-18-mediated PAP and recurrent MAS (IL-18PAP-MAS), NEMO deleted exon 5-autoinflammatory syndrome (NEMO-NDAS), and SAMD9L-associated autoinflammatory disease (SAMD9L-SAAD). The IRG-S expands the diagnostic armamentarium in evaluating USAIDs and points to different pathways regulating IRG expression