INFINITy : A fast machine learning-based application for human influenza A and B virus subtyping

Influenza viruses are one of the main agents causing acute respiratory infections (ARI) in humans resulting in a large amount of illness and death globally.1, 2 The influenza viruses classification is based on the nomenclature proposed by the World Health Organization (WHO)3 that is widely accepted and used by the medical and scientific communities throughout the world. Since the pandemic in 2009, two subtypes of human influenza A viruses, A(H1N1)pdm09 and A(H3N2), and two lineages of influenza B, B/Victoria and B/Yamagata, have been responsible for the vast majority of cases each year. Within each subtype and lineage, different clades and genetic groups were described to reflect the continuous viral evolution, driven by antigenic drift. The WHO Global Influenza Surveillance and Response System (GISRS) studies human influenza viruses from >110 countries, to monitor circulating strains, understand epidemiology and evolution, and contribute to verify the vaccine effectiveness and update its formulation each year.4, 5 A growing number of laboratories and research centers is contributing to this initiative by sequencing the whole viral genome or the hemagglutinin (HA) gene from local strains.Instituto de BiotecnologíaFil: Cacciabue, Marco Polo Domingo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Cacciabue, Marco Polo Domingo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cacciabue, Marco Polo Domingo. Universidad Nacional de Luján. Departamento de Ciencias Básicas; ArgentinaFil: Marcone, Débora Natalia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología, Biotecnología y Genética. Cátedra de Virología; ArgentinaFil: Marcone, Débora Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Marcone, Débora Natalia. Pontificia Universidad Católica Argentina. Facultad de Ciencias Médicas. Cátedra de Microbiología, Parasitología y Virología; Argentin

Respiratory viral diagnosis by using an automated system of multiplex PCR (FilmArray) compared to conventional methods

Las infecciones respiratorias agudas producen una importante morbimortalidad y comúnmente son causadas por virus. En Argentina, los programas de vigilancia epidemiológica se basan en la detección de antígenos virales por inmunofluorescencia (IF), aunque es bien conocido que los métodos moleculares son más sensibles. El panel respiratorio (PR) FilmArray (PR-FilmArray) es un equipo comercial automatizado de PCR múltiples que detecta 17 virus respiratorios y 3 bacterias, en un sistema cerrado que requiere 5 min de procesamiento y una 1 h de instrumentación. Se evaluó un total de 315 muestras respiratorias de niños menores de 6 años con infecciones respiratorias agudas por IF para 8 virus respiratorios y por RT-PCR para rinovirus. Posteriormente, estas muestras se estudiaron con el PR-FilmArray. La frecuencia de positividad al considerar los 9 virus estudiados por IF y RT-PCR fue del 75 %; por PR-FilmArray fue del 92 %. El porcentaje de acuerdo positivo entre ambas metodologías fue del 70,5 % y el de acuerdo negativo fue del 99,6 % (intervalo de confianza 95 %: 65,5-75,1 y 99,2-99,8, respectivamente). El PR-FilmArray permitió obtener un mayor diagnóstico positivo (97 %) y detectó otros virus, como los coronavirus NL63, 229E, OC43 y HKU1 (10 %) y los bocavirus (18 %). Además, permitió identificar coinfecciones múltiples (39 %) con 2, 3, 4 y hasta 5 virus. Actualmente, la IF continúa siendo el método más utilizado en los países latinoamericanos para el diagnóstico de virus respiratorios por su bajo costo, por su capacidad para procesar un alto número de muestras simultáneamente y porque los resultados de los virus más frecuentes están disponibles en 5 h. Sin embargo, la futura incorporación de métodos moleculares aumentaría notablemente la capacidad diagnóstica.Acute respiratory infections, which are commonly caused by viruses, are an important cause of morbidity and mortality in children. In Argentina, national surveillance programs for the detection of respiratory viruses are usually performed by using immunofluorescence (IF) assays, although it is well known that molecular methods are more sensitive. An automated multiplex PCR device, the FilmArray-Respiratory Panel (FilmArray-RP), can detect 17 viral and 3 bacterial pathogens in a closed system that requires only 5 min of hands-on time and 1 h of instrumentation time. A total of 315 respiratory samples from children under 6 years of age suffering from acute respiratory infections, were studied by IF for 8 respiratory viruses and by RT-PCR for rhinoviruses. Later, these samples were tested by the FilmArray-RP. The positivity frequency obtained for the 9 viruses tested was 75% by IF/RT-PCR and 92% by the FilmArray-RP. The positive and negative percent agreement between both methods was 70.5%whereas the negative percent agreement was 99.6% (95% confidence interval:65.5-75.1 and 99.2-99.8 respectively). The FilmArray-RP allowed a higher positive diagnosis (97%) and detected other viruses such as corona virus NL63, 229E, OC43, HKU1 (10%) and bocavirus (18%). In addition, this method identified multiple coinfections (39%) with 2, 3, 4 and up to 5 different viruses. At present, IF is still the most frequently used method in most Latin American countries for respiratory viruses diagnosis due to its low cost, its capability to process a high number of samples simultaneously and the fast determination of results for the most frequent viruses, which are available within 5 h. However, the coming incorporation of molecular methods in routine procedures will significantly increase the diagnostic yield of these infections.Fil: Marcone, Débora Natalia. Centro de Educaciones Médicas e Investigaciones Clínicas ; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Carballal, Guadalupe. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Centro de Educaciones Médicas e Investigaciones Clínicas ; ArgentinaFil: Ricarte, Joaquina Carmen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Centro de Educaciones Médicas e Investigaciones Clínicas ; ArgentinaFil: Echavarría, Marcela Silvia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Centro de Educaciones Médicas e Investigaciones Clínicas ; Argentin

Incidence of viral respiratory infections in a prospective cohort of outpatient and hospitalized children aged ≤5 years and its associated cost in Buenos Aires, Argentina

Background: Although information about the incidence of viral respiratory illnesses and their associated cost can help health officials explore the value of interventions, data are limited from middle-income countries. Methods: During 2008-2010, we conducted a prospective cohort study and followed ~1,800 Argentinian children aged ≤5years to identify those children who were hospitalized or who sought care at an emergency room with any acute respiratory infection sign or symptom (e.g., rhinorrhea, cough, wheezing, tachypnea, retractions, or cyanosis). Respiratory samples were obtained for respiratory syncytial virus, influenza, parainfluenza, adenovirus, and metapneumovirus testing by immunofluorescence and for rhinovirus by real-time reverse transcription polymerase chain reaction. Results: The incidence of respiratory syncytial virus (24/1000 children-years), human metapneumovirus (8/1000 children-years), and influenza (8/1000 children-years) illnesses was highest among hospitalized children aged <6months and decreased among older children. In contrast, the incidence of rhinovirus was highest (12/1000 children-years) among those aged 6-23 months. In the emergency room, the incidence of rhinovirus was 459; respiratory syncytial virus 352; influenza 185; parainfluenza 177; metapneumovirus 130; and adenovirus 73/1,000 children-years. The total cost of hospitalization was a median of US$529 (Interquartile range, US$362-789). Conclusions: Our findings indicate that respiratory viruses, in particular rhinovirus, respiratory syncytial virus, metapneumovirus, and influenza may be associated with severe illness causing substantial economic burden.Fil: Marcone, Débora Natalia. Centro de Educaciones Médicas e Investigación Clínica ; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Durand, Lizette O.. Centers for Disease Control and Prevention; Estados UnidosFil: Azziz Baumgartner, Eduardo. Centers for Disease Control and Prevention; Estados UnidosFil: Vidaurreta, Santiago Manuel. Centro de Educaciones Médicas e Investigación Clínica ; ArgentinaFil: Ekstrom, Jorge. Centro de Educaciones Médicas e Investigación Clínica ; ArgentinaFil: Carballal, Guadalupe. Centro de Educaciones Médicas e Investigación Clínica ; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Echavarría, Marcela Silvia. Centro de Educaciones Médicas e Investigación Clínica ; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Rhinovirus detection by real time PCR in children with acute respiratory infection

Human rhinoviruses (HRV), the major cause of common colds, have a significant genetic diversity and are classified into 3 species (A, B, C) with more than 100 serotypes. HRV species C, described in 2006, can only be detected using molecular methods. The objectives of this paper were to adapt a real-time reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) assay for HRV detection and to further determine the frequency of HRV in respiratory samples from children under 2 years of age, with acute respiratory infection (ARI), from Buenos Aires, Argentina. Two real-time RT-PCR assays amplifying the 207 base pair of the 5´ non-coding region were compared. The original protocol includes locked nucleic acid analogues and a pyrimidine derivative in the forward primer, while the adapted protocol avoided those molecules. Of 67 respiratory samples, 17 (25.4 %) were positive with the original protocol, and 20 (29.9 %) with the adapted one. Discrepant results were confirmed by sequencing analysis. An expanded gold standard was defined to determine the performance of both assays, and was used to describe the clinical characteristics of positive patients. Better sensitivity and specificity were obtained with the adapted protocol. Considering the expanded gold standard, HRV were detected in 23/67 (34.3 %) patients with ARI: 8/18 (44.4 %) outpatients and 15/49 (30.6 %) hospitalized. Wheezing episodes were more frequent in HRV positive patients (43.5 %) than in HRV negative patients (18.2 %) (p = 0.041). This study describes the utility and clinical sensitivity of an adapted real-time RT-PCR assay for HRV detection.Los rinovirus humanos (RVH) constituyen la principal causa de resfrío común y poseen una gran diversidad genética, con más de 100 serotipos clasificados en tres especies (A, B, C). Los RVH C fueron descritos en 2006 y solo pueden detectarse utilizando métodos moleculares. El objetivo del presente trabajo fue adaptar un protocolo de transcripción reversa seguida de reacción en cadena de polimerasa (RT-PCR) en tiempo real para detectar RVH y posteriormente determinar su frecuencia en muestras de niños menores de 2 años con infección respiratoria aguda (IRA). Se compararon dos protocolos de RT-PCR en tiempo real, que amplifican 207 pares de bases de la región 5’ no codificante. El protocolo original incluyó un cebador directo con análogos de nucleótidos bloqueados (LNA) y un derivado pirimidínico en su secuencia, mientras que el protocolo adaptado no los incluyó. De 67 muestras, 17 (25,4 %) fueron positivas con el protocolo original y 20 (29,9 %) con el protocolo adaptado; los resultados discrepantes se confirmaron por secuenciación. Se definió un gold standard expandido para determinar el desempeño de ambos ensayos y describir las características clínicas de los pacientes RVH positivos. La mejor sensibilidad y especificidad se obtuvo con el protocolo adaptado. Considerando el gold standard expandido, se detectó RVH en 23/67 (34,3 %) pacientes con IRA: 44,4 % (8/18) ambulatorios y 30,6 % (15/49) internados. Los episodios de sibilancias fueron más frecuentes en pacientes RVH positivos (43,5 %) que en RVH negativos (18,2 %) (p = 0,041). El presente estudio describe la utilidad y la sensibilidad clínica de esta RT-PCR en tiempo real adaptada para detectar RVH.Fil: Marcone, Débora Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Videla, Cristina Mónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ricarte, Carmen. No especifíca;Fil: Carballal, Guadalupe. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Vidaurreta, Santiago Manuel. Centro de Educación Médica e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno"; ArgentinaFil: Echavarría, Marcela. No especifíca

Genotypes and phylogenetic analysis of adenovirus in children with respiratory infection in Buenos Aires, Argentina (2000-2018)

Human adenoviruses (HAdV) are one of the most frequent causes of respiratory infections around the world, causing mild to severe disease. In Argentina, many studies focused on the association of HAdV respiratory infection with severe disease and fatal outcomes leading to the discovery in 1984 of a genomic variant 7h associated with high fatality. Although several molecular studies reported the presence of at least 4 HAdV species (B, C, D and E) in Argentina, few sequences were available in the databases. In this study, sequences from the hexon gene region were obtained from 141 patients as a first approach to assess the genetic diversity of HAdVs circulating in Buenos Aires, Argentina. Phylogenetic analysis of these sequences and others recovered from public databases confirmed the circulation of the four above-mentioned species represented by 11 genotypes, with predominance in species B and C and shifts in their proportion in the studied period (2000 to 2018). The variants detected in Argentina, for most of the genotypes, were similar to those already described in other countries. However, uncommon lineages belonging to genotypes C2, C5 and E4 were detected, which might indicate the circulation of local variants and will deserve further studies of whole-genome sequences.Fil: Marcone, Débora Natalia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. CEMIC-CONICET. Centro de Educaciones Médicas e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno". CEMIC-CONICET; ArgentinaFil: Culasso, Andrés Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Virología; ArgentinaFil: Reyes, Noelia Paola. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. CEMIC-CONICET. Centro de Educaciones Médicas e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno". CEMIC-CONICET; ArgentinaFil: Kajon, Adriana. Lovelace Respiratory Research Institute; Estados UnidosFil: Viale, Diana. Gobierno de la Ciudad Autonoma de Buenos Aires. Hospital de Pediatria "juan P. Garrahan". Servicio de Microbiologia. Unidad de Virologia y Epidemiologia Molecular.; ArgentinaFil: Campos, Rodolfo Hector. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Virología; ArgentinaFil: Carballal, Guadalupe. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. CEMIC-CONICET. Centro de Educaciones Médicas e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno". CEMIC-CONICET; ArgentinaFil: Echavarría, Marcela Silvia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. CEMIC-CONICET. Centro de Educaciones Médicas e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno". CEMIC-CONICET; Argentin

Patógenos respiratorios en infantes menores de dos meses internados por infección respiratoria aguda

Las infecciones respiratorias agudas (IRA) son una causa habitual de morbimortalidad en infantes y los virus respiratorios son los agentes causales más frecuentes. El objetivo de este trabajo fue determinar la frecuencia de patógenos respiratorios, sus características y la evolución clínica de infantes menores de dos meses internados por IRA. Se realizó un estudio retrospectivo que comprendió 5 anos ˜ (2008-2011, 2014-2016). Se estudiaron los virus respiratorios y las bacterias atípicas utilizando el panel respiratorio FilmArray. Se evaluaron las características demográficas y clínicas, así como la evolución durante la internación. En 137 infantes menores de dos meses internados por IRA se determinó una positividad del 94,9% en 117 lactantes con infección adquirida en la comunidad (IRA-C) y del 20,0% en 20 lactantes que adquirieron la infección durante su hospitalización en la unidad de cuidados intensivos neonatal (IRA-N) (p < 0,001). En los infantes con IRA-C los virus más frecuentes fueron sincicial respiratorio (RSV) (52,1%) y rinovirus/enterovirus (RV/EV) (41,0%). Se determinaron coinfecciones en un cuarto de los infantes, la combinación RSV-RV/EV fue la más frecuente. En los infantes con IRA-N se detectó RV/EV, RSV o parainfluenza-3 como únicos patógenos. La mayoría de los infantes con IRA-C presentaron IRA baja (81,2%), mientras que más de la mitad de los infantes en UCIN tenían IRA alta (55,0%). La mediana de la duración de la internación en infantes con IRA-C fue de 4 días (RIC: 2-6). Los infantes positivos con IRA-N tuvieron una mediana de internación más larga (71 días [RIC: 42-99]) en comparación con los infantes negativos (58 días [RIC: 49-71]) (p = 0,507). Los virus respiratorios fueron los principales agentes causales de IRA adquirida en la comunidad en infantes menores de dos meses que requirieron internación; los virus más frecuentes fueron RSV y RV/EV. Aunque se observó una baja tasa de positividad de patógenos en infantes con infección nosocomial, estos agentes podrían prolongar la duración de la internación.Lower acute respiratory infections (ARI) are a frequent cause of morbidity and mortality in infants, respiratory viruses being the major causative agents. The aim of this work was to determine the respiratory pathogen frequency, the clinical characteristics and the outcome in infants <2 months old hospitalized with ARI. A retrospective study was performed during a five-year period (2008–2011, 2014–2016). Respiratory viruses and atypical bacteria were studied using the FilmArray-Respiratory Panel. Demographic and clinical characteristics, hospitalization course and outcomes were evaluated. Of the 137 infants <2 months old hospitalized with ARI studied, a 94.9% positivity rate as determined in 117 infants with community-acquired infection and 20.0% in 20 infants who acquired the infection during their birth hospitalization in the neonatal intensive care units (NICU) (nosocomial ARI) (p < 0.001). In infants with community-acquired infection, Respiratory syncytial virus (RSV) (52.1%) and Rhinovirus/Enterovirus (RV/EV) (41.0%) were the most frequent detected pathogens. Coinfections were determined in one quarter of the infants, RSV-RV/EV being the most frequent combination. In infants with nosocomial infection, RV/EV, RSV or Parainfluenza-3 were detected as single pathogens. Most infants with community-acquired infection presented lower ARI (81.2%) while most infants in the NICU had upper ARI (55.0%). The median length of stay (LOS) in infants with community-acquired ARI was 4 days (IQR: 2–6). Positive infants with nosocomial infection had longer median LOS (71 days [IQR:42–99]) compared to negative infants (58 days [IQR: 49–71]) (p = 0.507). Respiratory viruses were detected as the major causative agents of community-acquired infection in hospitalized infants <2-months old, RSV and RV/EV being the most frequently detected. Although a low pathogen positivity rate was observed in infants with nosocomial infection, they may prolong the LOS.Fil: Marcone, Débora Natalia. Centro de Educaciones Médicas e Investigación Clínica "Norberto Quirno"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; ArgentinaFil: Carballal, Guadalupe. Centro de Educaciones Médicas e Investigación Clínica "Norberto Quirno"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; ArgentinaFil: Reyes, Noelia. Centro de Educaciones Médicas e Investigación Clínica "Norberto Quirno"; ArgentinaFil: Ellis, Alejandro. Sanatorio Mater Dei; ArgentinaFil: Rubies, Yamile. Centro de Educaciones Médicas e Investigación Clínica "Norberto Quirno"; ArgentinaFil: Vidaurreta, Santiago. Centro de Educaciones Médicas e Investigación Clínica "Norberto Quirno"; ArgentinaFil: Echavarría, Marcela Silvia. Centro de Educaciones Médicas e Investigación Clínica "Norberto Quirno"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; Argentin

Rhinoviruses: Frequency in nonhospitalized children with acute respiratory infection

Los métodos moleculares para diagnosticar rinovirus humanos (RVH) han aumentado la sensibilidad de detección. Esto ha permitido documentar la asociación entre los RVH y las infecciones respiratorias agudas (IRA) altas y bajas. La infección por RVH durante la infancia se asoció con posterior desarrollo de asma. Se estudió la frecuencia de RVH en 186 niños menores de 6 años ambulatorios con IRA (alta o baja), durante 2 años consecutivos (1/6/2008 - 31/5/2010). Se correlacionó la presencia de RVH con los antecedentes y características clínico-epidemiológicas. La detección de RVH se realizó con una RT-PCR en tiempo real que amplifica parte de la región 5' no codificante del genoma. Los virus respiratorios clásicos se estudiaron por inmunofluorescencia. En el 61% de los niños se detectó etiología viral. Las frecuencias fueron: RVH 27%, virus sincicial respiratorio (VSR) 16%, influenza A y B 9%, parainfluenza 8%, metapneumovirus 7% y adenovirus 0.5%. Se observaron coinfecciones duales en 8 casos, siendo RVH el más frecuente (en 4 de ellos). Los RVH circularon durante todo el período estudiado, con picos en invierno y primavera. No se observaron diferencias clínico-epidemiológicas significativas entre pacientes con o sin RVH, excepto un mayor porcentaje de niños afebriles con RVH. Los RVH fueron los virus más detectados en niños ambulatorios, principalmente en menores de 2 años, los segundos virus asociados a bronquiolitis, luego del VSR, y detectados tres veces más en los niños expuestos a tabaquismo pasivo (OR: 2,91; p = 0.012) que en el resto. Fueron identificados como único agente en el 28% de las bronquiolitis.Molecular methods for human rhinoviruses (HRV) have increased the sensitivity in their diagnosis. HRV may cause acute respiratory infections (ARI) of the upper and lower respiratory tract. HRV infection during childhood is a predictor of asthma development. In this study, the HRV frequency in outpatient children with ARI was determined, and their clinical features and previous conditions were evaluated. A total of 186 respiratory samples of children under 6 year old attending the CEMIC pediatric emergency room from June 1, 2008 to May 31, 2010, were studied. Classical respiratory viruses were detected by immunofluorescence. A real time RT-PCR that amplifies part of the 5' non coding genomic region was used for HRV detection. Viral detection was obtained in 61% of children. The frequency was: 27% for HRV, 16% for respiratory syncytial virus (RSV), 9% for influenza, 8% for parainfluenza, 7% for metapneumovirus and 0.5% for adenovirus. Dual coinfection was detected in 8 children and HRV were the most frequent, detected in 4 of them. HRV circulated during the two year period of the study, with peaks during winter and spring. No clinical difference was observed between patients with or without HRV, except an increase percent of children with HRV without fever. HRV were the most frequent viruses detected in this population, mainly in children under 2 year old, the second cause of bronchiolitis after RSV and more frequently detected in children exposed to passive smoking (OR = 2.91; p = 0.012), and were detected as the sole etiologic agent in 28% of bronchiolitis.Fil: Marcone, Débora Natalia. Centro de Educación Médica e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ricarte, Joaquina Carmen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Centro de Educación Médica e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno"; ArgentinaFil: Videla, Cristina Mónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Centro de Educación Médica e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno"; ArgentinaFil: Ekstrom, Jorge. Centro de Educación Médica e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno"; ArgentinaFil: Carballal, Guadalupe. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Centro de Educación Médica e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno"; ArgentinaFil: Vidaurreta, Santiago Manuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Centro de Educación Médica e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno"; ArgentinaFil: Echavarría, Marcela Silvia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Centro de Educación Médica e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno"; Argentin

Evaluation of a lyophilized CRISPR-Cas12 assay for a sensitive, specific, and rapid detection of SARS-CoV-2

We evaluated a lyophilized CRISPR-Cas12 assay for SARS-CoV-2 detection (Lyo-CRISPR SARS-CoV-2 kit) based on reverse transcription, isothermal amplification, and CRISPR-Cas12 reaction. From a total of 210 RNA samples extracted from nasopharyngeal swabs using spin columns, the Lyo-CRISPR SARS-CoV-2 kit detected 105/105 (100%; 95% confidence interval (CI): 96.55–100) positive samples and 104/105 (99.05%; 95% CI: 94.81–99.97) negative samples that were previously tested using commercial RT-qPCR. The estimated overall Kappa index was 0.991, reflecting an almost perfect concordance level between the two diagnostic tests. An initial validation test was also performed on 30 nasopharyngeal samples collected in lysis buffer, in which the Lyo-CRISPR SARS-CoV-2 kit detected 20/21 (95.24%; 95% CI: 76.18–99.88) positive samples and 9/9 (100%; 95% CI: 66.37–100) negative samples. The estimated Kappa index was 0.923, indicating a strong concordance between the test procedures. The Lyo-CRISPR SARS-CoV-2 kit was suitable for detecting a wide range of RT-qPCR-positive samples (cycle threshold range: 11.45–36.90) and dilutions of heat-inactivated virus (range: 2.5–100 copies/µL); no cross-reaction was observed with the other respiratory pathogens tested. We demonstrated that the performance of the Lyo-CRISPR SARS-CoV-2 kit was similar to that of commercial RT-qPCR, as the former was highly sensitive and specific, timesaving (1.5 h), inexpensive, and did not require sophisticated equipment. The use of this kit would reduce the time taken for diagnosis and facilitate molecular diagnosis in low-resource laboratories.Instituto de VirologíaFil: Curti, Lucía Ana. CASPR Biotech; Estados UnidosFil: Primost, Ivana. Hospital Municipal de Trauma y Emergencias Dr. Federico Abete. Genetics and Molecular Biology Laboratory; ArgentinaFil: Valla, Sofia. Universidad Nacional del Noroeste de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigaciones y Transferencia del Noroeste de la Provincia de Buenos Aires (CITNOBA). Centro de Investigaciones Básicas y Aplicadas (CIBA); ArgentinaFil: Valla, Sofia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Ibañez Alegre, Daiana. Universidad Nacional de Misiones. Instituto de Biología Subtropical. Laboratorio Grupo de Investigación en Genética Aplicada (GIGA); ArgentinaFil: Ibañez Alegre, Daiana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Olguin Perglione, Cecilia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; ArgentinaFil: Olguin Perglione, Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Repizo, Guillermo Daniel. CASPR Biotech; Estados UnidosFil: Lara, Julia. CASPR Biotech; Estados UnidosFil: Parcerisa, Ivana. CASPR Biotech; Estados UnidosFil: Palacios, Antonela. CASPR Biotech; Estados UnidosFil: Llases, María Eugenia. CASPR Biotech; Estados UnidosFil: Rinflerch, Adriana. Universidad Nacional de Misiones. Instituto de Biología Subtropical. Laboratorio Grupo de Investigación en Genética Aplicada (GIGA); ArgentinaFil: Rinflerch, Adriana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Barrios, Melanie. Universidad de Buenos Aires. Instituto de Producción Agropecuaria; ArgentinaFil: Pereyra Bonnet, Federico. CASPR Biotech; Estados UnidosFil: Gimenez, Carla Alejandra. CASPR Biotech; Estados UnidosFil: Marcone, Débora Natalia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología, Biotecnología y Genética. Cátedra de Virología; ArgentinaFil: Marcone, Débora Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Virus respiratorios emergentes y el nuevo impacto de los rinovirus por medio del diagnóstico molecular

Las infecciones respiratorias (IRA) constituyen una de las principales causas de morbilidad en el ser humano en todo el mundo. Las IRA del tracto inferior (IRA baja) son responsables de 4 millones de muertes anuales mundialmente. Numerosos virus conocidos (influenza, virus respiratorio sincicial, adenovirus y parainfluenza) son responsables de algunas de estas infecciones. Sin embargo, en una proporción importante (50-60%) el o los patógenos responsables no podían ser identificados con las metodologías convencionales de diagnóstico. La identificación de patógenos desconocidos empleando tecnología molecular es difícil cuando la secuencia blanco es desconocida. Para solucionar este problema, Allander y col. (2005) y van der Hock (2004) desarrollaron innovadoras metodologías moleculares que han permitido la identificación de nuevos virus emergentes asociados a IRA tales como el Bocavirus humano y los nuevos coronavirus, respectivamente. Los virus de influenza A (H1N1) pandémica, influenza aviaria, metapneumovirus y SARS se tratan en los capítulos respectivos. En este capítulo comentaremos los virus humanos emergentes, detectados en los comienzos del siglo XXI y productores o asociados a IRA: los nuevos bocavirus humanos, los nuevos coronavirus y los poliomavirus respiratorios. Asimismo, se describirá el nuevo impacto de virus ya conocidos, los rinovirus (causantes del resfrío común) en las IRA del tracto inferior, cuyo estudio fue posible mediante procedimientos moleculares.Fil: Carballal, Guadalupe. Centro de Educación Médica e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno". Dirección de Asistencia Médica. Departamento de Análisis Clínicos; ArgentinaFil: Marcone, Débora Natalia. Centro de Educaciones Médicas e Investigación Clínica "Norberto Quirno"; ArgentinaFil: Videla, Cristina Mónica. Centro de Educaciones Médicas e Investigación Clínica "Norberto Quirno"; Argentin

Genetic diversity and clinical impact of human rhinoviruses in hospitalized and outpatient children with acute respiratory infection, Argentina

BACKGROUND: Human rhinoviruses (HRV) are recognized as a cause of upper and lower acute respiratory infections (ARI). The circulating species and their clinical impact were not described in Argentina. OBJECTIVES: To describe the molecular epidemiology of HRV in children and to determine the association of HRV species with outcome and severity. STUDY DESIGN: Hospitalized and outpatients children <6 years old with ARI without comorbidities (n=620) were enrolled (2008-2010). Demographic, clinical data and outcome were analyzed. HRV were identified by RT-PCR. Phylogenetic analysis and demographic reconstruction for HRV were performed in selected samples. RESULTS: HRV were detected in 252/620 (40.6%) of children; 8.5% in viral coinfection. Bronchiolitis (55%) and pneumonia (13%) were the most frequent clinical diagnosis. Of 202 inpatients with HRV: 72% required oxygen supplementation, 11% intensive care unit and 3% mechanical ventilation. HRV were identified as a risk factor for hospitalization (OR: 2.47). All three HRV species were detected being HRV-A (55%) and HRV-C (43%) the most frequent; HRV-B was infrequent (2%). Of 44 sequenced HRV, 30 genotypes were detected. Seven of them were the most prevalent and circulated during limited periods of time. The demographic reconstruction revealed a constant population size and a high turnover rate of genotypes. Demographic and clinical outcome were similar for HRV-A and HRV-C infections. CONCLUSION: This study highlights the clinical impact of HRV in children without comorbidities as a cause of lower ARI and hospitalization. The high frequency of HRV infections may be associated with the simultaneous circulation of genotypes and their high turnover rate.Fil: Marcone, Débora Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. CEMIC-CONICET. Centro de Educaciones Médicas e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno". CEMIC-CONICET.; Argentina. Centro de Educaciones Médicas e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno". Dirección de Asistencia Médica. Departamento de Análisis Clínicos. Laboratorio de Virología Clínica; ArgentinaFil: Culasso, Andrés Carlos Alberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; ArgentinaFil: Carballal, Guadalupe. Centro de Educaciones Médicas e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno". Dirección de Asistencia Médica. Departamento de Análisis Clínicos. Laboratorio de Virología Clínica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. CEMIC-CONICET. Centro de Educaciones Médicas e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno". CEMIC-CONICET.; ArgentinaFil: Campos, Rodolfo Hector. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; ArgentinaFil: Echavarría, Marcela Silvia. Centro de Educaciones Médicas e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno". Dirección de Asistencia Médica. Departamento de Análisis Clínicos. Laboratorio de Virología Clínica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. CEMIC-CONICET. Centro de Educaciones Médicas e Investigaciones Clínicas "Norberto Quirno". CEMIC-CONICET.; Argentin