Functional role of antibodies generated in heifers through immunization with Staphylococcus aureus vaccines in invasion and phagocytosis assays

A successful Staphylococcus aureus vaccine should elicit a long-term antibody response that prevents establishment of the infection. The aim of the present study was to evaluate the functional role of antibodies raised against different S. aureus CP5 vaccines in invasion to bovine mammary epithelial cells (MAC-T) and phagocytosis by bovine milk macrophages in vitro. Sera and whey from cows immunized with a whole-cell S. aureus CP5 vaccine adjuvanted with Al(OH)3 or with ISCOM Matrix, significantly reduced internalization of S. aureus in MAC-T cells without significant differences between both groups. The effect of antibodies generated by a S. aureus whole-cell and a lysate vaccine formulated with ISCOM Matrix was also evaluated. Sera and whey from both immunized groups significantly reduced S. aureus internalization in MAC-T cells without significant differences between both groups. Whey antibodies against whole-cell and lysate vaccines were also able to inhibit internalization in MAC-T cells of a heterologous S. aureus strain. In addition, sera from animals vaccinated with S. aureus lysate or bacterin promoted milk macrophage phagocytosis. These results provide an insight into the potential mechanisms by which these vaccines can afford protection to the mammary gland against S. aureus intramammary infection.EEA RafaelaFil: Renna, Maria Sol. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Pereyra, Elizabet Amanda Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Laboratorio de Biología Celular y Molecular Aplicada; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Baravalle, Celina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Laboratorio de Biología Celular y Molecular Aplicada; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Camussone, Cecilia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Dallard, Bibiana Elisabet. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral. Laboratorio de Biología Celular y Molecular Aplicada; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Marcipar, Iván Sergio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas, Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; ArgentinaFil: Calvinho, Luis Fernando. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin

Functional autoreactive anti-β2 adrenergic antibodies may contribute to insulin resistance profile in patients with chronic chagas disease

Potential activation of β2 adrenergic receptors (β2AR) by specific autoreactive antibodies (Abs) that arise during the host reaction to Trypanosoma cruzi, could contribute to the elevated prevalence of metabolic disturbances described in patients with chronic Chagas disease (CCD). This study aimed to determine the prevalence of anti-β2AR Abs in patients with CCD, as well as the correlation of these Abs with the presence of glucose and lipid metabolism disturbances, in order to explore their association with an insulin resistance profile. Additionally, we tested the functional effects of anti-β2AR Abs employing an in vitro bioassay with neuroendocrine cells expressing β2AR. A clinical and metabolic evaluation including an OGTT was performed in 80 CCD patients and 40 controls. Anti-β2AR Abs were measured by an in-house-developed ELISA, and the β2 adrenergic activity of affinity-purified IgG fractions from patient’ sera were assayed in CRE-Luc and POMCLuc transfected AtT-20 cells. A higher proportion of dysglycemia (72.5% vs. 37.5%; p = 0.001) was observed in the CCD group, accompanied by increased HOMA2-IR (p = 0.019), especially in subjects with Abs (+). Anti-β2AR Abs reactivity (7.01 (2.39–20.5); p = 0.0004) and age >50 years (3.83 (1.30–11.25); p = 0.014) resulted as relevant for IR prediction (AUC: 0.786). Concordantly, Abs (+) CCD patients showed elevated metabolic risk scores and an increased prevalence of atherogenic dyslipidemia (p = 0.040), as compared to Abs (−) patients and controls. On functional bioassays, Abs exerted specific and dose-dependent β2-agonist effects. Our findings suggest that anti-β2AR Abs may induce the activation of β2AR in other tissues besides the heart; furthermore, we show that in patients with CCD these Abs are associated with an insulin resistance profile and atherogenic dyslipidemia, providing biological plausibility to the hypothesis that adrenergic activation by anti-β2AR Abs could contribute to the pathogenesis of metabolic disturbances described in CCD patients, increasing their cardiovascular risk.Fil: Rodeles Antonelli, Luz María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral; ArgentinaFil: Vicco, Miguel Hernán. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral; ArgentinaFil: Siano, Alvaro Sebastían. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Departamento de Química Organica. Laboratorio de Peptidos Bioactivos; ArgentinaFil: Fuchs, Leonardo Andrés. Universidad Nacional del Litoral; ArgentinaFil: Peverengo, Luz María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Laboratorio de Tecnología Inmunológica; ArgentinaFil: Sanchez Puch, Silvia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones en Microbiología y Parasitología Médica; ArgentinaFil: Cymeryng, Cora Betriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Marcipar, Iván Sergio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Laboratorio de Tecnología Inmunológica; ArgentinaFil: Arias, Pablo. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Cátedra de Fisiología Humana; Argentin

Anticuerpos anti-B13 en infectados crónicos por Trypanosoma cruzi y su asociación con la cardiopatía chagásica

La proteína B13 inmunodominante de Trypanosoma cruzi, presenta una secuencia homóloga (AAAGDK) a la cadena pesada de miosina cardíaca humana (AAALDK) asociada a mimetismo molecular, posible mecanismo patogénico en la enfermedad de Chagas. El objetivo de este trabajo fue analizar, en adultos infectados crónicos con Trypanosoma cruzi, la asociación entre los niveles de anticuerpos anti-B13 y desarrollo de cardiopatía chagásica.Se realizó un estudio transversal en 89 pacientes con infección crónica por Trypanosoma cruzi distribuidos en: 34 infectados sin patología demostrable (grupo A); 42 infectados con cardiopatía chagásica crónica de diferente severidad (grupo B) y; 13 infectados con miocardiopatía chagásica y factores de riesgo cardiovasculares asociados (grupo C). Como grupo control se estudiaron 46 personas no infectadas con Trypanosoma cruzi: 16 con cardiopatía (grupo D) y 30 sanas (grupo E). Además en 13 pacientes del grupo B, edad promedio de 43,3±13,2 años, se realizó un estudio de cohorte retrospectivo con seguimiento de 12,6±6,5 años, a fin de correlacionar el nivel de respuesta anti-B13 y la progresión de la cardiopatía. Estos pacientes no presentaron cambios en los niveles de anticuerpos anti-B13 a través del tiempo, independientemente de la evolución clínica.No se observaron diferencias significativas entre los grupos A, B y C tanto en la presencia de anticuerpos anti-B13 (A=91,1%, B=80,8% y C=84,6%), como en el nivel de respuesta de los mismos. Sin embargo, en los pacientes del grupo B con alto compromiso cardíaco los niveles de anticuerpos anti-B13 fueron más elevados.Los pacientes del grupo control con cardiopatía, 50% fueron positivos para anticuerpos anti-B13 aunque con muy escasa reactividad, mientras las personas sanas no presentaron respuesta a esta proteína.Si bien no se encontró asociación entre el nivel de anticuerpos anti-B13 y cardiopatía chagásica, se observaron valores más altos en los infectados con compromiso cardíaco severo, sin variación en el tiempo.Estos resultados sugieren que los anticuerpos anti-B13 podrían ser utilizados como marcadores de progresión clínica en lo pacientes con cardiopatía chagásica crónica.Fil: Olivera, Lorena Veronica. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Centro de Investigaciones sobre Endemias Nacionales; ArgentinaFil: Bizai, María Laura. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Centro de Investigaciones sobre Endemias Nacionales; ArgentinaFil: Arias, Evelyn. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Centro de Investigaciones sobre Endemias Nacionales; ArgentinaFil: Suasnábar, Santiago Martín. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Centro de Investigaciones sobre Endemias Nacionales; ArgentinaFil: Marcipar, Iván Sergio. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Centro de Investigaciones sobre Endemias Nacionales; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fabbro, Diana Lucrecia. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Centro de Investigaciones sobre Endemias Nacionales; Argentin

Intranasal trans-sialidase-based vaccine against Trypanosoma cruzi triggers a mixed cytokine profile in the nasopharynx-associated lymphoid tissue and confers local and systemic immunogenicity

Trypanosoma cruzi, the agent of Chagas disease, can infect through conjunctive or oral mucosas. Therefore, the induction of mucosal immunity by vaccination is relevant not only to trigger local protection but also to stimulate both humoral and cell-mediated responses in systemic sites to control parasite dissemination. In a previous study, we demonstrated that a nasal vaccine based on a Trans-sialidase (TS) fragment plus the mucosal STING agonist c-di-AMP, was highly immunogenic and elicited prophylactic capacity. However, the immune profile induced by TS-based nasal vaccines at the nasopharyngeal-associated lymphoid tissue (NALT), the target site of nasal immunization, remains unknown. Hence, we analyzed the NALT cytokine expression generated by a TS-based vaccine plus c-di-AMP (TSdA+c-di-AMP) and their association with mucosal and systemic immunogenicity. The vaccine was administered intranasally, in 3 doses separated by 15 days each other. Control groups received TSdA, c-di-AMP, or the vehicle in a similar schedule. We demonstrated that female BALB/c mice immunized intranasally with TSdA+c-di-AMP boosted NALT expression of IFN-γ and IL-6, as well as IFN-β and TGF-β. TSdA+c-di-AMP increased TSdA-specific IgA secretion in the nasal passages and also in the distal intestinal mucosa. Moreover, T and B-lymphocytes from NALT-draining cervical lymph nodes and spleen showed an intense proliferation after ex-vivo stimulation with TSdA. Intranasal administration of TSdA+c-di-AMP provokes an enhancement of TSdA-specific IgG2a and IgG1 plasma antibodies, accompanied by an increase IgG2a/IgG1 ratio, indicative of a Th1-biased profile. In addition, immune plasma derived from TSdA+c-di-AMP vaccinated mice exhibit in-vivo and ex-vivo protective capacity. Lastly, TSdA+c-di-AMP nasal vaccine also promotes intense footpad swelling after local TSdA challenge. Our data support that TSdA+c-di-AMP nasal vaccine triggers a NALT mixed pattern of cytokines that were clearly associated with an evident mucosal and systemic immunogenicity. These data are useful for further understanding the immune responses elicited by the NALT following intranasal immunization and the rational design of TS-based vaccination strategies for prophylaxis against T. cruzi.Fil: Pacini, María Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Inmunología Clinica y Experimental de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Inmunología Clinica y Experimental de Rosario; ArgentinaFil: Bulfoni Balbi, Camila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Inmunología Clinica y Experimental de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Inmunología Clinica y Experimental de Rosario; ArgentinaFil: Dinatale, Brenda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Inmunología Clinica y Experimental de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Inmunología Clinica y Experimental de Rosario; ArgentinaFil: González, Florencia Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Inmunología Clinica y Experimental de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Inmunología Clinica y Experimental de Rosario; ArgentinaFil: Prochetto, Estefanía Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Laboratorio de Tecnología Inmunológica; ArgentinaFil: de Hernández, María Azul. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Cribb, Pamela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Farré, Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Inmunología Clinica y Experimental de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Inmunología Clinica y Experimental de Rosario; ArgentinaFil: Espariz, Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Blancato, Victor Sebastian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Magni, Christian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario; ArgentinaFil: Marcipar, Iván Sergio. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Laboratorio de Tecnología Inmunológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; ArgentinaFil: Perez, Ana Rosa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Inmunología Clinica y Experimental de Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Inmunología Clinica y Experimental de Rosario; Argentin

A New Cage-Like Particle Adjuvant Enhances Protection of Foot-and-Mouth Disease Vaccine

Foot-and-Mouth Disease (FMD) is an acute viral disease that causes important economy losses. Vaccines with new low-cost adjuvants that stimulate protective immune responses are needed and can be assayed in a mouse model to predict their effectiveness in cattle. Immunostimulant Particle Adjuvant (ISPA), also known as cage-like particle adjuvant, consisting of lipid boxes of dipalmitoyl-phosphatidylcholine, cholesterol, sterylamine, alpha-tocopherol, and QuilA saponin, was shown to enhance protection of a recombinant vaccine against Trypanosoma cruzi in a mouse model. Thus, in the present work, we studied the effects on the magnitude and type of immunity elicited in mice and cattle in response to a vaccine based on inactivated FMD virus (iFMDV) formulated with ISPA. It was demonstrated that iFMDV–ISPA induced protection in mice against challenge and elicited a specific antibody response in sera, characterized by a balanced Th1/Th2 profile. In cattle, the antibody titers reached corresponded to an expected percentage of protection (EPP) higher than 80%. EPP calculates the probability that livestock would be protected against a 10,000 bovine infectious doses challenge after vaccination. Moreover, in comparison with the non-adjuvanted iFMDV vaccine, iFMDV–ISPA elicited an increased specific T-cell response against the virus, including higher interferon gamma (IFNγ)+/CD8+ lymphocyte production in cattle. In this work, we report for first time that an inactivated FMDV serotype A vaccine adjuvanted with ISPA is capable of inducing protection against challenge in a murine model and of improving the specific immune responses against the virus in cattle.Fil: Bidart, Juan Esteban. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigacion En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas.; ArgentinaFil: Kornuta, Claudia Alejandra. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigacion En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas.; ArgentinaFil: Gammella, Mariela Vanesa. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigacion En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas.; ArgentinaFil: Gnazzo, Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Biología Subtropical. Instituto de Biología Subtropical - Nodo Puerto Iguazú | Universidad Nacional de Misiones. Instituto de Biología Subtropical. Instituto de Biología Subtropical - Nodo Puerto Iguazú; ArgentinaFil: Soria, Ivana. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigacion En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas.; ArgentinaFil: Langellotti, Cecilia Ana. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigacion En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas.; ArgentinaFil: Mongini, Claudia. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigacion En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas.; ArgentinaFil: Galarza, Roxana. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estacion Experimental Agropecuaria Cuenca del Salado. Agencia de Extension Rural Chascomus.; ArgentinaFil: Calvinho, Luis Fernando. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Santa Fe. Estación Experimental Agropecuaria Rafaela; ArgentinaFil: Lupi, Giuliana Antonella. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional del Litoral; ArgentinaFil: Quattrocchi, Valeria. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigacion En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas.; ArgentinaFil: Marcipar, Iván Sergio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional del Litoral; ArgentinaFil: Zamorano, Patricia Ines. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigacion En Ciencias Veterinarias y Agronomicas. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virologia E Innovaciones Tecnologicas.; Argentin

Evaluation of recombinant antigens of Trypanosoma cruzi to diagnose infection in naturally infected dogs from Chaco region, Argentina

Dogs are considered the main mammal reservoir of Trypanosoma cruzi in domiciliary environments. Consequently, accurate detection of T. cruzi infection in canine populations is epidemiologically relevant. Here we analyzed the utility of the T. cruzi recombinant antigens FRA, SAPA, CP1, Ag1 and a SAPA/TSSA VI mixture, in an ELISA format. We used a positive control group of sera obtained from 38 dogs from the Chaco region in Argentina with positive Homogenate-ELISA reaction, all of them also positive by xenodiagnosis and/or PCR. The negative group included 19 dogs from a non-endemic area. Sensitivity, specificity, Area Under the Curve (AUC) of the Receiver-Operating Charactheristic (ROC) curve and Kappa index were obtained in order to compare the diagnostic efficiency of the tests. The SAPA/TSSA VI had the highest performance, with a sensitivity of 94.7% and an AUC ROC of 0.99 that indicates high accuracy. Among individual antigens, SAPA-ELISA yielded the highest sensitivity (86.8%) and AUC ROC (0.96), whereas FRA-ELISA was the least efficient test (sensitivity=36.8%; AUC ROC=0.53). Our results showed that the use of SAPA/TSSA VI in ELISA assays could be a useful tool to study dogs naturally infected with T. cruzi in endemic areas.Fil: Floridia Yapur, Noelia Aldana del Rosario. Universidad Nacional de Salta. Sede Regional Orán. Instituto de Investigación de Enfermedades Tropicales; Argentina. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias Naturales. Escuela de Biología. Cátedra de Química Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Salta; ArgentinaFil: Vega Benedetti, Ana Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Salta. Instituto de Patología Experimental. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias de la Salud. Instituto de Patología Experimental; ArgentinaFil: Monje Rumi, Maria Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Salta. Instituto de Patología Experimental. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias de la Salud. Instituto de Patología Experimental; ArgentinaFil: Ragone, Paula Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Salta. Instituto de Patología Experimental. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias de la Salud. Instituto de Patología Experimental; ArgentinaFil: Lauthier, Juan José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Salta. Instituto de Patología Experimental. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias de la Salud. Instituto de Patología Experimental; ArgentinaFil: Tomasini, Nicolás. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Salta. Instituto de Patología Experimental. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias de la Salud. Instituto de Patología Experimental; ArgentinaFil: Alberti D'amato, Anahí Maitén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Salta. Instituto de Patología Experimental. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias de la Salud. Instituto de Patología Experimental; ArgentinaFil: López Quiroga, Inés Raquel. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias Naturales. Escuela de Biología. Cátedra de Química Biológica; Argentina. Universidad Nacional de Salta. Sede Regional Orán. Instituto de Investigación de Enfermedades Tropicales; ArgentinaFil: Diosque, Patricio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Salta. Instituto de Patología Experimental. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias de la Salud. Instituto de Patología Experimental; ArgentinaFil: Marcipar, Iván Sergio. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Laboratorio de Tecnología Inmunológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Salta; ArgentinaFil: Nasser, Julio Rubén. Universidad Nacional de Salta. Sede Regional Orán. Instituto de Investigación de Enfermedades Tropicales; Argentina. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias Naturales. Escuela de Biología. Cátedra de Química Biológica; ArgentinaFil: Cimino, Rubén Oscar. Universidad Nacional de Salta. Sede Regional Orán. Instituto de Investigación de Enfermedades Tropicales; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Salta; Argentina. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias Naturales. Escuela de Biología. Cátedra de Química Biológica; Argentin

Advances in Serological Diagnosis of Chagas' Disease by Using Recombinant Proteins

Advances in serological diagnosis of Chagas disease by using recombinant proteins Conventional serology to determine specific antibodies against Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of Chagas disease, presents different sensitivities and selectivities, depending on the immunological technique used to perform the determination (Salles et al 1996). Since the emergence of recombinant DNA technology, many groups have prepared and assessed protein molecules to be used as antigens, which have been heterologically expressed, mainly in Escherichia coli cells. This technology has the advantage of allowing the exclusive evaluation of defined antigens for specific antibodies determination, in the absence of other components that usually occur when the antigen has been obtained by standard purification methods from native sources. Once these molecules have been distinctly specified, they can be massively produced as a highly unvarying, homogeneous chemical. This are desirable attributes when producing analytical chemicals for infectious diseases diagnosis, since they allow standardizing tests. To enhance even more diagnostic chemicals production, researchers have proposed using multiepitope molecules, obtained by the fusion of fragments that show noteworthy diagnostic properties (Aguirre et al 2006, Camussone et al 2009). The use of these molecules has proved to lead to homogeneous and reproducible antigen attachment to the surfaces of enzyme-linked-immunosorbent-assays (ELISA), bioelectrodes, or latex particles (Camussone et al 2009, Belluzzo et al 2011, Gonzalez et al 2010). The reason for this is that when using a single molecule to sensitize the surface, lesser protein competition for the active sites occurs than it does when using protein mixtures. Moreover, when sensitizing surfaces with multiepitope constructions, a greater number of specific binding sites are exposed to react with the target antibodies (Camussone et al 2009). Therefore, when using this kind of capturing molecule, the freely available epitopes proportion is increased. In the proposed book chapter we will discus the convenience of using recombinant antigens to evaluate chagasic specific antibodies, for the diverse cases that commonly occur in the clinical practice, namely: 1) Diagnosis of chronic disease and screening for transfusion and transplantation: We will discuss the utility of defined antigens when they are used isolated, in mixtures or fused, taking into account the sensitivity an specificity reported by several authors. We will mainly focus in the ability of particular antigens to distinguish between infections caused by T. cruzi and Leishmania sp, considering the needs of the regions where these diseases are co-endemic.   2) Parasitological cure In the book chapter we will analyze the recombinant antigens value to efficiently determine parasitological cure of Chagas´ disease. Conventional serology displays sera negativization of the largest part of the patients treated during the acute phase of the infection, ca. 80%. Though, the percentage diminishes to less than 10% when patients are treated during the chronic phase of the illness. Other studies have shown that the assessment of lytic antibodies may correlate better with parasitological cure (Krettli et al 1979). However, one disadvantage of this assay is the need to be performed on trypomastigote culture, a fact that impedes the test to be straightforwardly performed in clinical diagnostic labs. That is the reason for which several recombinant antigens have been proposed and assessed by ELISA, to determine if patients which respond to therapy serorevert specific antibodies against those molecules.  3) Prognosis and evolution of the chronic disease Specific antibodies have been proposed to be used as markers of different stages of Chagas? disease.  We propose to discuss the potential usefulness of recombinant antigens to evaluate the different clinical stages by determining and/or quantifying specific antibodies.  4) Infection by congenital transmission We will talk about the diagnosis of this kind of infection, mostly considering the literature published on it. The distinctly feature of serological analysis to accurately diagnose neonate infection is the need to monitor the newborns from chagasic mothers for a 6 to 9 months period. The reason for this is that maternal antibody transference exists during pregnancy. Although this is the conventional recommended protocol when using both conventional serology and recombinant antigens from commercially available tests, we will analyze the actual possibility to shorten the neonate follow-up time when using recombinant antigens.Fil: Marcipar, Iván Sergio. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Instituto de Tecnología Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; ArgentinaFil: Lagier, Claudia Marina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Química Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Química Rosario; Argentin

Vaccines and the regulatory arm of the immune system: An overview from the Trypanosoma cruzi infection model

The knowledge that the immune system is composed of a regulatory/suppressor arm added a new point of view to better understand the nature of several pathologies including cancer, transplants, infections and autoimmune diseases. The striking discoveries concerning molecules and cells involved in this kind of regulation were followed by the elucidation of equally notable mechanisms used by several pathogens to manipulate the host immune system. Vaccines against pathogens are an invaluable tool developed to help the immune system cope with a potential infection or prevent disease pathology. Nowadays, there is accumulated evidence indicating that the powerful stimulation capacity of vaccines influences not only the effector arm of the immune system but also cells with regulatory/suppressor capacity, such as myeloid derived suppressor cells (MDSCs) and Foxp3+ regulatory T cells (Tregs). Trypanosoma cruzi (T. cruzi) is a protozoan parasite with a complex life cycle that has evolved several strategies to influence the regulatory immune response. Although diverse vaccine formulations have been able to stimulate the effector response, achieving non-sterilizing protection against T. cruzi, the influence of the vaccine candidates on the regulatory machinery has scarcely been assessed. This fact may not only reveal important information concerning how vaccines may influence cells with regulatory/suppressor capacity but also open the possibility to analyze whether vaccines are able to disrupt the mechanisms used by some pathogens to manipulate the host regulatory circuits. The aim of this review is to summarize and discuss available data related to the role of cellular components, like MDSCs and Foxp3+ Tregs, during T. cruzi infection, and the potential utility of those populations as additional targets for the rational design of vaccines.Fil: Cabrera, Gabriel Gustavo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Médicas; ArgentinaFil: Marcipar, Iván Sergio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Ciencias Médicas; Argentin

The diagnostic performance of recombinant Trypanosoma cruzi ribosomal P2β protein is influenced by its expression system

In the present work, we have determined the effect of expression vectors and their corresponding host bacteria on the antigenic performance of Trypanosoma cruzi P2b (TcP2bÞ full-length recombinant protein. The gene encoding the TcP2b ribosomal protein was cloned in pMAL-c2 and pET-32a vectors that allow the expression of high levels of soluble fusion proteins. A panel of 32 positive and 32 negative sera was assayed with the purified proteins expressed using pMal-c2 (TcP2b– MBP) and pET-32a (TcP2b–TRX) vectors and with MBP and TRX purified from pMAL-c2 and pET-32a vectors, respectively. The antigenic behavior of each TcP2b recombinant protein differed in the diagnostic performance in terms of DI(+) (93.7 for TcP2b–MBP vs 100% for TcP2b–TRX), in DI()) (90.5 for TcP2b–MBP vs 100% for TcP2b–TRX) and in cross-reaction with negative sera. To determine if the higher reactivity of expressed pMAL-c2 protein was due to folding during protein expression or to a steric effect related to the protein adsorption at the titration plate, the reactivity of sera against soluble proteins was assessed by ELISA inhibition assays. As each soluble protein preserved its level of reactivity, we concluded that differences in reactivity were due to intrinsic characteristics of the proteins and not to differences in patterns of adsorption to the plates.Fil: Marcipar, Iván Sergio. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Instituto de Tecnología Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Olivares, María Laura. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Instituto de Tecnología Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Robles, Lucia. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Instituto de Tecnología Biológica; ArgentinaFil: Dekanty, Andres. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Instituto de Tecnología Biológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Marcipar, Alberto Jaime. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Instituto de Tecnología Biológica; ArgentinaFil: Silber, Ariel Mariano. Universidade de Sao Paulo; Brasi

Determination of free and total glycerol in biodiesel by spot analysis

The importance of alternative fuel production has increased in the lately years, and so has the need of methods of analysis to evaluate their quality. Biodiesel fuel is a valuable substitute to petrodiesel fuel. Among the side and byproducts that have to be determined as an indicator of biodiesel quality are free glycerol and mono-, di-, and tri-acylglycerol. A simple, economic, friendly, and green method to quantify free and total glycerol in biodiesel has been developed.Novelty of the approach is related to the new extraction method proposed and its combination with the further steps that allow to accomplish the determination fully in the field, with the results being read without any sophisticated equipment other than a smartphone. The method is based on two extractions, i.e., the conventional aqueous extraction and another one with detergent, bothfollowed by four consecutive enzymatic reactions to produce a colored product, which can be quantified with a free downloadable smartphone application for digital image analysis. The methodology was assayed to determine free and total glycerol content in commercial biodiesel samples. The results obtained using the proposed method have been compared with those acquired by the standard, normalized gas chromatography-FID one, and turned out to be equivalent (P < 0.05). The proposed method was improved to minimize reagents consumption per test. A linear calibration curve was obtained between 8.34 10-4 - 6.93 10-3 % m/m (R2= 0.972), with 0.012 residual standard deviation. The limit of detection of the method was 8.34 10-4 % m/m, whereas the limit of quantification was 2.41 10-3 % m/m. The precision of the method was evaluated by the coefficient of variation, which ranged between 5 and 14 %. Accuracy of the method was assessedby paired-sample t tests (P < 0.05), and the elliptic joint confidence region test. The potential interferences accompanying the analyte in biodiesel matrix or those introduced by the detergent used for extraction did not interfere with the enzymes or reagents used, the recovery having ranged between 90 and 96 %. Our results support the suitability of the proposed method as an alternative tool for rapid and decentralized measurements of glycerol and total glycerol levels in biodiesel fuel with appropriate reliability and low cost.Fil: Carabajal, Maira Daniela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Química Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Química Rosario; ArgentinaFil: Glorio, Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Química Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Química Rosario; ArgentinaFil: Marcipar, Iván Sergio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Laboratorio de Tecnología Inmunológica; ArgentinaFil: Lagier, Claudia Marina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Rosario. Instituto de Química Rosario. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Química Rosario; Argentin