Antimicrobial potential of substances extracts from Garcinia brasiliensis fruit on isolates of Streptococcus spp. obtained from mastitis

A mastite bovina é uma enfermidade de grande ocorrência em rebanhos leiteiros de todo o mundo, constituindo assim, um cenário preocupante, devido aos impactos na saúde pública e também na economia dos países, principalmente o Brasil, pois é um dos maiores produtores de leite. Concomitantemente à ocorrência da mastite, é crescente o número de isolados bacterianos causadores desta doença que têm apresentado resistência antimicrobiana às mais diversas substâncias farmacológicas, principalmente, devido à utilização indiscriminada destas drogas. A investigação de novas moléculas com potencial antimicrobiano, assim como o uso de associações com as drogas tradicionais, tornou-se de grande necessidade. Este trabalho teve como objetivo, investigar a ação antimicrobiana de duas substâncias bioativas, a gutiferona-A (M11) e 7- epiclusianona (M6), sobre isolados de campo, Streptococcus uberis (Su959) e Streptococcus agalactiae (Sa4605) obtidos de leite de animais com mastite. Realizaram-se testes para definição da Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos antimicrobianos sintéticos e das substâncias bioativas, as quais variaram a de 0,6 a 125 μg/mL. Foi confirmado o potencial antimicrobiano destes últimos, além da ineficácia da ampicilina e gentamicina no controle da multiplicação de ambos os isolados. Após esta constatação, foi investigada a presença de interações sinérgicas, utilizando o método Checkerboard a partir de combinações de M11 e M6 com ampicilina e gentamicina. Dentre oito associações determinadas, seis apresentaram interação sinérgica positiva, evidenciando a recuperação e potencialização da ação dos antimicrobianos sintéticos frente aos isolados bacterianos estudados, antes resistentes à ação individual dos mesmos. Usando a metodologia do teste do MTT ((3-[-4,5- dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difenil tetrazolium brometo), avaliou-se a viabilidade celular quando da exposição individual de cada antimicrobiano (sintético e bioativo), a fim de conhecer o caráter citotóxico destas sobre as células MAC-T (células epiteliais da glândula mamaria de bovinos). O resultado obtido mostrou que somente a M11 foi citotóxica nas concentrações 2xCIM e 1xCIM determinada previamente na presença de Su959 e 2xCIM determinada previamente na presença de Sa4605. Porém, as concentrações necessárias para potenciar ação dos antimicrobianos sintéticos são doses iguais ou abaixo de 0,5xCIM, não indicadas como tóxicas no teste in vitro. Assim, pode-se afirmar que a gutiferona- A e 7-epiclusianona apresentaram eficaz ação antimicrobiana individual sobre os isolados de campo de Streptococcus uberis e Streptococcus agalactiae, além de se mostrarem promissoras candidatas para serem utilizadas em associações com os antimicrobianos sintéticos ampicilina e gentamicina, a fim de recuperar e otimizar a ação antimicrobiana dos mesmos.Bovine mastitis is a disease of high occurrence and widespread in herds around the world, making it a worrying scenario due to the impacts on public health and also on the countries’ economies, especially Brazil, due its large produce of milk. In meanwhile, the number of resistant bacterial isolates has been increased against a variety of pharmacological medicines, mostly because of drug-indiscriminate use. The investigation of new molecules with antimicrobial potential, as well as the association with traditional drugs, became a great necessity nowadays. The aim of this study was to investigate the antimicrobial action of two bioactive substances, gutiferone-A (M11) and 7-epiclusianone (M6), on wild isolates Streptococcus uberis (Su959) and Streptococcus agalactiae (Sa4605) obtained from animals infected with mastitis. Analysis were conducted to define the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of synthetic antimicrobials and bioactive molecules, ranging from 0.6 to 125 g/mL. The antimicrobial potential of the latter was confirmed, besides the inefficacy of ampicillin and gentamicin in control of the multiplication of both isolates. Later, the presence of synergistic interactions was investigated, using the Checkerboard method from combinations of M11 and M6 with ampicillin and gentamicin. Among the eight selected associations, six showed positive synergic interaction showing a recovery and powering the action of the synthetic antimicrobials against the bacterial isolates studied, previously resistant to their individual action. To assess the cell viability, we performed the method MTT (3 - [- 4,5-dimethyl-thiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide), with individual exposure of each antimicrobial (synthetic and bioactive) targeting the MAC-T cells (bovine mammary gland epithelial cells). The results showed that only M11 was cytotoxic at 2xCIM and 1xCIM concentrations previously determined by Su959 presence. However, concentrations doses equal to or lower than 0.5x MIC are need to potentiate the action of synthetic antimicrobials, not indicated as toxic in the in vitro test. Thus, the gutiferone-A and 7- epiclusianone showed an effective antimicrobial action on the wild isolates of Streptococcus uberis and Streptococcus agalactiae, in addition to being promising candidates for use in combinations with the synthetic antimicrobials ampicillin and gentamicin, in order to recover and optimize their antimicrobial action.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio

Identification and characterization of bioagents in the order Rickettsiales transmitted by ticks and fleas on wild animals received by the Screening Center of Wild Animals (CETAS) Federal University of Viçosa, Minas Gerais

Foram coletadas amostras de sangue e ectoparasitas (carrapatos e pulgas) de animais silvestres pertencentes à classe de mamíferos e aves, recebidos pelo Centro de Triagem de Animais Silvestres da Universidade Federal de Viçosa, no Estado de Minas Gerais. A coleta da amostra de sangue e ectoparasitas era destinada para pesquisa de bioagentes através de técnicas moleculares, como a Reação em Cadeia de Polimerase (PCR). Todas as amostras foram testadas quanto à presença de agentes do gênero Rickettsia e Ehrlichia. Foram coletadas um total de 100 amostras de sangue, sendo 73 de animais da classe de aves e 27 da classe de mamíferos. As amostras de ectoparasitas totalizaram 63 carrapatos provenientes de treze animais e 47 pulgas, provenientes de cinco animais. As espécies de carrapato encontradas em mamíferos silvestres foram Amblyomma cajennense, Amblyomma dubitatum, Amblyomma ovale, Amblyomma nodosum, Amblyomma aureolatum, Rhipicephalus sanguineus e Rhipicephalus (Boophilus) microplus, e a espécie de pulga encontrada foi Ctenocephalides canis. Na pesquisa de microorganismos pela PCR, foram positivas para a detecção de bactérias do gênero Rickettsia, três amostras de aves e cinco amostras de mamíferos, além de quatro amostras de carrapatos do gênero Amblyomma e duas amostras de pulgas. Na pesquisa de bactérias do gênero Ehrlichia, foram positivas uma amostra de ave e três amostras de mamíferos, não tendo sido obtidas amostras positivas de ectoparasitas para este gênero.We collected blood samples and ectoparasites samples (ticks and fleas) of wild animals belonging to the class of mammals and birds, received by the Screening Center of Wildlife, Federal University of Vicosa, in Minas Gerais. The collection of blood samples and ectoparasites was intended to search for bioagents using molecular techniques, the Polymerase Chain Reaction (PCR). All samples were testes for the presence of microorganisms of the genus Rickettsia (CS-5 and CS-6) and Ehrlichia (ECC and ECB. Were collected from a total of 100 samples of blood, 73 of the class of birds and 27 of the class of mammals. The samples totaled 63 ticks from 13 animals and 47 fleas from five animals. The tick species were found in wild mammals Amblyomma cajennense, Amblyomma dubitatum, Amblyomma nodosum, Amblyomma ovale, Amblyomma aureolatum, Rhipicephalus sanguineus e Rhipicephalus (Boophilus) microplus. The species of flea Ctenocephalides canis was found. In search of bioagents by PCR three samples of birds and five samples of mammals were positive for the detection of bacteria of the genus Rickettsia, plus four samples of ectoparasites (ticks and fleas). In the study of bacteria of the genus Ehrlichia, one sample of bird was positive and three samples of mammals, no positive samples to that detection have been obtained of ectoparasites

Occurrence of Ehrlichia canis in free-living primates of the genus Callithrix

Bacteria of the genus Ehrlichia are Gram-negative and coccoid-shaped microorganisms that cause ehrlichiosis – a serious infectious disease that often leads to death. These bacteria present a strong zoonotic potential and primates may act as reservoir hosts. This study involved a molecular analysis to detect these microorganisms in blood samples collected from nineteen primates of the genus Callithrix living free in an Atlantic Forest fragment in the municipality of Viçosa, state of Minas Gerais, Brazil. One of the 19 primates was found to be infected with Ehrlichia canis. This finding points to a new wild host of E. canis with a strong potential for transmission to humans because of its increasing contact with people. This is the first report of Ehrlichia spp. in primate of the genus Callithrix.Bactérias do gênero Ehrlichia são gram-negativas em forma de cocos. Provocam uma doença infecciosa grave denominada erliquiose que, muitas vezes, causa morte. Essas bactérias apresentam grande potencial zoonótico, e os primatas podem agir como reservatórios. Este estudo objetivou a detecção molecular desse microorganismo em amostras de sangue coletadas de dezenove primatas de vida livre num fragmento de Mata Atlântica pertencentes ao gênero Callithrix, no município de Viçosa, Minas Gerais, Brasil. Entre os 19 espécimes de sagui, um estava infectado com Ehrlichia canis. Esse achado aponta para um novo hospedeiro selvagem para E. canis com grande potencial de transmissão ao homem, devido ao seu crescente contato com pessoas. Este é o primeiro relato de primata do gênero Callithrix infectado com Ehrlichia spp

Occurrence of Ehrlichia canis in free-living primates of the genus Callithrix

Bacteria of the genus Ehrlichia are Gram-negative and coccoid-shaped microorganisms that cause ehrlichiosis – a serious infectious disease that often leads to death. These bacteria present a strong zoonotic potential and primates may act as reservoir hosts. This study involved a molecular analysis to detect these microorganisms in blood samples collected from nineteen primates of the genus Callithrix living free in an Atlantic Forest fragment in the municipality of Viçosa, state of Minas Gerais, Brazil. One of the 19 primates was found to be infected with Ehrlichia canis. This finding points to a new wild host of E. canis with a strong potential for transmission to humans because of its increasing contact with people. This is the first report of Ehrlichia spp. in primate of the genus Callithrix