On the Virulence of Escherichia coli Strain TK18-A Artificially Induced into the Air Sac of Day- Old Chicks

鶏呼吸器性マイコプラズマ病に関する基礎的検討の一環として,本病の一実験感染系確立の為に,さきに著者ら(1980)21)はM. gallisepticum (MG) 1RF株を用いて,今回と同様な実験を行った成績について報告した。今回は鶏大腸菌症の原因ならびにMG感染症の混合感染菌として重要な,E.coliの気嚢内人工感染による初生ヒナに対するvirulenceの程度を知る目的で本実験を行った。 E. coli TK18-A株(O群2)液体培養の10倍段階希釈(5.4×10^0-5/0.4ml)を,ブロイラー初生ヒナ(雄)の右後胸気嚢内に接種し,4週間観察した。各実験群20羽宛のヒナにつき,臨床症状,増体量,飼料要求率,病理変状,各臓器からのE. coli分離等の項目につき検討し,下記の成績が得られた。 1) 全群呼吸器症状はみられず,各群ヒナの死亡は主に感染後7日以内にみられ,例外的に10及び14日後1例ずつの死亡がみられた。菌接種0～10^5 CFU各群の死亡率は,それぞれ0,5,5,40,60,100,100%であった。供試菌のLD50は5.4×10^2.4 CFUであり,接種菌10CFU以下では死亡率は極めて低く,また接種菌数が減少するに従い,死亡時期がやや遅延する傾向がみられた。 2) 増体量・飼料要求率については,早期死亡例が多く,各群間の比較は困難であった。40%のヒナが生残した10^3 CFU菌接種群とそれ以下の菌接種群での成長曲線では,10^3 CFU菌接種群が最低を示した。 3) 肉眼病変出現率と接種菌数とはほぼ平行する傾向がみられ,LD50以上の菌接種群で病変陽性の傾向がみられた。気嚢病変は菌接種側で高率にみられた。10^3 CFU菌接種死亡例で顕著な病変が多数みられた。気嚢病変は,10^2-5 CFU菌接種群にみられた。 4) 以上の病変は,病理組織学的にも,全体的に滲出性の炎症病相が主体で,従来記載の大腸菌性敗血症病変とよく一致した。 5) E. coli分離率は接種菌数とほぼ平行し,10^4-5 CFU菌接種群死亡例では100%で大部分のヒナは典型的な急性敗血症死とみられた。 6) 本菌株のAID50とLD50の菌数はほぼ同一とみられた。The present experiments were performed to investigate the virulence of E. coli strain TK18－A40) (O-group 2) induced artificially into the air sac of day-old chicks. This was done with the further purpose to establish an experimental system using chicks for fundamental experiments on the efficacy in vivo of the antibacterial agents that control the avian colibacillosis and the avian respiratory mycoplasmosis complicated with E. coli. The inocula of 0.4 ml /chick of ten-fold serial dilutions of broth culture were artificially induced into the right posterior thoracic air sac of day-old male broiler chicks, and these chicks were observed during 4 weeks. The experimental groups were designed as groups of 20 chicks each, 6 groups included a non-infected control and 5 infected groups. The inoculum sizes of the organisms of the chicks ranged from 5.4×1 to 10^5 CFU* in 5 dilutions of the broth culture. The following results were obtained. 1) No clinical symptoms were observed except that some chicks died. Death of the chicks was mostly observed within 7 days post inoculation, exceptionally 2 chicks only died 10 and 14 days post inoculation. Mortalities in the group of chicks inoculated with 0－10^5 CFU were 0, 5, 5, 40, 60, 100 and 100%, respectively. The LD50 of the organisms was determined as being 5.4×10^2.4 CFU. A remarkably low mortality was observed in the chicks inoculated with organisms less than 10 CFU. A delaying tendency of the lethal period of the chicks was noticed in accordance to the decrease of the number of organisms inoculated. 2) As a large number of chicks died in the early stage of the experiments, it was difficult to determine a comparison of weight gain and feed conversion for the chicks of each group. In the groups of chicks inoculated with 10^3 or less CFU of the organisms, 40% or more survived ratios were observed. In comparison of the growth curve of these groups, the group inoculated with 10^3 CFU of the organisms showed the lowest curve. 3) An almost parallel tendency was observed between the gross lesion score and the inoculum size of the organisms. The positive tendency of the gross lesion score was investigated in the group of chicks inoculated with a number larger than LD50 of the organisms. A higher gross lesion score was observed on the inoculated side of the air sac of chicks. A large number of severe lesions was observed in chicks that had died after inoculation of 10^3 CFU of the organisms. Air sac lesions were observed in the group of chicks inoculated with 10^2-10^5 CFU of the organisms. 4) The major finding observed in the histopathological examination of chicks was generally an exudative inflammatory manifestation. These findings were similar to those of the septicemic avian colibacillosis described by many workers. 5) The recovery ratio of the organisms ran mostly parallel with the number of the inoculated organisms. One hundred percent ratios were observed in 2 groups of chicks inoculated with 10^4－10^5 CFU of the organisms. It was considered that most cases of the dead chicks were due to coli-septicemia. 6) The AID50 of the organisms in the present experimental conditions was estimated as almost the same number (CFU) of the organisms as that of the LD50.本研究の一部は，第87 回日本獣医学会(1979年4月)で口頭発表したものである

On the Virulence of Mycoplasma gallisepticum Strain 1RF Artificially Induced into the Air Sac of Day-Old Chicks

in vivoでの抗菌剤効果の基礎的検討の為に,初生ヒナを用いた一実験感染系を確立する目的で,以下の実験を試みた。 供試菌Mycoplasma gallisepticum (MG)1RF株の新鮮液体培養10倍段階希釈の0.4ml/ヒナを,ブロイラー初生ヒナ,雄の右後胸部気嚢内に接種し,4週間観察し,接種菌のvirulenceの程度を調べた。実験群は20羽/群とし,非感染対照を含む6群を設定した。接種菌数は4×10^1-5 CCUの5段階とした。各実験群のヒナについては,臨床症状を観察し,増体量,飼料要求率を調べて,毎週各群5羽ずつを殺して剖検し,MG分離,MG血清凝集素価の推移,肉眼ならびに組織病変等について経時的観察を試みた結果,下記の成績が得られた。 1) 全期間,全実験群において呼吸器症状はみられなかった。しかし,接種菌数の多い群で頸部捻転と脚麻痺を主徴とする死亡ヒナがみられ,これらのヒナの脳病変は病理組織学的検査の結果,脳軟化のそれに一致した。それらヒナの一部の脳からはMGが分離された。 2) 接種菌数の多い群では.ヒナの増体量は少なく飼料要求率は悪かった。 3) 接種菌数の少ない群での死亡率は極めて低く,接種菌数の多い群で14日令まで高く,その後28日令までは死亡ヒナはみられなかった。 4) 気嚢および気管の病変出現率は,MG接種菌数の多い群で高く,また病変の程度も強いものが多かった。なお低率ながら各群のヒナに肝の点状出血や,線維素性肝包膜炎,壊死巣などが,MG接種菌数の多少にかかわらず認められた。 5) MG分離率は,気嚢よりも気管において高く,またMG非接種側気嚢よりもMG接種側気嚢において高かった。 6) MG血清凝集素価は,1週令殺時のヒナ群では低く,2週令時以後の殺ヒナ群で上昇がみられた。MG接種群間では接種菌数の多少にかかわらず凝集素価に大きな差は認められなかった。 7) 供試菌株のAID50は10CCU前後とみられた。 結論として,供試1RF株はM. gallisepticumとしては,ヒナに対し比較的強毒な菌株である事が知られた。In order to establish an experimental system using chicks for the fundamental observation on efficacy in vivo of the antibacterial agents that control the avian respiratory mycoplasmosis, the present experiments were conducted to investigate the virulence of Mycoplasma gallisepticum strain 1RF26) induced artificially into the air sac of day-old chicks. The inocula of 0.4 ml/chick of ten-fold serial dilutions of broth culture of the organisms were artificially induced into the right posterior thoracic air sac of day-old male broiler chicks, and the chicks were observed during 4 weeks. The experimental groups were designed as group of 20 chicks each, 6 groups included a non-infected control and 5 infected groups. The inoculum sizes of the organisms to the chicks ranged from 4×10 to 10^5 CCU* in 5 dilutions of the broth culture. The following results were obtained. 1) Clinical symptoms were observed only death with characteristic findings of limberneck and leg weakness in the chicks inoculated with a large number of the organisms. According to the results of the histopathological examinations, the cerebral lesions appearing in these chicks were similar to those of the encephalomalacia. The inoculated organisms were recovered from the brain of some of those chicks. 2) Low weight gains and high feed conversions were observed in the group of chicks inoculated with a large number of the organisms. 3) The mortality rate was very low in the group of chicks inoculated with a small number of the organisms. In the group of chicks inoculated with a large number of the organisms, the mortality of chicks was comparatively high up to 14 days post inoculation, but no mortality was observed during the 15 to 28 days post inoculation. 4) Incidence and severity of macroscopic lesions in the air sac and the trachea of the chicks inoculated with a large number of the organisms were comparatively high and severe. Under low incidence of the macroscopic lesions including petechiae, fibrinous perihepatitis and necrotic foci etc. in the liver of chicks were observed to be not depending on the inoculum size of the organisms. 5) Recovery ratio of the organisms from the chicks was found to be higher in the trachea than that in the air sac, and furthermore was higher on the inoculated side than on the other side of air sac. 6) Serum agglutinins against M. gallisepticum were observed to be at a low titer in the chicks killed 1 week post inoculation, and increased titers were observed in the chicks killed after 2 weeks post inoculation. No remarkable difference of the serum agglutinin titers depending on inoculum size of the organisms was observed in the chicks. 7) The AID50 of the organisms was estimated as ca. 10 CCU. Consequently, it was proved that the strain 1RF examined is comparatively high virulent against chicks, among the strains of M. gallisepticum.本論文の要旨は，第85 回日本獣医学会(1978 年4月)で口頭発表した

Effect of Cryotherapy after Spine Surgery

Study DesignHistorical controlled trial.PurposeTo clarify the usefulness of cryotherapy after spine surgery.Overview of LiteratureCryotherapy has generally been performed subsequent to surgery on joints and in this application its clinical effects are well understood. However, cryotherapy has yet to be used following spine surgery. Its clinical efficacy in this context is unknown.MethodsThirty six patients had undergone one level microendoscopic surgery. Sixteen were enrolled into the cooling group, with the remaining 20 making up the no postoperative cryotherapy control group. Cryotherapy was performed at 5℃ using an icing system. A silicone balloon catheter with a thermo sensor on the tip was placed in the surgical wound. The temperature in the wound was recorded every 30 minutes until the next morning. The relationship between the depth of the sensor and the temperature in the wound were investigated using simple linear regression analysis. Laboratory data, visual analogue scale (VAS) for wound pain and postoperative bleeding were investigated.ResultsThe mean temperature in the surgical wound was 37.0 in the control group and 35.0℃ in the cooling group (p<0.001). There was a positive correlation between the depth of the thermo sensor and the temperature in the wound in the cooling group (y=0.91x+30.2, r=0.67, p=0.004). There were no significant differences between the groups in terms of laboratory data, VAS or postoperative bleeding.ConclusionsThe temperature in the wound was decreased significantly by spinal surgery cryotherapy

Oral Rehydration Solutionに関する歴史的・文献的考察と今後の問題点

Oral rehydration therapy(以下、ORT)は、成人コレラ患者の治療法として普及後、乳児下痢症による脱水症の治療法としての効果も認められ、特にWHOやUNICEFの指導と推進により発展途上国で多くの乳児を救命している。また、ORTは脱水症の予防としても有効である。このORTに用いる溶液であるoral rehydration solution(以下、ORS)は、水、糖、電解質の混合液であり、腸粘膜における糖とナトリウム(以下、Na)吸収のメカニズムが理論的に立証されている。ここでは、ORSが発展してきた背景を歴史的および文献的に考察し、今後の問題点や将来の展望を述べることとする

Evaluation of the Pichia pastoris expression system for the production of GPCRs for structural analysis

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Various protein expression systems, such as <it>Escherichia coli </it>(<it>E. coli</it>), <it>Saccharomyces cerevisiae </it>(<it>S. cerevisiae</it>), <it>Pichia pastoris </it>(<it>P. pastoris</it>), insect cells and mammalian cell lines, have been developed for the synthesis of G protein-coupled receptors (GPCRs) for structural studies. Recently, the crystal structures of four recombinant human GPCRs, namely β₂adrenergic receptor, adenosine A_2areceptor, CXCR4 and dopamine D3 receptor, were successfully determined using an insect cell expression system. GPCRs expressed in insect cells are believed to undergo mammalian-like posttranscriptional modifications and have similar functional properties than in mammals. Crystal structures of GPCRs have not yet been solved using yeast expression systems. In the present study, <it>P. pastoris </it>and insect cell expression systems for the human muscarinic acetylcholine receptor M2 subtype (CHRM2) were developed and the quantity and quality of CHRM2 synthesized by both expression systems were compared for the application in structural studies.</p> <p>Results</p> <p>The ideal conditions for the expression of CHRM2 in <it>P. pastoris </it>were 60 hr at 20°C in a buffer of pH 7.0. The specific activity of the expressed CHRM2 was 28.9 pmol/mg of membrane protein as determined by binding assays using [³H]-quinuclidinyl benzilate (QNB). Although the specific activity of the protein produced by <it>P. pastoris </it>was lower than that of Sf9 insect cells, CHRM2 yield in <it>P. pastoris </it>was 2-fold higher than in Sf9 insect cells because <it>P. pastoris </it>was cultured at high cell density. The dissociation constant (Kd) for QNB in <it>P. pastoris </it>was 101.14 ± 15.07 pM, which was similar to that in Sf9 insect cells (86.23 ± 8.57 pM). There were no differences in the binding affinity of CHRM2 for QNB between <it>P. pastoris </it>and Sf9 insect cells.</p> <p>Conclusion</p> <p>Compared to insect cells, <it>P. pastoris </it>is easier to handle, can be grown at lower cost, and can be expressed quicker at a large scale. Yeast, <it>P. pastoris</it>, and insect cells are all effective expression systems for GPCRs. The results of the present study strongly suggested that protein expression in <it>P. pastoris </it>can be applied to the structural and biochemical studies of GPCRs.</p

学童期肥満児に対する支援対策について : 運動支援対策を中心に

近年、わが国の生活環境の変化に伴い、国民の身体活動が低下傾向にある。国の健康づくり運動「健康日本21」も具体的な目標値をあげて取り組まれている。また、子どもに対する健康づくり運動として厚生労働省は、次世代育成支援対策推進法を策定した。この法律の策定により国全体で子どもが健やかに育つように支援対策に取り組む必要がある。本報は、子どもの運動支援対策に着目し、子育て支援対策に取り組む東京都国立総合児童センターの学童期肥満児を対象とした「肥満教室」の遊びを取り入れた運動プログラムや夏合宿について紹介した。遊びを取り入れた運動や体験したことのないスポーツに取り組むことは、子どもたちの運動意欲をあげ、達成感をもたらす有効的なプログラムであると考えられた

郡山市にある中核病院での小児健康フォーラムを介した食育の実施

本年6月、食育基本法が成立し、食育の重要性が認識されてきている。食育とは、知育・徳育・体育と並ぶ教育の柱である。また、人々の生活習慣の中で特に食生活が注目されており、近年の健康ブームとともに管理栄養士の業務も幅が広がってきている。そこで病院においても、小児科を中心に食育の実施が期待される。これまで小児科医が中心で行なってきた小児健康フォーラムにおいて、今回は管理栄養士が中心となった食育を実施した。その結果、幼少期から適正な食生活を確立することの必要性を食育を通して参加者に理解させることができた。さらに子どもだけでなく保護者の食生活に対する関心の高さが感じられ、病院における小児健康フォーラムを介した食育の実施は効果的であった

ジュニア期スポーツにおけるサプリメント摂取の現状とその影響

近年、多種類のサプリメントが簡単に入手できる時代となり、子どもたちも自由に気軽に購入できる状況におかれている。また、スポーツ界ではアンチ・ドーピング活動が盛んとなっているが、サプリメント摂取はアスリートにとってドーピング的意味合いを持つことを忘れてはならない。そこで、我々は、まず子どものサプリメントの摂取状況を文献的に考察し、次いで全国の日本スポーツ少年団に登録する子どもを対象としたサプリメント等に関するアンケート調査を実施した結果を踏まえて、子どもたちのサプリメント摂取やドーピングに関する今後の課題を検討した。その結果、サプリメント摂取はスポーツに対する効果だけでなく、ドーピング問題も含めた教育をジュニア期から行い、専門家による早急な対応の必要性が明らかとなった

るいそうに関する実態調査と今後の対策 : プロジェクトチームの結成(予報)

平成10年ごろから国民栄養調査において20歳代女性のやせ傾向が問題になっている。そこで、やせ体型の学生が自分自身が持つ健康上の問題点を理解し、現在および将来の健康な女性を目指して和洋女子大学を卒業するまでに正常体格になるように支援するためのプロジェクトチームが平成17年に結成されたので紹介する。まず、このプロジェクトを遂行するにあたって予備的な問題点を検討するために、予備研究を行った。その結果、やせ体型を示す若年女性に、月経異常、骨密度の低下が認められた。一般に、やせ体型は生活習慣病ハイリスクの低体重児を産む傾向、平均余命の低下などの問題点を抱えている。これらの問題を検討するには体組成の違いを考慮する必要があると考えられる。今後、やせ体型改善対策プロジェクトを通して、食事や運動などの指導による本格的な介入を続け、対象者が健康的なライフスタイルを身につけることによりQOLを高めると同時に、先に述べた各種の健康障害や将来の低体重児の出産率を低下させることが期待される。また、この研究成果は学生に対する健康教育と健康管理に活用できると考える