Characterization of metabolites in urine samples from individuals with a lethal co-administration of cocaine and ethanol

In this paper, cocaine and eleven of its metabolites have been detected and identified in urine samples. The technique was based in a simple liquid-liquid extraction with detection by gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS). The method was validated in terms of repeatability, specificity, recovered, linearity, limit of detection, contamination between samples and robustness, all validation parameters met the acceptance criteria established in the study. The percentages of recovered for cocaine and benzoylecgonine were 120 and 110% respectively. The method’s repeatability (CV %) remained below 15% in all assays. The technique was shown to be linear over the range studied (r2 = 0.999) and sensitive, with detection limits below 60 ng/mL for both analytes. In the analysis of two real samples 11 metabolites of cocaine were detected, benzoylecgonine and cocaetilene were the majorities. Furthermore, were detected and characterized metabolites which only are observed in the urine in overdose cases such as hydroxylated and metoxyhydroxylated metabolites of cocaine, benzoylecgonine and cocaethilene. The technique allowed detecting the cinnamoilbenzoilecgonina which is a metabolite of cinnamoilcocaína. The cinnamoilcocaína is one of the alkaloids in coca plants so the presence of this metabolite showed us natural cocaine consumption and not synthetic

Diferenciación de esteroides endógenos y exógenos mediante Cromatografía de Gases-Combustión-Espectrometría de Masas de Relaciones Isotópicas

Los perfiles esteroidales urinarios son usados para controlar el abuso de esteroides endógenos tales como la testosterona y la dihidrotestosterona. La relación testosterona/epitestosterona, calculada mediante el empleo de la Cromatografía de Gases-Espectrometría de Masas, se utiliza para controlar la administración de testosterona, si dicha relación es mayor que 4, se sospecha el consumo de testosterona o sus precursores. Investigaciones recientes han demostrado la efectividad de la Espectrometría de Masas de Relaciones Isotópicas de carbono para detectar y confirmar la administración de esteroides endógenos. La relación de los dos isótopos estables de carbono 13C y 12C permite la diferenciación entre esteroides naturales y sintéticos debido a que los esteroides sintéticos tienen una menor abundancia de 13C. De hecho, las relaciones isotópicas de carbono pueden usarse para determinar la administración de esteroides endógenos incluso cuando la relación testosterona/ epitestosterona se encuentra en el intervalo de valores normales. En el presente trabajo se discuten los aspectos más importantes relacionados con la diferenciación de esteroides endógenos y exógenos por medio de la Cromatografía de Gases-Combustión-Espectrometría de Masas de Relaciones Isotópicas. Además, este artículo proporciona una revisión acerca de los procedimientos de preparación y purificación de las muestras previo al análisis, así como los efectos de la dieta sobre la relación isotópica de carbono de los esteroides endógeno

Development and validation of an analytical method for the simultaneous determination of benzoylecgonine and ecgonine methyl ester in human urine by gas chromatography/mass spectrometry

A simple and rapid procedure has been developed and validated for the simultaneous determination of benzoylecgonine and ecgonine methyl ester in human urine samples. After extraction and sample cleanup by solid-phase extraction (SPE), the extracts were derivatized with 50 uL of MTBSTFA and analyzed by gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS). The limit of detection (LOD) was 50 ng/mL for both metabolites. The recoveries were 81% and 75.3% for benzoylecgonine and ecgonine methyl ester, respectively. The intra-assay precision (% relative standard deviation) at two different added amounts (200 and 1000 ng/mL) in urine matrix varied from 4.8 to 8.4 and from 4.4 to 5.7, respectively. The mass spectra obtained for each compound have many diagnostics ions with relative abundance in accordance with the WADA requirements.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

Development and validation of an analytical method for the simultaneous determination of benzoylecgonine and ecgonine methyl ester in human urine by gas chromatography/mass spectrometry

A simple and rapid procedure has been developed and validated for the simultaneous determination of benzoylecgonine and ecgonine methyl ester in human urine samples. After extraction and sample cleanup by solid-phase extraction (SPE), the extracts were derivatized with 50 uL of MTBSTFA and analyzed by gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS). The limit of detection (LOD) was 50 ng/mL for both metabolites. The recoveries were 81% and 75.3% for benzoylecgonine and ecgonine methyl ester, respectively. The intra-assay precision (% relative standard deviation) at two different added amounts (200 and 1000 ng/mL) in urine matrix varied from 4.8 to 8.4 and from 4.4 to 5.7, respectively. The mass spectra obtained for each compound have many diagnostics ions with relative abundance in accordance with the WADA requirements.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

Identificación y caracterización de los productos de degradación de las benzotiadiazinas en orina humana. Importancia para el control antidoping

Los diuréticos de tipo tiazidas (benzotiadiazinas) son ampliamente usados con fines terapéuticos. Al igual que otros diuréticos pueden ser utilizados ilegalmente en el deporte con el objetivo de evitar resultados positivos en el control antidoping por dilución de la orina o para reducir el peso de los atletas que compiten por categorías de peso. Las benzotiadiazinas son un grupo de diuréticos que tienen una estructura 1,2,4-benzotiadiazina-7-sulfonamida-1,1-dióxido con una sustitución de cloro o trifluorometil en la posición 6 y otros sustituyentes diferentes en la posición 3. Estos compuestos son muy inestables en orina por experimentar procesos de hidrólisis no metabólica y la relación compuesto/ producto de hidrólisis está gobernada por las condiciones de almacenamiento de las muestras de orina. En el presente trabajo se llevó a cabo un estudio de estabilidad de benzotiadiazinas en orina humana, las cuales fueron sometidas a diferentes condiciones de temperatura y tiempo con el objetivo de lograr la identificación de sus productos de degradación. Las muestras fueron sometidas a una extracción líquido-líquido con acetato de etilo en condiciones alcalinas y los análisis fueron realizados por Cromatografía de Gases acoplada a Espectrometría de Masas. La identificación de los productos de degradación (2,4-disulfonamida-5’-cloroanilina y 2,4-disulfonamida-5’-trifluorometilanilina) permitió dar respuesta a las exigencias de la Agencia Mundial Antidopaje de pesquisar estos compuestos en los análisis de rutina. Además, posibilitó dar resultados analíticos adversos aún cuando no se observen a los diuréticos que le dieron origen en la orina o estén a muy bajas concentraciones debido a su degradación

Validación de un método para la determinación de 19-norandrosterona en orina humana por Cromatografía de Gases acoplada a Espectrometría de Masas de Trampa de Iones

El consumo de nandrolona rinde en el humano tres metabolitos fundamentalmente, 19-norandrosterona (19-NA), 19-noretiocolanolona (19-NE) y 19- norepiandrosterona. Estudios recientes han demostrado la producción endógena de 19-NA a niveles de concentración muy cercana al límite de corte establecido por el Comité Olímpico Internacional, es decir de 2 ng/mL para los hombres y de 5 ng/mL para las mujeres. El metabolito marcador del consumo de ese esteroide es la 19-NA. El presente trabajo trata de la validación cualitativa de un método analítico para su determinación con metiltestosterona como patrón interno que emplea un paso de extracción en fase sólida con columnas DetectabuseÔ, seguida de una hidrólisis enzimática con b-glucuronidasa de E. coli, extracción líquido- líquido, derivatización con N-metil-N-trimetilsililtrifluoroacetamida (MSTFA) para obtener el bis-trimetilsilil derivado de la 19-NA (19-NA bis-O-TMS) y análisis mediante Cromatografía de Gases acoplada a Espectrometría de Masas en tándem (CG-EM-EM) utilizando un espectrómetro de masas de trampa de iones. Se utilizó una columna capilar Ultra HP-1 (20 m X 0,20 mm X 0,11 µm), con un programa de temperatura que va desde 181 °C (por 1 min), hasta 210 °C (10 °C/min), entonces hasta 310 °C (20 °C/min), manteniéndose en esa temperatura durante 2 min . El modo de adquisición fue EM-EM con ionización por impacto electrónico seguido de disociación mediante colisión inducida con helio

Gas chromatography/mass spectrometry characterization of the apolar extract from Clusia minor L. leaves

El estudio de la composición química de la fracción apolar de las hojas de la especie Clusia minor L. con el empleo de la Cromatografía de Gases/Espectrometría de Masas, permitió el aislamiento e identificación de 25 compuestos, en su mayoría, terpenoides y esteroides, volátiles y otros. Un gran número de estos constituyen nuevos reportes para la especie. El sitosterol y el estigmasterol, el lupeol y la α-amirina fueron, respectivamente, los esteroides y triterpenos más abundantes. Como componente mayoritario de esta fracción apolar se encontró la vitamina E.Sterols, triterpenes, volatiles and other constituents in leaves of Clusia minor L. were analyzed by gas chromatography-mass spectrometry. Twenty five compounds were identified most of them new for the species. Sitosterol and stigmasterol were the solely abundant sterols identified and lupeol and α amyrine the most abundant triterpenoids. The major constituent in this fraction was vitamin E.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

Qualitative analysis of Cuban propolis by thin layer chromatography

Se propone una técnica analítica de Cromatografía en Capa Delgada (CCD), utilizando placas de Sílica gel GF254, como fase móvil la mezcla hexano:acetato de etilo (7:3) y como reveladores Ce(SO4)2/H2 SO4 y vainillina/H2 SO4. Esta técnica resultó válida, permitiendo la identificación y diferenciación de los tres tipos de propóleos cubanos hasta el momento identificados. Se estudiaron 60 muestras que fueron agrupadas en propóleos pardos, rojos y amarillos, según estudios cromatográficos y espectroscópicos previos. Las condiciones cromatográficas utilizadas así como el uso de compuestos aislados, posibilitó la observación de manchas características correspondientes con los marcadores químicos de cada uno de los tipos de propóleos estudiadosAnalytical Thin Layer Chromatography (TLC) using Silica gel plates of GF254, hexane: ethyl acetate (7:3) as solvent system and, Ce(SO4)2/H2 SO4 and vanillin / H2 SO4 as general developer, was carried out. The developed chromatographic procedure was validated, allowing the identification and differentiation of the three types of Cuban propolis. We analyzed 60 propolis samples from different regions of Cuba, classified in type I, II and III, according to previous chromatographic and spectroscopic studies. Chromatographic conditions used for each group as well as the use of isolated compounds from the propóleos type I and II as patterns, facilitated the observation of characteristic stains corresponding with the chemical markers of each one of the propolis types.Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aire

GC-MS determination of isoflavonoids in seven red Cuban propolis samples.

In the present study, the phenolic composition analysis of seven red varieties of propolis, collected in different regions of Cuba, was evaluated by gas chromatography/mass spectrometry (GC-MS). Seventeen compounds were identified in all samples by the interpretation of their mass spectra. This appears to be the first report on the GC-MS analysis of isoflavonoids in the propolis. The results confirmed the presence of the main isoflavonoids isolated previously and suggested the general structure for the other five isoflavonoids. Vestitol, 7-O-methylvestitol, and medicarpin were present in high amounts in all propolis samples analyzed. This result indicates that propolis samples rich in isoflavonoids are not exclusively found in Pinar del Río province and proves that GC-MS technique is a useful and alternative tool for the chemical analysis of tropical red propoli