Somatic hybridization between Citrus sinensis (L.) Osbeck and C. grandis (L.) Osbeck Hibridação somática entre Citrus sinensis (L.) Osbeck e C. grandis (L.) Osbeck

This work had as objective to produce citrus somatic hybrids between sweet oranges and pummelos. After chemical fusion of sweet orange embryogenic protoplasts with pummelo mesophyll-derived protoplasts, plants were regenerated by somatic embryogenesis and acclimatized in a greenhouse. The hybrids of 'Hamlin' sweet orange + 'Indian Red' pummelo and 'Hamlin' sweet orange + 'Singapura' pummelo were confirmed by leaf morphology, chromosome counting and molecular analysis. These hybrids have potential to be used directly as rootstocks aiming blight, citrus tristeza virus, and Phytophthora-induced disease tolerance, as well as for rootstocks improvement programs.<br>O objetivo deste trabalho foi produzir híbridos somáticos entre laranjas doces e toranjas. Após fusão de protoplastos embriogênicos de laranja doce com protoplastos derivados de mesófilo foliar de toranjas, plantas foram regeneradas por embriogênese somática e aclimatizadas em casa de vegetação. Os híbridos laranja 'Hamlin' + toranja 'Indian Red' e laranja 'Hamlin' + toranja 'Singapura' foram confirmados pela morfologia foliar, contagem do número de cromossomos e análise molecular. Esses híbridos apresentam potencial para serem testados como porta-enxertos tolerantes a declínio, tristeza e doenças causadas por Phytophthora, bem como em programas de melhoramento de porta-enxertos

Caipira sweet orange + Rangpur lime: a somatic hybrid with potential for use as rootstock in the Brazilian citrus industry

Protoplast culture following polyethylene glycol-induced fusion resulted in the regeneration of somatic hybrid plants between Caipira sweet orange (Citrus sinensis L. Osbeck) and Rangpur lime (C. limonia L. Osbeck). The plants were confirmed as somatic hybrids by leaf morphology, chromosome number and RAPD profile. All regenerated plants were tetraploid (2n = 4x = 36), with intermediate leaf morphology and complementary RAPD banding profile of both parents. This combination may be useful as a rootstock for the citrus industry in Southeastern Brazil since this somatic hybrid could combine the drought tolerance and vigor of Rangpur lime with the blight tolerance of Caipira sweet orange.<br>Híbridos somáticos de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck) e limão Cravo (C. limonia L. Osbeck) foram regenerados após a fusão (polietileno glicol) e cultura de protoplastos. Os híbridos somáticos foram confirmados pela análise da morfologia das folhas, determinação do número de cromossomos e marcadores moleculares (RAPD). Todas as plantas analisadas revelaram-se tetraplóides (2n = 4x = 36), possuíam folhas de morfologia intermediária e uma combinação do padrão de bandas de RAPD de ambos os parentais. Esta combinação pode se tornar útil como porta-enxerto para a Região Sudeste da indústria citrícola brasileira. Este híbrido somático potencialmente combinará as características de tolerância à seca e o vigor do limão Cravo com a tolerância ao declínio da laranja Caipira

Agrobacterium-mediated transformation of Citrus sinensis and Citrus limonia epicotyl segments Transformação genética em Citrus sinensis e Citrus limonia mediada por Agrobacterium tumefaciens a partir de segmentos de epicótilo

Genetic transformation allows the release of improved cultivars with desirable characteristics in a shorter period of time and therefore may be useful in citrus breeding programs. The objective of this research was to establish a protocol for genetic transformation of Valencia and Natal sweet oranges (Citrus sinensis L. Osbeck) and Rangpur lime (Citrus limonia L. Osbeck). Epicotyl segments of germinated in vitro plantlets (three weeks in darkness and two weeks in a 16-h photoperiod) were used as explants. These were co-cultivated with Agrobacterium tumefaciens strain EHA-105 and different experiments were done to evaluate the transformation efficiency: explants were co-cultivated with Agrobacterium for one, three or five days; explants were incubated with Agrobacterium suspension for 5, 10, 20 or 40 minutes; co-cultivation medium was supplemented with acetosyringone at 0, 100 or 200 &micro;mol L-1; Explants ends had a longitudinal terminal incision (2-3 mm); co-cultivation temperatures of 19, 23 or 27&deg;C were imposed. The experimental design was completely randomized in all experiments with five replications, each consisted of a Petri dish (100 x 15 mm) with 30 explants and resulted in a total of 150 explants per treatment. Longitudinal terminal incision in the explant ends did not improve shoot regeneration. However, transgenic plants of all three cultivars were confirmed from explants that had been subjected to inoculation time of 20 minutes, co-culture of three days at 23-27&deg;C, in the absence of acetosyringone.<br>A transformação genética permite produzir cultivares com características específicas e pode, dessa forma ser associada a programas de melhoramento de citros. O objetivo deste trabalho foi estabelecer protocolos de transformação genética para as laranjas doce 'Valência' e 'Natal' (Citrus sinensis L. Osbeck), bem como para o limão 'Cravo'(Citrus limonia L. Osbeck). Segmentos de epicótilo de plântulas germinadas in vitro (três semanas no escuro e duas semanas sob fotoperíodo de 16h) foram utilizados como explantes. Estes foram co-cultivados com Agrobacterium tumefaciens (EHA-105), realizando-se vários experimentos para avaliar a eficiência do processo de transformação genética: explantes co-cultivados por um, três e cinco dias; tempo de inoculação com a bactéria de 5, 10, 20 e 40 minutos; co-cultivo em meio de cultura contendo 0, 100 e 200 mimol L-1 de acetoseringona; Incisão longitudinal (2-3 mm) nas extremidades do explante; temperatura de co-cultivo 19, 23 e 27&deg;C. Todos os experimentos consistiram de cinco repetições por tratamento, sendo cada repetição representada por uma placa de Petri contendo 30 explantes, perfazendo um total de 150 explantes por tratamento. Plântulas transgênicas dos três cultivares foram obtidas utilizando-se tempo de inoculação de 20 minutos, co-cultivo com Agrobacterium tumefaciens (EHA-105) por três dias, na ausência de acetoseringona no meio de cultura de co-cultivo e temperatura de co-cultivo de 23-27&deg;C. A incisão longitudinal na extremidade do explante favoreceu à organogênese in vitro, mas quando co-cultivado com Agrobacterium não houve regeneração de brotações

Calogênese, embriogênese somática e isolamento de protoplastos em variedades de laranja doce Callus induction, somatic embryogenesis and protoplast isolation from sweet orange varieties

Com o objetivo de produzir calos embriogênicos de citros, óvulos abortados de frutos maduros de 6 variedades de laranja doce (Citrus sinensis L. Osbeck), ‘Bahia Cabula’, ‘Baianinha’, ‘Hamlin’, ‘Orvalho de Mel’, ‘Rubi’ e ‘Valência’ foram introduzidos em meio de cultivo MT modificado com adição de extrato de malte, com e sem adição de 5 mg L-1 benziladenina (BA). Os calos obtidos das variedades ‘Bahia Cabula’, ‘Orvalho de Mel’, ‘Rubi’ e ‘Valência’ foram cultivados em meio basal MT, contendo os carboidratos maltose, galactose, lactose, glicose ou sacarose nas concentrações de 18; 37; 75; 110 e 150 mM para a indução da embriogênese somática. Os calos destas mesmas variedades foram submetidos ao isolamento de protoplastos, com o uso de 3 soluções enzimáticas. Os resultados revelaram que há influência do genótipo sobre a calogênese. A embriogênese somática foi estimulada na presença de galactose, para a maioria das variedades. A solução enzimática composta de 1% de celulase, 1% de macerase e 0,2% de pectoliase foi a mais adequada para o isolamento de protoplastos a partir de calos das variedades de laranja doce estudadas.<br>Intending to produce embryogenic citrus calli (Citrus sinensis L. Osbeck), aborted ovules of ripe fruits from six sweet orange varieties (‘Bahia Cabula’, ‘Baianinha’, ‘Hamlin’, ‘Orvalho de Mel’, ‘Rubi’ and ‘Valencia’) were introduced onto modified MT medium with and without benzyladenine (BA). Calli obtained from ‘Bahia Cabula’, ‘Orvalho de Mel’, ‘Rubi’ and ‘Valencia’ varieties were grown on MT basal medium modified with the carbohydrates maltose, galactose, lactose, glucose and sucrose at 18; 37; 75; 110 and 150 mM. The effect on somatic embryogenesis was studied. Calli from the same genotypes were submitted to protoplast isolation, using three different enzymatic solutions. Results revealed the genotype effect in the callus induction. Somatic embryogenesis was stimulated in the presence of galactose, for most varieties. Enzymatic solution composed of 1% cellulase, 1% macerase and 0,2% pectolyase was the best for protoplast isolation from calli of all genotypes tested