Melatonina no meio de maturação não melhorou as taxas de maturação dos ovócitos, de desenvolvimento embrionário e a fragmentação do DNA dos embriões bovinos

Melatonin (MEL) acts as a powerful scavenger of free radicals and direct gonadal responses to melatonin have been reported in the literature. Few studies, however, have evaluated the effect of MEL during in vitro maturation (IVM) on bovine embryos. This study tested the addition of MEL to maturation medium (MM) with no gonadotropins on nuclear maturation and embryo development rates and the incidence of DNA damage in resulting embryos. Cumulus-oocyte complexes were aspirated from abattoir ovaries and cultured in MM (TCM-199 medium supplemented with 10% fetal calf serum - FCS) at 39ºC and 5% CO2 in air. After 24 hours of culture in MM with 0.5 µg mL-1 FSH and 5.0 µg mL-1 LH; 10-9 M MEL) or 10-9 M MEL, 0.5 µg mL-1 FSH and 5.0 µg mL-1 LH, the oocytes were stained with Hoechst 33342 to evaluate nuclear maturation rate. After in vitro fertilization and embryo culture, development rates were evaluated and the blastocysts were assessed for DNA damage by Comet assay. There was no effect of melatonin added to the MM, alone or in combination with gonadotropins, on nuclear maturation, cleavage and blastocyst rates. These rates ranged between 88% to 90%, 85% to 88% and 42% to 46%, respectively. The extent of DNA damage in embryos was also not affected by MEL supplementation during IVM. The addition of 10-9 M MEL to the MM failed to improve nuclear maturation and embryo development rates and the incidence of DNA damage in resulting embryos, but was able to properly substitute for gonadotropins during IVM.Melatonin (MEL) atua como um potente redutor de radicais livres. Efeito direto da MEL na função gonadal também foi observado. Existem poucos estudos relacionados ao efeito da MEL durante a maturação no desenvolvimento embrionário in vitro. Avaliou-se a adição de MEL no meio de maturação (sem gonadotrofinas) nas taxas de maturação nuclear e de desenvolvimento embrionário e na incidência de fragmentação do DNA nos embriões produzidos in vitro. Complexos cumulus-ovócitos foram aspirados de ovários provenientes de matadouros e cultivados em meio de maturação (Meio TCM-199 suplementado com 10% de soro fetal bovino) a 39ºC e 5% CO2 em ar. Após 24 horas de cultivo em meio de maturação com 0,5 µg mL-1 de FSH e 5,0 µg mL-1 de LH; 10-9 M de MEL ou 10-9 M de MEL, 0,5 µg mL-1 de FSH e 5,0 µg mL-1 de LH, os ovócitos foram corados com Hoechst 33342 para avaliação da taxa de maturação nuclear. A fragmentação do DNA dos blastocistos foi avaliada pela técnica do Cometa. Não houve efeito da MEL adicionada ao meio de maturação, com ou sem gonadotrofinas, nas taxas de maturação nuclear, clivagem e blastocistos. Os percentuais variaram entre 88% a 90%, 85% a 88% e 42% a 46%, respectivamente. O grau de fragmentação do DNA também não foi afetado pela adição de MEL ao meio de maturação. A adição de 10-9 M de MEL ao meio de maturação não exerce influência nas taxas de maturação nuclear e de desenvolvimento embrionário e nem da incidência de fragmentação do DNA dos embriões produzidos in vitro, mas pode substituir as gonadotropinas durante a maturação in vitro.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

Melatonin in maturation media fails to improve oocyte maturation, embryo development rates and DNA damage of bovine embryos

Melatonin (MEL) acts as a powerful scavenger of free radicals and direct gonadal responses to melatonin have been reported in the literature. Few studies, however, have evaluated the effect of MEL during in vitro maturation (IVM) on bovine embryos. This study tested the addition of MEL to maturation medium (MM) with no gonadotropins on nuclear maturation and embryo development rates and the incidence of DNA damage in resulting embryos. Cumulus-oocyte complexes were aspirated from abattoir ovaries and cultured in MM (TCM-199 medium supplemented with 10% fetal calf serum - FCS) at 39ºC and 5% CO2 in air. After 24 hours of culture in MM with 0.5 µg mL-1 FSH and 5.0 µg mL-1 LH; 10-9 M MEL) or 10-9 M MEL, 0.5 µg mL-1 FSH and 5.0 µg mL-1 LH, the oocytes were stained with Hoechst 33342 to evaluate nuclear maturation rate. After in vitro fertilization and embryo culture, development rates were evaluated and the blastocysts were assessed for DNA damage by Comet assay. There was no effect of melatonin added to the MM, alone or in combination with gonadotropins, on nuclear maturation, cleavage and blastocyst rates. These rates ranged between 88% to 90%, 85% to 88% and 42% to 46%, respectively. The extent of DNA damage in embryos was also not affected by MEL supplementation during IVM. The addition of 10-9 M MEL to the MM failed to improve nuclear maturation and embryo development rates and the incidence of DNA damage in resulting embryos, but was able to properly substitute for gonadotropins during IVM.Melatonin (MEL) atua como um potente redutor de radicais livres. Efeito direto da MEL na função gonadal também foi observado. Existem poucos estudos relacionados ao efeito da MEL durante a maturação no desenvolvimento embrionário in vitro. Avaliou-se a adição de MEL no meio de maturação (sem gonadotrofinas) nas taxas de maturação nuclear e de desenvolvimento embrionário e na incidência de fragmentação do DNA nos embriões produzidos in vitro. Complexos cumulus-ovócitos foram aspirados de ovários provenientes de matadouros e cultivados em meio de maturação (Meio TCM-199 suplementado com 10% de soro fetal bovino) a 39ºC e 5% CO2 em ar. Após 24 horas de cultivo em meio de maturação com 0,5 µg mL-1 de FSH e 5,0 µg mL-1 de LH; 10-9 M de MEL ou 10-9 M de MEL, 0,5 µg mL-1 de FSH e 5,0 µg mL-1 de LH, os ovócitos foram corados com Hoechst 33342 para avaliação da taxa de maturação nuclear. A fragmentação do DNA dos blastocistos foi avaliada pela técnica do Cometa. Não houve efeito da MEL adicionada ao meio de maturação, com ou sem gonadotrofinas, nas taxas de maturação nuclear, clivagem e blastocistos. Os percentuais variaram entre 88% a 90%, 85% a 88% e 42% a 46%, respectivamente. O grau de fragmentação do DNA também não foi afetado pela adição de MEL ao meio de maturação. A adição de 10-9 M de MEL ao meio de maturação não exerce influência nas taxas de maturação nuclear e de desenvolvimento embrionário e nem da incidência de fragmentação do DNA dos embriões produzidos in vitro, mas pode substituir as gonadotropinas durante a maturação in vitro

Eficácia da transferência de embriões a fresco oriundos de bovinos das raças Holandesa e Simental

The efficacy of transferred fresh embryos was evaluated. Donors were superovulated on day 10 of the estrous cycle with 8, 7, 5 e 4 mg (48 mg) or 7, 6,4 e 3 mg (40 mg) of follicle stimulating hormonepituitary (FSH-P) twice a day, during four days. Analogue prostaglandin (cloprostenol) was injected on day 12 of the cycle and inseminations with frozen semen two or three times were performed, each 12 hours. Nonsurgical recovery of the embryos was performed with "Neustad a.d. Aisch" catheter, introducing the medium into the uterine horns with syringes. The uterine horns were flushed with modified Dulbecco's phosphate buffered saline (PBS) enriched with 1% of foetal calf serum at 36 °C. After the recovery, the embryos were morphologically evaluated under a stereomicroscope at 16x and 70x magnifications. The embryos transfers were surgically conducted through flank incision and pregnancy diagnosis made through rectal palpation on day 45-60after transfer. Two hundred twenty one embryos from Holstein cows and thirty seven from Simmental were transferred to two hundred fifty eight cross bred heifers. Pregnancy rates for fresh embryo transfer from Holstein and Simmental cows were 73.3% and 83.3%the values were not statistically different.Este trabalho foi conduzido com o propósito de se verificar a eficácia da transferência de embriões bovinos a fresco. Para tanto, vacas doadoras foram superovuladas a partir do 10º dia do ciclo estral com FSH-P na dose de 40 ou 48 mg, via intramuscular, em duas doses diárias decrescentes, por quatro dias, seguida da administração de Cloprostenolno 12º dia do ciclo e duas a três inseminações, a intervalos de 12 horas, quando no cio. Os embriões foram recuperados através de lavagem uterina no 7º dia após o cio, sendo cada corno uterino lavado com 300 a 400 ml de Dulbecco modificado (PBS), enriquecido com1% de soro fetal bovino. Após análise morfológica sob lupa estereoscópica, os embriões foram transferidos cirurgicamente, via incisão para-lombar, para o corno uterino de receptoras previamente selecionadas. Um total de 258 embriões, sendo 221 de doadoras da raçaHolandesa e 37 da raça Simental, foram transferidos para 258 novilhas que, decorridos 45 a 60 dias da transferência, foram palpadas, por via retal, para constatação da prenhez. Foram observados, respectivamente, para embriões de vacas Holandesas e Simentais, 73,3% e 83,3% de gestações, diferença estatisticamente não significante

Possível associação entre tipos de hemoglobina e problemas reprodutivos em éguas Mangalarga brasileiras

In the present report the biochemical polymorphism of Mangalarga mares hemoglobin, in reproductive age, from Santa Fé Farm, Botucatu, São Paulo, was studied. Animals were classified in two groups, according to reproductive history of each mare; the first group was performed by normal mares (control group) and the second one by animals with reproductive disorders (barren mares). From each animal, around 15 ml of vessel blood were collected. Hemoglobins were typed by polyacrylamide gel electrophoresis, 7% of concentration in the resolving gel, in a discontinuous alkaline (pH 8.6) buffer system. The following hemoglobins phenotypes were found in the control group, with the respective frequencies:A¹--- (2,0%), A¹, A²m+m+ (21,0%) e A¹A² m+m (27,0%). To the group performed by reproductive disorders carrier animals the following results were obtained : A¹--- (10,0%), A¹A² m+m+ (12,0%) e A¹A²m+m+ (28,0%). The difference observed in the A¹--- phenotype between the groups may be due to a probable liaison with hemoglobin locus and another one related with reproductive traits. Besides this fact, tropical environment effects may be acting on this locus, thus leading to obtained resultsForam estudadas as hemoglobinas de 100 éguas da raça Mangalarga, em idade de reprodução, provenientes da Fazenda Santa Fé, situada na região de Botucatu. Esses animais foram divididos em 2 grupos, de acordo com o histórico reprodutivo de cada animal, sendo um formado por éguas reprodutivamente normais e o segundo por éguas portadoras de problemas reprodutivos. Foram colhidas amostras de 15 ml de sangue com anticoagulante. As hemoglobinas foram identificadas por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida em placa vertical, a 7% em pH 8.6, segundo Davis11 (1964). Quanto ao sistema de hemoglobinas, foram encontrados os seguintes fenótipos para o grupo de éguas reprodutivamente normais:A¹--- (2,0%), A¹, A²m+m+ (21,0%) e A¹A² m+m (27,0%); para o grupo de éguas com problemas reprodutivos: A¹--- (10,0%), A¹A² m+m+ (12,0%) e A¹A²m+m+ (28,0%). A diferença na freqüência do fenótipo A¹--- entre os grupos pode ter ocorrido devido ã existência da ligação do loco hemoglobina a outro que controlaria características de produção. Além disso, pode estar ocorrendo influência do tipo de clima existente nos trópicos

Use of Bayesian Inference to Correlate In Vitro Embryo Production and In Vivo Fertility in Zebu Bulls

The objective of this experiment was to test in vitro embryo production (IVP) as a tool to estimate fertility performance in zebu bulls using Bayesian inference statistics. Oocytes were matured and fertilized in vitro using sperm cells from three different Zebu bulls (V, T, and G). The three bulls presented similar results with regard to pronuclear formation and blastocyst formation rates. However, the cleavage rates were different between bulls. The estimated conception rates based on combined data of cleavage and blastocyst formation were very similar to the true conception rates observed for the same bulls after a fixed-time artificial insemination program. Moreover, even when we used cleavage rate data only or blastocyst formation data only, the estimated conception rates were still close to the true conception rates. We conclude that Bayesian inference is an effective statistical procedure to estimate in vivo bull fertility using data from IVP