C. elegans ATAD-3 Is Essential for Mitochondrial Activity and Development

Contains fulltext : 80701.pdf (publisher's version ) (Open Access)BACKGROUND: Mammalian ATAD3 is a mitochondrial protein, which is thought to play an important role in nucleoid organization. However, its exact function is still unresolved. RESULTS: Here, we characterize the Caenorhabditis elegans (C. elegans) ATAD3 homologue (ATAD-3) and investigate its importance for mitochondrial function and development. We show that ATAD-3 is highly conserved among different species and RNA mediated interference against atad-3 causes severe defects, characterized by early larval arrest, gonadal dysfunction and embryonic lethality. Investigation of mitochondrial physiology revealed a disturbance in organellar structure while biogenesis and function, as indicated by complex I and citrate synthase activities, appeared to be unaltered according to the developmental stage. Nevertheless, we observed very low complex I and citrate synthase activities in L1 larvae populations in comparison to higher larval and adult stages. Our findings indicate that atad-3(RNAi) animals arrest at developmental stages with low mitochondrial activity. In addition, a reduced intestinal fat storage and low lysosomal content after depletion of ATAD-3 suggests a central role of this protein for metabolic activity. CONCLUSIONS: In summary, our data clearly indicate that ATAD-3 is essential for C. elegans development in vivo. Moreover, our results suggest that the protein is important for the upregulation of mitochondrial activity during the transition to higher larval stages

Allo-AMIDA zur Identifikation von Tumor-Antigenen bei HNO-Karzinomen

Einleitung: AMIDA (Autoantibody-Mediated Identification of Antigens) ist eine Proteom-basierende Technologie zur Isolierung potenzieller Tumor-Antigene. AMIDA wurde modifiziert und optimiert, so dass eine allogene Variante verfügbar ist. Methoden: Serum Immunoglobuline von Karzinompatienten bzw. gesunden Spendern werden verwendet, um potenzielle Tumor-Antigene aus etablierten Karzinomzelllinien zu präzipitieren. Die isolierten Antigene werden anschließend in einer zwei-dimensionalen Gelelektrophorese aufgetrennt und mittels Massenspektrometrie identifiziert. Ergebnisse: Zwölf potenzielle Tumor-Antigene wurden aus HNO-Karzinomzelllinien mit Immunglobulinen von acht Patienten identifiziert. Die Expression drei dieser Antigene, i.e. e-FABP, hnRNP H, Grb2, war stark erhöht in Primärkarzinomen und Metastasen im Vergleich zu gesunder Schleimhaut. Zudem wiesen 20% der Karzinompatienten, jedoch nur 2% gesunder Spender eine e-FABP humorale Antwort auf. Schlussfolgerung: Zusammenfassend konnten wir zeigen, dass (i) Karzinomzelllinien eine valide Alternative zu Primärmaterial zur Isolierung von Tumor-Antigenen darstellen und (ii) allo-AMIDA Limitationen einer autologen Version der Technologie umgeht

Allo-AMIDA zur Identifikation von Tumor-Antigenen bei HNO-Karzinomen

Einleitung: AMIDA (Autoantibody-Mediated Identification of Antigens) ist eine Proteom-basierende Technologie zur Isolierung potenzieller Tumor-Antigene. AMIDA wurde modifiziert und optimiert, so dass eine allogene Variante verfügbar ist. Methoden: Serum Immunoglobuline von Karzinompatienten bzw. gesunden Spendern werden verwendet, um potenzielle Tumor-Antigene aus etablierten Karzinomzelllinien zu präzipitieren. Die isolierten Antigene werden anschließend in einer zwei-dimensionalen Gelelektrophorese aufgetrennt und mittels Massenspektrometrie identifiziert. Ergebnisse: Zwölf potenzielle Tumor-Antigene wurden aus HNO-Karzinomzelllinien mit Immunglobulinen von acht Patienten identifiziert. Die Expression drei dieser Antigene, i.e. e-FABP, hnRNP H, Grb2, war stark erhöht in Primärkarzinomen und Metastasen im Vergleich zu gesunder Schleimhaut. Zudem wiesen 20% der Karzinompatienten, jedoch nur 2% gesunder Spender eine e-FABP humorale Antwort auf. Schlussfolgerung: Zusammenfassend konnten wir zeigen, dass (i) Karzinomzelllinien eine valide Alternative zu Primärmaterial zur Isolierung von Tumor-Antigenen darstellen und (ii) allo-AMIDA Limitationen einer autologen Version der Technologie umgeht

Profile identification of disease-associated humoral antigens using AMIDA, a novel proteomics-based technology.

We describe AMIDA (autoantibody-mediated identification of antigens), a novel target identification technology based on the immunoprecipitation of disease-specific antigens by autologous serum antibodies followed by two-dimensional electrophoretic separation, and their identification via mass spectrometry. Twenty-seven potential carcinoma antigens were identified including proteins of hitherto unknown function. Validation of one of the identified antigens, cytokeratin 8, revealed its de novo expression in hyperplastic tissue, gradual overexpression with increasing malignancy, and ectopic localization on the cell surface. Furthermore, a strong prevalence of CK8-specific antibodies occurred in the serum of cancer patients already at early disease stages. In situ hybridization for one marker of unknown function, KIAA1273/TOB3, demonstrated its strong overexpression in head and neck carcinomas, thus making it a likely tumor antigen candidate. Eventually, AMIDA could foster significant improvements for the diagnosis and therapy of human diseases eliciting a humoral immune response, and allows for the rapid identification of new target molecules