A p53 transzkripciós faktor család szerepe teratogén vírusok sejtkárosító hatásának molekuláris mechanizmusában = The role of the p53 transcription factor family in the molecular mechanism of cytopatic effect elicited by teratogenic viruses

Kutatásaink célja a rubeolavírus (RV), a vesicularis stomatitis vírus (VSV) és a herpes simplex vírus (HSV) sejtkárosító és teratogén hatásának jobb megértése volt, ezért azt tanulmányoztuk, hogy ezen vírusok befolyásolják-e a p63 és a Bcl-2 családba tarozó fehérjék expresszióját. RV fertőzés hatására, mindegyik TAp63 izoforma szintje emelkedett, míg a deltaNp63alfa szintje csökkent Vero sejtekben. VSV fertőzés hatására, a Bcl-2 és a Bax-alfa szintje csökkent, a p53 és a p63 szintje nem változott, míg a p18 Bax expressziója jelentős mértékben emelkedett WK sejtekben. VSV-vel fertőzött HaCaT sejtekben a deltaNp63alfa és a mutáns p53 szintje csökkent, a Bcl-2 nem változott, míg a Bax-alfa és a p18 Bax expressziója fokozódott. HSV fertőzés hatására, a deltaNp63alfa szintje csökkent, míg néhány más p63 izoforma expressziója fokozódott. Továbbá, a HSV fertőzés a Bax-béta szintjének emelkedését váltotta ki. Eredményeink azt mutatják, hogy mindhárom vírus befolyásolja a p63 izoformák és a Bcl-2 családtagok arányát, de egymástól eltérő módon. A különböző p63 izoformák szintjének változása fontos szerepet játszhat ezen vírusok sejtkárosító és teratogén hatásában. | We have investigated the effects of rubella virus (RV), vesicular stomatitis virus and herpes simplex virus (HSV) on the expressions of p63 isoforms and Bcl-2 family members, in an effort to gain some insight into the cytopathic and teratogenic effects of these viruses. Our studies have shown that RV-infected Vero cells displayed highly elevated levels of each TAp63 isoform and a decreased level of deltaNp63alpha. The levels of Bcl-2 and Bax-alpha were decreased, p53 and p63 remained unaffected, while the expression of p18 Bax was increased in VSV-infected WK cells. The levels of deltaNp63alpha and mutated p53 were decreased, Bcl-2 remained unaffected, while the expressions of Bax-alpha and p18 Bax were increased in VSV-infected HaCaT cells. HSV-infected HaCaT cells exhibited decreased level of deltaNp63alpha and highly elevated levels of some other p63 isoforms. Moreover, HSV infection caused a significant increase in the expression level of Bax-beta. Taken together, our data demonstrate that RV, VSV and HSV infections alter the stoichiometric ratios of the p63 isoforms and Bcl-2 family members, but in different ways. The dysregulated patterns of p63 expression observed in the infected cells may represent mechanisms whereby these viruses exert their cytopathic and teratogenic effects

A HMGB-1 felszabadulás és a RAGE gén polimorfizmus szerepének vizsgálata szeptikus folyamatokban és neurodegeneratív kórképekben. Kísérletes és klinikai tanulmányok. = HMGB-1 secretion and RAGE gene polymorphism in septic conditions and in neurodegenerative diseases, experimental and clinical studies

Megállapítottk, hogy a humán monocyták, különböző bakteriális inducerek-így M.bovis (BCG) hatására is képesek HMGB1( High mobility group box 1 protein) termelésére. HMGB1 súlyos acut pancreatitiseben egyrészt a gyulladásos folyamatok, másrészt a necrosis miatt emelkedik, és így, mint késői citokin , a patogenezis lényeges tényezője. A kinurénsav, mely in vitro gátolta a TNF-alfa termelést, szignifikánsan csökkenti a monocyták HMGB1 szekrécióját is. Állatkísérletekben igazoltuk a high mobility group box 1 (HMGB1) gyulladásos mediátor szint emelkedése és a szöveti oxigénfelvétel, valamint a GI mikrokeringés romlása közötti összefüggést, amely alapján egyrészt, a HMGB1 prognosztikai jelentőségű lehet, másrészt farmakológiai terápiás célpont lehet szepszisben. A RAGE (Receptor for Advanced Glycation End products) a HMGB-1 egyik receptorának egy nukleotidos polimorfizmusát vizsgálva szignifikáns eltérést találtunk a genotipusok vonatkozásában sclerosis multiplexben szenvedő betegek esetében. Az alarminok másik csoportját képezik a defenzinek. A humán defenzin beta DEFB4 három promoter polimorfizmusa rizikó tényezőként szerepelhet súlyos acut pancreatitisben. Azt is kimutattuk, hogy az inducibilis beta defenzin-2 copiaszám variációit is érdemes vizsgálni, ugyanis az alacsony (< 4 ) copia szám hajlamosít az acut pancreatitis súlyosabb formájára. Az inducibilis defenzin beta-2 csökkent kopia száma nagyobb százalékban figyelhető meg strokos betegekben is. | Bacterial inducers, such as M.bovis (BCG) are able to augment the production of High mobility group box 1 protein (HMGB-1) from monocytic cells. In clinical studies it was observed, that the circulating HMFB1 level was significantly higherin patients with severe acute pancreatitis. In severe acute pancreatitis HMGB1 secretion can be induced by inflammatory cytokines, and can be released from necrotic cells, and can be a reliable marker in the pathomechanism. Kynurenic acid, which attenuated not only the the TNF-alpha production from monocytic cells, but also diminished the HMGB1 secretion. In experimental animal sepsis model an increased HMGB1 level was determined together with the impairment of tissue oxigenisation, and the impairment of the microcirculation. HMGB1 has not only a prognostic value, but might be a tool of therapeutical intervention in sepsis. RAGE(Receptor for Advanced Glycation End products) is the receptor of HMGB1 Our results revealed an association between the promoter polymorphism of RAGE and sclerosis multiplex. Concerning the results of another alarmin, the defensin, an association between three promoter polymorphisms of defensin beta 1 (DEFB1) and acute pancreatitis was obsereved, similarly with copy number variation of DEFB4 and severe acute pancreatitis. The low copy numbers(<4) might be a risk factor in severe acute pancreatitis. Additionally the low copy number variation of DEFB4 is significantly frequent in ischaemic stroke

Involvement of p63 in the herpes simplex virus-1-induced demise of corneal cells

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>The transcription factor p63 plays a pivotal role in the development and maintenance of epithelial tissues, including the ocular surface. In an effort to gain insight into the pathogenesis of keratitis caused by HSV-1, we determined the expression patterns of the p63 and Bax proteins in the Staatens Seruminstitute Rabbit Cornea cell line (SIRC).</p> <p>Methods</p> <p>SIRC cells were infected with HSV-1 at various multiplicities and maintained for different periods of time. Virus replication was measured by indirect immunofluorescence assay and Western blot analysis. Cell viability was determined by MTT assay. The apoptotic response of the infected cells was quantified by ELISA detecting the enrichment of nucleosomes in the cytoplasm. Western blot analysis was used to determine the levels of p63 and Bax proteins.</p> <p>Results</p> <p>Indirect immunofluorescence assays and Western blot analyses demonstrated the presence of HSV-1 glycoprotein D (gD) in the infected SIRC cell line, and the pattern of gD expression was consistent with efficient viral replication. The results of MTT and ELISA assays showed that HSV-1 elicited a strong cytopathic effect, and apoptosis played an important role in the demise of the infected cells. Mock-infected SIRC cells displayed the constitutive expression of ΔNp63α. The expressions of the Bax-β and TAp63γ isoforms were considerably increased, whereas the level of ΔNp63α was decreased in the HSV-1-infected SIRC cells. Experiments involving the use of acyclovir showed that viral DNA replication was necessary for the accumulation of TAp63γ.</p> <p>Conclusion</p> <p>These data suggest that a direct, virus-mediated cytopathic effect may play an important role in the pathogenic mechanism of herpetic keratitis. By disturbing the delicate balance between the pro-survival ΔN and the pro-apoptotic TA isoforms, HSV-1 may cause profound alterations in the viability of the ocular cells and in the tissue homeostasis of the ocular surface.</p

Cytokin gén-poliorfizmus vizsgálata mikrobiális, valamint komplex aetiológiájú kórképekben = The role of cytokine gene polymorphism in diseases with microbial or complex aetiology

A TNF-alpha, az IL-8, a TGF-beta és az IL-10 termelését befolyásoló gének un. egy nukleotidos polimorfizmusát (SNP) vizsgáltuk azon betegségekben, melyekben e cytokinek jelentőségét feltételezzük a pathogenezisben.Vizsgálatainkat kiegészítettük a hő-sokk protein- Hsp-70, valamint a szignalizációban fontosnak ítélt CD14, TLR4 és NOD1 receptorokkal kapcsolatos SNP meghatározásokkal. H.pylori pozitív gastritises és ulcusos betegek esetében szignifikáns összefüggést állapítottunk meg az IL-8 -251 T/A SNP, valamint a NOD1 E277K SNP és a betegségre való hajlam között, ugyanakkor a TNF-α, CD14 és TLR4 polimorfizmusokat illetően a genotipusok megoszlása nem tért el az egészséges kontrollokétól. Pancreatitises betegek vizsgálata során a TNF-alpha -308 és az IL-8 promoter polimorfizmus valamint Hsp70-2 SNP tekintetében találtunk összefüggést a pancreatitis súlyosságával. Crohn betegségben, 133 beteg vizsgálata során nem mutattunk ki korrelációt az IL-10 polimorfizmus és a betegség megléte, vagy akár annak súlyossága között, viszont a Hsp70- 2 polimorfizmusnak volt relevanciája. Kimutattuk továbbá, hogy a magas TGF-β termeléssel járó TT genotipus vizsgálataink szerint közel 7-szeresre emeli a bi-vagy pancytopenia valószínűségét myelodysplasztikus syndromában . Felhívtuk a figyelmet a TNF-α genetikai polimorfizmus prognosztikai jelentőségére anti-TNF (Infliximab) kezelésben részesülő betegek esetén. | We aimed to determine whether single nucleotid polymorphisms (SNPs) associated with differential expression of TNF-alpha, IL-8, TGF-beta and IL-10 are associated with susceptibility to different gastrointestinal or haematologic diseases. In addition, SNPs of Hsp-70, and SNPs of CD14, TLR4 and NOD1 receptors were also investigated. Genetic polymorphism of interleukin-8 (IL-8) and NOD1 and IL-8, but not polymorphisms of TLR4 genes, were associated with Helicobacter pylori-induced duodenal ulcer and gastritis. Polymorphism of the TNF-α, HSP70-2, and CD14 genes were involved in increased susceptibility to severe acute pancreatitis. In addition, polymorphism in the IL-8 gene, but not in the TLR4 genes were connected with the severity of acute pancreatitis. Investigation of SNPs in 133cases with Crohn?s disease revealed, that the polymorphism of heat-shock protein gene HSP70-2, but not the polymorphisms of the IL-10 and CD14 genes, were associated with the outcome of Crohn's disease. Clinical importance of transforming growth factor-beta rather than the tumor necrosis factor-alpha gene polymorphisms was observed in patients with the myelodisplastic syndrome belonging to the refractory anaemia subtype. Finally, the prognostic value of TNF-alpha -301 gene polymorphism among patients treated with anti-TNFα –Infliximab was investigated, and a connection of TNF/2 allele- with high TNF producing capacity- and therapy-refractory cases was proved

High Mobility Group Box 1 Protein Induction by Mycobacterium Bovis BCG

High mobility group box 1 protein (HMGB1), a nuclear protein, is a critical cytokine that mediates the response to infection, injury, and inflammation. The aim of our study was to elaborate a reliable in vitro model to investigate whether Mycobacterium bovis BCG is able to induce HMGB1 secretion from the monocytic U-937 cells. Western blot technique was applied for the detection of HMGB1 from supernatants of cells, following induction with Mycobacterium bovis BCG. Densitometric analysis revealed higher concentrations of HMGB1 in cell supernatants stimulated with BCG than in the supernatants of the control, nonstimulated cells. Further quantitation of the secreted HMGB1 was performed by ELISA. The BCG strain resulted in a higher amount of secreted HMGB1 (450 ± 44 ng/mL) than that of LPS (84 ± 12 ng/mL) or Staphylococcus aureus (150 ± 14 ng/mL). BCG and Phorbol −12-myristate −13 acetate (PMA), added together, resulted in the highest HMGB1 secretion (645 ± 125 ng/mL). The translocation of the HMGB1 towards the cytoplasm following infection of cells with BCG was demonstrated by immunofluorescence examinations. Conclusion: Our pilot experiments draw attention to the HMGB1 inducing ability of Mycobacterium bovis. Assesment of the pathophysiological role of this late cytokine in mycobacterial infections demands further in vitro and in vivo examinations