Étude du système d'adhésion RGD dépendant dans la muqueuse intestinale humaine

Les interactions cellule-matrice extracellulaire jouent un rôle important au niveau de processus tels la migration, la prolifération et la différenciation cellulaire. Les récepteurs principaux impliqués dans l'adhésion cellulaire sont les intégrines. Une sous-classe d'intégrines reconnaît de façon bien spécifique chez ses ligands la séquence peptidique RGD. La présente étude comporte, tout d'abord, une caractérisation de l'expression de différents membres de la famille RGD (récepteurs: sous-unités [alpha]8 et [alpha]v; ligand: ostéopontine) dans la muqueuse de l'intestin grêle au cours du développement, ainsi que dans les modèles cellulaires correspondants. Les patrons d'expression obtenus par immunofluorescence indirecte, immunobuvardage Western et RT-PCR, ont permis de déterminer que l'ostéopontine, ainsi que la sous-unité [alpha]8 des intégrines sont présents et agissent probablement au cours de la morphogenèse de la muqueuse intestinale. D'autre part, le récepteur épithélial de la ténascine-C n'ayant pas été identifié dans la muqueuse intestinale, la seconde partie du projet consistait à analyser, avec le modèle cellulaire HIEC-6, les différents récepteurs entrant en jeu dans l'interaction des entérocytes avec un fragment recombinant de la ténascine-C, le TNfn3. Cette adhésion s'est avérée RGD dépendante et effectuée par des intégrines présentant la sous-unité [alpha]v, ainsi que d'une autre intégrine, fort probablement [alpha]8[bêta]1. Pour vérifier le rôle de cette dernière dans l'adhésion sur la ténascine-C, des cellules HIEC-6 ont été infectées avec un vecteur rétroviral permettant l'expression d'un anti-sens de la sous-unité [alpha]8 ou de la sous-unité [alpha]8 complète. Ces cellules pourront permettre d'élucider le rôle d'[alpha]8[bêta]1 dans l'adhésion RGD dépendante des cellules cryptales intestinales sur la ténascine-C

Rôles de la cathepsine L et des facteurs de transcription Hnf4[alpha] et Hnf1[alpha] dans la différenciation fonctionnelle de l'épithélium de l'intestin grêle

L'épithélium de l'intestin grêle est en constant renouvellement.L'équilibre entre la prolifération et la différenciation cellulaire y est finement régulé par de nombreuses interactions entre l'épithélium et son environnement. Les interactions épithéliomésenchymateuses engendrent une signalisation qui affecte l'expression génique essentielle au développement et au maintien d'une muqueuse fonctionnelle. Plusieurs facteurs de transcription endodermiques ont été identifiés comme régulateurs de l'épithélium intestinal. Cdx2 en est un exemple, son expression dans les cellules épithéliales intestinales indifférenciées est suffisante à l'induction de leur différenciation en culture. Manuscrit 1: Afin de mieux comprendre les voies moléculaires impliquées dans la différenciation de l'épithélium intestinal, les gènes dont l'expression est modulée suite à l'induction de Cdx2 dans les cellules épithéliales intestinales ont été analysés. La cathepsine L est induite avec la polarisation et la différenciation des cellules épithéliales intestinales et l'inhibition de son activité interfère avec ces processus. De plus, la perte de l'activité de cette protéase conduit à une augmentation de la multiplicité tumorale dans l'intestin des souris APC[indice supérieur Min]. Ces résultats montrent une fonction intracellulaire non suspectée pour la cathepsine L dans l'épithélium intestinal au cours de la polarisation et de l'initiation tumorale. Manuscrit 2 : Pour identifier de nouveaux régulateurs de la différenciation épithéliale intestinale, un modèle de co-culture cellulaire permettant de récapituler la différenciation de cet épithélium a été établi et caractérisé génétiquement. Hnf-4[alpha] et Hnf-1[alpha] sont fortement induits au cours de cette différenciation.L'expression forcée de Hnf-4[alpha] dans les cellules indifférenciées entraîne l'activation de Hnf-1[alpha] et de plusieurs marqueurs des fonctions digestives, ainsi que l'établissement d'une barrière fonctionnelle en co-culture. Ces observations suggèrent que Hnf-4[alpha] est un joueur important dans la régulation de la différenciation des cellules épithéliales intestinales. Manuscrit 3 : Afin de démontrer les fonctions de Hnf-1[alpha] dans l'homéostasie de l'épithélium intestinal in vivo, le phénotype intestinal des souris invalidées pour Hnf-1[alpha] a été analysé. Ces souris présentent une intestinalomégalie caractérisée par une augmentation de la prolifération cellulaire et cryptale. Ces phénomènes étant associés à une augmentation de l'activité de mTOR. De plus, les souris invalidées pour Hnf-1[alpha] présentent une modulation de l'expression de plusieurs marqueurs de cellules entéroendocrines. Ces observations suggèrent un rôle insoupçonné pour Hnf-1[alpha] dans le maintien de la croissance et le devenir des cellules entéroendocrines de l'intestin grêle. Section 4 : Afin de confirmer la collaboration entre les facteurs Hnf-4[alpha] et Hnf-1[alpha] dans l'homéostasie de l'épithélium intestinal in vivo, des souris invalidées pour Hnf-1[alpha] de façon classique et pour Hnf-4[alpha] uniquement dans l'épithélium intestinal (doublement invalidées), au cours du développement embryonnaire (villine-Cre) ainsi que chez l'adulte (CYP1A1-Cre), ont été produites. Les souris doublement invalidées au cours du développement meurent dans les premières 36 heures suivant leur naissance et les souris doublement invalidées à l'âge adulte meurent au cours du traitement qui permet l'invalidation de Hnf-4[alpha]. Ces résultats indiquent que la double invalidation de Hnf-1[alpha] et de Hnf-4[alpha] au niveau de la muqueuse de l'intestin grêle est incompatible avec la survie des souris

The miR-17∼92 microRNA cluster Is a global regulator of tumor metabolism

SummaryA central hallmark of cancer cells is the reprogramming of cellular metabolism to meet the bioenergetic and biosynthetic demands of malignant growth. Here, we report that the miR-17∼92 microRNA (miRNA) cluster is an oncogenic driver of tumor metabolic reprogramming. Loss of miR-17∼92 in Myc+ tumor cells leads to a global decrease in tumor cell metabolism, affecting both glycolytic and mitochondrial metabolism, whereas increased miR-17∼92 expression is sufficient to drive increased nutrient usage by tumor cells. We mapped the metabolic control element of miR-17∼92 to the miR-17 seed family, which influences cellular metabolism and mammalian target of rapamycin complex 1 (mTORC1) signaling through negative regulation of the LKB1 tumor suppressor. miR-17-dependent tuning of LKB1 levels regulates both the metabolic potential of Myc+ lymphomas and tumor growth in vivo. Our results establish metabolic reprogramming as a central function of the oncogenic miR-17∼92 miRNA cluster that drives the progression of MYC-dependent tumors

Integrin α8β1 regulates adhesion, migration and proliferation of human intestinal crypt cells via a predominant RhoA/ROCK-dependent mechanism

Background. Integrins are transmembrane αβ heterodimer receptors that function as structural and functional bridges between the cytoskeleton and ECM (extracellular matrix) molecules. The RGD (arginine-glycine-aspartate tripeptide motif)-dependent integrin α8β1 has been shown to be involved in various cell functions in neuronal and mesenchymal-derived cell types. Its role in epithelial cells remains unknown

Étude du système d'adhésion RGD dépendant dans la muqueuse intestinale humaine

Les interactions cellule-matrice extracellulaire jouent un rôle important au niveau de processus tels la migration, la prolifération et la différenciation cellulaire. Les récepteurs principaux impliqués dans l'adhésion cellulaire sont les intégrines. Une sous-classe d'intégrines reconnaît de façon bien spécifique chez ses ligands la séquence peptidique RGD. La présente étude comporte, tout d'abord, une caractérisation de l'expression de différents membres de la famille RGD (récepteurs: sous-unités [alpha]8 et [alpha]v; ligand: ostéopontine) dans la muqueuse de l'intestin grêle au cours du développement, ainsi que dans les modèles cellulaires correspondants. Les patrons d'expression obtenus par immunofluorescence indirecte, immunobuvardage Western et RT-PCR, ont permis de déterminer que l'ostéopontine, ainsi que la sous-unité [alpha]8 des intégrines sont présents et agissent probablement au cours de la morphogenèse de la muqueuse intestinale. D'autre part, le récepteur épithélial de la ténascine-C n'ayant pas été identifié dans la muqueuse intestinale, la seconde partie du projet consistait à analyser, avec le modèle cellulaire HIEC-6, les différents récepteurs entrant en jeu dans l'interaction des entérocytes avec un fragment recombinant de la ténascine-C, le TNfn3. Cette adhésion s'est avérée RGD dépendante et effectuée par des intégrines présentant la sous-unité [alpha]v, ainsi que d'une autre intégrine, fort probablement [alpha]8[bêta]1. Pour vérifier le rôle de cette dernière dans l'adhésion sur la ténascine-C, des cellules HIEC-6 ont été infectées avec un vecteur rétroviral permettant l'expression d'un anti-sens de la sous-unité [alpha]8 ou de la sous-unité [alpha]8 complète. Ces cellules pourront permettre d'élucider le rôle d'[alpha]8[bêta]1 dans l'adhésion RGD dépendante des cellules cryptales intestinales sur la ténascine-C

Rôles de la cathepsine L et des facteurs de transcription Hnf4[alpha] et Hnf1[alpha] dans la différenciation fonctionnelle de l'épithélium de l'intestin grêle

L'épithélium de l'intestin grêle est en constant renouvellement.L'équilibre entre la prolifération et la différenciation cellulaire y est finement régulé par de nombreuses interactions entre l'épithélium et son environnement. Les interactions épithéliomésenchymateuses engendrent une signalisation qui affecte l'expression génique essentielle au développement et au maintien d'une muqueuse fonctionnelle. Plusieurs facteurs de transcription endodermiques ont été identifiés comme régulateurs de l'épithélium intestinal. Cdx2 en est un exemple, son expression dans les cellules épithéliales intestinales indifférenciées est suffisante à l'induction de leur différenciation en culture. Manuscrit 1: Afin de mieux comprendre les voies moléculaires impliquées dans la différenciation de l'épithélium intestinal, les gènes dont l'expression est modulée suite à l'induction de Cdx2 dans les cellules épithéliales intestinales ont été analysés. La cathepsine L est induite avec la polarisation et la différenciation des cellules épithéliales intestinales et l'inhibition de son activité interfère avec ces processus. De plus, la perte de l'activité de cette protéase conduit à une augmentation de la multiplicité tumorale dans l'intestin des souris APC[indice supérieur Min]. Ces résultats montrent une fonction intracellulaire non suspectée pour la cathepsine L dans l'épithélium intestinal au cours de la polarisation et de l'initiation tumorale. Manuscrit 2 : Pour identifier de nouveaux régulateurs de la différenciation épithéliale intestinale, un modèle de co-culture cellulaire permettant de récapituler la différenciation de cet épithélium a été établi et caractérisé génétiquement. Hnf-4[alpha] et Hnf-1[alpha] sont fortement induits au cours de cette différenciation.L'expression forcée de Hnf-4[alpha] dans les cellules indifférenciées entraîne l'activation de Hnf-1[alpha] et de plusieurs marqueurs des fonctions digestives, ainsi que l'établissement d'une barrière fonctionnelle en co-culture. Ces observations suggèrent que Hnf-4[alpha] est un joueur important dans la régulation de la différenciation des cellules épithéliales intestinales. Manuscrit 3 : Afin de démontrer les fonctions de Hnf-1[alpha] dans l'homéostasie de l'épithélium intestinal in vivo, le phénotype intestinal des souris invalidées pour Hnf-1[alpha] a été analysé. Ces souris présentent une intestinalomégalie caractérisée par une augmentation de la prolifération cellulaire et cryptale. Ces phénomènes étant associés à une augmentation de l'activité de mTOR. De plus, les souris invalidées pour Hnf-1[alpha] présentent une modulation de l'expression de plusieurs marqueurs de cellules entéroendocrines. Ces observations suggèrent un rôle insoupçonné pour Hnf-1[alpha] dans le maintien de la croissance et le devenir des cellules entéroendocrines de l'intestin grêle. Section 4 : Afin de confirmer la collaboration entre les facteurs Hnf-4[alpha] et Hnf-1[alpha] dans l'homéostasie de l'épithélium intestinal in vivo, des souris invalidées pour Hnf-1[alpha] de façon classique et pour Hnf-4[alpha] uniquement dans l'épithélium intestinal (doublement invalidées), au cours du développement embryonnaire (villine-Cre) ainsi que chez l'adulte (CYP1A1-Cre), ont été produites. Les souris doublement invalidées au cours du développement meurent dans les premières 36 heures suivant leur naissance et les souris doublement invalidées à l'âge adulte meurent au cours du traitement qui permet l'invalidation de Hnf-4[alpha]. Ces résultats indiquent que la double invalidation de Hnf-1[alpha] et de Hnf-4[alpha] au niveau de la muqueuse de l'intestin grêle est incompatible avec la survie des souris