Caracterización del microbioma subgingival de sitios con y sin sangrado al sondaje en pacientes con periodontitis crónica

La periodontitis es una enfermedad originada por cambios a nivel del microbioma subgingival y su interacción con la respuesta inmunoinflamatoria del hospedero, produciéndose como resultado la destrucción progresiva de los tejidos de soporte del diente. Por tanto, durante este proceso la inflamación juega un rol esencial, por lo cual nuestro objetivo fue evaluar la influencia de la inflamación, evidenciada a través del signo clínico “Sangrado al Sondaje” (BOP) en la composición y cantidad del microbioma subgingival en sitios con periodontitis. Se tomaron dos muestras de placa bacteriana subgingival por sujeto estudiado (n=15), con y sin presencia BOP, con igual “Profundidad al Sondaje”, que fue fijada previamente en 5 mm. Para la caracterización del microbioma se utilizó piro-secuenciación 454 de los amplicones generados por PCR para las regiones V1-V2 del gen 16S rRNA y PCR en tiempo real. En cuanto a la composición de estas comunidades microbianas, se obtuvieron 109.860 secuencias de 180 bp de longitud y se alcanzó una cobertura de alrededor del 98% en todas las muestras. No hubo diferencias en la diversidad de las comunidades con y sin sangrado, sin embargo la abundancia de las especies provenientes de las muestras sin sangrado se distribuyeron de manera más homogénea que las con sangrado. Respecto a la riqueza encontrada, identificamos 1.257 OTUs (Unidades Operacionales Taxonómicas) definidas al 97% de similitud. Dentro de las OTUs más abundantes diferencialmente representadas entre ambas condiciones, encontramos a Enterobacter sakazakii OT - 75 y Neisseria subflava OT - 476 en sitios con sangrado. Una especie aún no cultivada de Treponemas (OT - 237) y Parvimonas micra OT - 111 están aumentadas en los sitios sin sangrado. Además, se encontró una gran cantidad de diferencias en OTUs de menor abundancia. A nivel de género éstas diferencias sólo se reflejaron en 8 de un total de 94 géneros bacterianos encontrados. El phylum Proteobacteria, se encuentra aumentado en el microbioma de sitios con BOP, al igual que la carga bacteriana total. Como conclusión, establecemos que la presencia de inflamación favorece el aumento bacterias presentes en el microbioma subgingival y aparentemente podría estar vinculada sólo con diferencias menores a nivel de la composición microbiana.Proyecto FONDECYT 1090046 y NIH/NIDCR-RO1DE0215780

Editorial: Oral microbiome and inflammation connection to systemic health

ANID/Chilean National Fund for Scientific and Technologic Development (FONDECYT) 11180505 R01DE025037 R01DE027374 United States Department of Health & Human Services National Institutes of Health (NIH) - USA NIH National Institute of Dental & Craniofacial Research (NIDCR) Aparece en contenido como:National Institute of Dental and Craniofacial Research/National Institutes of HealthVersión publicada - versión final del edito

Aggregatibacter actinomycetemcomitans-induced hypercitrullination links periodontal infection to autoimmunity in rheumatoid arthritis

A bacterial etiology of rheumatoid arthritis (RA) has been suspected since the beginnings of modern germ theory. Recent studies implicate mucosal surfaces as sites of disease initiation. The common occurrence of periodontal dysbiosis in RA suggests that oral pathogens may trigger the production of disease-specific autoantibodies and arthritis in susceptible individuals. We used mass spectrometry to define the microbial composition and antigenic repertoire of gingival crevicular fluid in patients with periodontal disease and healthy controls. Periodontitis was characterized by the presence of citrullinated autoantigens that are primary immune targets in RA. The citrullinome in periodontitis mirrored patterns of hypercitrullination observed in the rheumatoid joint, implicating this mucosal site in RA pathogenesis. Proteomic signatures of several microbial species were detected in hypercitrullinated periodontitis samples. Among these, Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa), but not other candidate pathogens, induced hypercitrullination in host neutrophils. We identified the pore-forming toxin leukotoxin-A (LtxA) as the molecular mechanism by which Aa triggers dysregulated activation of citrullinating enzymes in neutrophils, mimicking membranolytic pathways that sustain autoantigen citrullination in the RA joint. Moreover, LtxA induced changes in neutrophil morphology mimicking extracellular trap formation, thereby releasing the hypercitrullinated cargo. Exposure to leukotoxic Aa strains was confirmed in patients with RA and was associated with both anti-citrullinated protein antibodies (ACPAs) and rheumatoid factor (RF). The effect of HLA-DRB1 shared epitope alleles on autoantibody positivity was limited to RA patients that were exposed to Aa. These studies identify the periodontal pathogen Aa as a candidate bacterial trigger of autoimmunity in RA

Transcriptional signature primes human oral mucosa for rapid wound healing

Oral mucosal wound healing has long been regarded as an ideal system of wound resolution. However, the intrinsic characteristics that mediate optimal healing at mucosal surfaces are poorly understood, particularly in humans. We present a unique comparative analysis between human oral and cutaneous wound healing using paired and sequential biopsies during the repair process. Using molecular profiling, we determined that wound-activated transcriptional networks are present at basal state in the oral mucosa, priming the epithelium for wound repair. We show that oral mucosal wound-related networks control epithelial cell differentiation and regulate inflammatory responses, highlighting fundamental global mechanisms of repair and inflammatory responses in humans. The paired comparative analysis allowed for the identification of differentially expressed SOX2 (sex-determining region Y-box 2) and PITX1 (paired-like homeodomain 1) transcriptional regulators in oral versus skin keratinocytes, conferring a unique identity to oral keratinocytes. We show that SOX2 and PITX1 transcriptional function has the potential to reprogram skin keratinocytes to increase cell migration and improve wound resolution in vivo. Our data provide insights into therapeutic targeting of chronic and nonhealing wounds based on greater understanding of the biology of healing in human mucosal and cutaneous environments

Genotipificación de porphyromonas gingivalis en pacientes con periodontitis

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano DentistaAutor no autoriza el acceso a texto completo de su documentoLa periodontitis es un tipo de enfermedad periodontal que afecta a los tejidos de inserción de las piezas dentarias. En la actualidad, entre los agentes etiológicos que tienen mayor participación en la génesis de las periodontitis, destacan A. actinomycetemcomitans y las bacterias pertenecientes al complejo rojo. P. gingivalis presenta diversos factores de virulencia, como su capacidad de adherencia a los tejidos periodontales y a otras bacterias, el LPS de su pared celular y múltiples proteasas. Las bases moleculares de sus mecanismos de virulencia y su relación con la diversidad genética no han sido suficientemente comprendidos aún. El propósito del presente estudio es genotipificar aislados de P. gingivalis obtenidos de pacientes con Periodontitis Crónica y Agresiva utilizando una metodología basada en la “Secuencia de Inserción” (IS1126). Se tomaron muestras de biofilm subgingival en 4 sitios por paciente (uno por cuadrante). Para ello se utilizaron conos de papel estériles y se depositaron en RTF frío hasta su procesamiento en el laboratorio. Se obtuvo, mediante cultivo, bacterias pigmentadas de negro para su posterior identificación fenotípica, molecular y genotipificación, de los aislados confirmados mediante PCR como P. gingivalis. De un total de 58 aislados se identificaron por PCR 47 de ellos y se logró genotipificar 35, caracterizándose 7 perfiles genéticos diferentes. Un 66,6% de los pacientes presentaron un solo genotipo en sus aislados, mientras que el 33,3% mostró dos perfiles genéticos distintos. El grupo de pacientes estudiados presentó variabilidad genética a nivel de la secuencia IS1126, encontrándose 7 genotipos diferentes en todos los aislados analizados