Contribuição dos primers obtidos de subunidades do RNA ribossômico para discriminação entre Babesia bigemina e Babesia bovis por PCR

ABSTRACTSix pairs of species-specific primers were designed from the alignment of the sequences of the SS rRNA gene obtained from the Genbank database for Babesia bigemina (accession number X59604) and for B. bovis (accession number U06105). Three pairs of primers were designed specifically for B. bigemina and another 3 sets of primers for B. bovis. All oligonucleotide sequences selected as primers were examined for similarities to other organisms through the Genbank Blast procedure and these 6 sets of primers demonstrated high level of specificity. The synthetic oligonucleotides were also tested for specificity by PCR assay using genomic DNA extracted from 40 isolates of B. bigemina and 30 from B. bovis, obtained in six different States ofBrazil.All 6 sets of primerswere validated as 100% specific for the respective parasite. The PCR amplified the expected fragments for each set of primers, as follows: a) B. bigemina: primersGAU5forward/GAU6 reversewith amplicon of 1,124 bp; primers GAU5 forward/GAU8 reverse with amplicon of 458 bp; primersGAU7 forward/GAU6 reversewith amplicon of 685 bp; b) B. bovis: primersGAU9 forward/GAU10 reverse with amplicon of 541 bp; primers GAU9 forward/GAU 13 reverse with amplicon of 883 bp; primers SOGIN forward/ GAU10 with amplicon of 1211 bp. ______________________________________________________________________________ RESUMOSeis pares de primers espécie-específicos foram construídos a partir do alinhamento do gene SS rRNA de Babesia bigemina (número de acesso no Genbank: X59604) e Babesia bovis (número de acesso U06105). Três pares de primers foramconstruídos especificamente para B. bigemina e outros três para B. bovis. As seqüências de oligonucleotídeos, selecionadas como primers, apresentaramelevada especificidade na avaliação quanto à similaridades a outros microrganismos, através do procedimento designado “basic local alignment search tool (BLAST)” do Genbank. Os oligonucleotídeos sintéticos foram também avaliados quanto à especificidade através da reação de PCR, utilizando-se DNA genômico extraído de 40 isolados de B. bigemina e 30 de B. bovis procedentes de seis estados do Brasil. Os resultados da amplificação foram100% específicos para todos os pares de primers testados, obtendo-se, como produtos de PCR, fragmentos de tamanhos esperados para cada combinação de primers e DNA utilizados, como segue: a) B. bigemina: primers GAU5/GAU6 = amplicon de 1124 pares de base (pb); primers GAU5/GAU8 = amplicon de 458 pb; primersGAU7/GAU6 = amplicon de 685 pb; b) B. bovis: primersGAU9/GAU10 = amplicon de 541 pb; primers GAU9/GAU13 =amplicon de 883; primersSOGIN/GAU10 = amplicon de 1211 pb

ESTUDO DA PREVALÊNCIA DE ANTICORPOS ANTI-Babesia bovis E ANTI-Babesia bigemina EM BOVINOS DE LEITE DA MICRORREGIÃO DE GOIÂNIA DETERMINADA PELOS TESTES DE IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA E ELISA

O trabalho teve por objetivo estudar a prevalência de anticorpos anti-Babesia bigemina e anti-Babesia bovis no rebanho bovino de leite da microrregião de Goiânia por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e ELISA. Para o delineamento experimental o mapa da microrregião foi dividido em 47 quadrantes, dos quais 25 foram sorteados para a colheita de material. Em cada propriedade visitada foi colhido sangue aleatoriamente em cerca de 10% dos animais. Colheram-se 180 amostras de sangue, número estatisticamente representativo para a população bovina em estudo. Do total das amostras, 94,4% e 93,3% foram positivas para Babesia bigemina ao teste de RIFI e ELISA respectivamente, sendo que os métodos apresentaram uma concordância de 97,8%. Para Babesia bovis, 100% das amostras foram positivas pela RIFI e 98,9% pelo ELISA, com uma concordância de 98,9% entre eles. Não foi constatada nenhuma diferença estatisticamente significativa (

Involvement of escherichia coli, mycoplasma gallisepticum and mycoplasma synoviae with air sac lesions of broilers slaughtered in the state of Goiás

O estudo foi conduzido com o objetivo de verificar o envolvimento de Escherichia coli, de Mycoplasma gallisepticum (MG) e de Mycoplasma synoviae (MS) em aerossaculite de frangos abatidos no Estado de Goiás. Foram colhidas 139 amostras de lesões de sacos aéreos de frangos procedentes de 31 galpões, abatidos no período de janeiro a agosto de 1999. As amostras foram analisadas em forma de pools representativos de cada galpão. Para o estudo de E. coli, foram empregados métodos convencionais de cultura e identificação bacteriológica. Para o diagnóstico de MG e MS, foi empregada a técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR). No período do estudo foram abatidos 608.111 frangos provenientes de 31 galpões, dos quais 13.107 (2,15%) foram condenados por aerossaculite. A E. coli foi isolada e identificada em 25 (80,64%) dos 31 galpões estudados. MG e MS foram diagnosticados em 10 (32,25%) e 8 pools (25,80%), respectivamente, entre os 31 testados por PCR. Diferentes tipos de associações entre E. coli, MG e MS foram observadas neste estudo, sendo que a mais freqüente foi aquela envolvendo E. coli e MS (16,13%). A elevada freqüência dos três microrganismos estudados, associada ao número expressivo de condenações de carcaças de frangos verificado durante este estudo, indica a importância destes na enfermidade e para os programas sanitários avícolas na região. _______________________________________________________________________________ ABSTRACTThe study was conducted in an attempt to verify the frequency of Escherichia coli, Mycoplasma gallisepticum (MG) and Mycoplasma synoviae (MS) in air sac lesions of broilers slaughtered in the State of Goiás, Brazil. Swab samples were collected from 139 air sac lesions of broilers from 31 flocks that were slaughtered during the period from January to August of 1999. The 139 samples were mixed in pools that represented each flock. The bacteriological study was conducted by conventional methods for culture and identification of E. coli. The polymerase chain reaction (PCR) was applied for the diagnosis of MG and MS. E. coli was isolated and identified in 25 (80.64%) out of 31 flocks studied. MG and MS were detected in 10 pools (32.25%) and in 8 pools (25.80%), respectively, out of 31 flocks examined by PCR. Different types of mixed infections among E. coli, MG and MS were observed in this experiment, but the most often occurred with E. coli and MS (16.13%). The significant occurrence of the three organisms in association with the expressive number of carcass condemnations of broilers verified, indicates the importance of their involvement with airsacculitis and the impact of the disease for poultry health programs of the region

IDENTIFICAÇÃO MORFOLÓGICA DE FLEBOTOMÍNEOS CAPTURADOS EM ÁREA URBANA

Flebotomíneos tem considerável importância na transmissão de agentes etiológicos de doenças tais como bartonelose, arboviroses e especialmente a leishmaniose visceral e leishmaniose tegumentar americana, enfermidades presentes na cidade de Goiás. Com o objetivo de se identificar a população de flebotomíneos nesta localidade, foram realizadas capturas desses insetos na área urbana da cidade de Goiás. As armadilhas CDC foram posicionadas ao longo de toda área urbana, entre setembro de 2012 e agosto de 2013, no último final de semana de cada mês, repetidamente por três noites seguidas. Além da captura de insetos, foram coletados dados de umidade, precipitação e temperatura. Os resultados obtidos foram analisados por meio de estatística descritiva e analisados pela correlação de Pearson ao nível de significância de 5%. Foram coletados 342 flebotomíneos, pertencentes a oito espécies: Lutzomyia longipalpis, Nyssomyia whitmani, Nyssomyia intermedia, Evandromyia lenti, Psathyromyia shannoni, Micropygomyia peresi, Evandromyia bacula e Micropygomyia goiana. Este é o primeiro registro de Ev. bacula, Mi. peresi e Mi. goiana para a cidade de Goiás. Palavras-chave: Ev. bacula, Goiás, leishmanioses, Mi. goiana, vetores

TRIPANOSSOMÍASE EM BOVINOS NO MUNICÍPIO DE FORMOSO DO ARAGUAIA, TOCANTINS (relato de caso)

A tripanossomíase bovina por Trypanosoma vivax foi registrada pela primeira vez no Brasil por SHAW & LAINSON, em 1972, no Pará. Recentemente, tem sido reportada em várias regiões do Pantanal Mato-Grossense. O presente trabalho teve como objetivo relatar, pela primeira vez, a ocorrência de T. vivax no Estado do Tocantins, em um rebanho composto de 250 animais da raça Brahman, recém-introduzido em uma propriedade no município de Formoso do Araguaia, procedente de São Paulo. Esc olheram- se ao acaso nove animais que apresentavam sinais de debilidade para a execução de exames clínicos detalhados e colheita de sangue para preparo de esfregaços sangüíneos e determinação do hematócrito. Entre os animais examinados observaram-see emagrecimento, edema de barbela, febre e palidez de mucosa. O exame microscópico revelou parasitemias elevadas por T. vivax em amostras de três animais, cujos hematócritos apresentavam valores entre 15% e 20%. O histórico do rebanho, o ecossistema da região e os resultados dos exames clínicos e laboratoriais confirmaram a ocorrência de um surto de tripanossomíase por T. vivax em um rebanho no Estado do Tocantins. PALAVRAS-CHAVE: Epidemiologia, Trypanosoma vivax, Tocantins, tripanossomíase bovina

ENVOLVIMENTO DE Escherichia coli, de Mycoplasma gallisepticum e de Mycoplasma synoviae EM LESÕES DE SACOS AÉREOS EM FRANGOS ABATIDOS NO ESTADO DE GOIÁS

O estudo foi conduzido com o objetivo de verificar o envolvimento de Escherichia coli, de Mycoplasma gallisepticum (MG) e de Mycoplasma synoviae (MS) em aerossaculite de frangos abatidos no Estado de Goiás. Foram colhidas 139 amostras de lesões de sacos aéreos de frangos procedentes de 31 galpões, abatidos no período de janeiro a agosto de 1999. As amostras foram analisadas em forma de pools representativos de cada galpão. Para o estudo de E. coli, foram empregados métodos convencionais de cultura e identificação bacteriológica. Para o diagnóstico de MG e MS, foi empregada a técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR). No período do estudo foram abatidos 608.111 frangos provenientes de 31 galpões, dos quais 13.107 (2,15%) foram condenados por aerossaculite. A E. coli foi isolada e identificada em 25 (80,64%) dos 31 galpões estudados. MG e MS foram diagnosticados em 10 (32,25%) e 8 pools (25,80%), respectivamente, entre os 31 testados por PCR. Diferentes tipos de associações entre E. coli, MG e MS foram observadas neste estudo, sendo que a mais freqüente foi aquela envolvendo E. coli e MS (16,13%). A elevada freqüência dos três microrganismos estudados, associada ao número expressivo de condenações de carcaças de frangos verificado durante este estudo, indica a importância destes na enfermidade e para os programas sanitários avícolas na região. PALAVRAS-CHAVE: Frango de corte, Mycoplasma gallisepticum, Mycoplasma synoviae, Escherichia coli, aerossaculite, PCR

SOROVARES DE Leptospira interrogans E RESPECTIVAS PREVALÊNCIAS EM CAVALOS DA MICRORREGIÃO DE GOIÂNIA, GO

A leptospirose eqüina é uma doença infecciosa que se manifesta, principalmente, por uveíte recorrente, abortos e outros distúrbios reprodutivos, podendo ser transmitida acidentalmente ao homem.O presente trabalho teve como objetivo identificar os sorovares do complexo Leptospira interrogans e estudar a sua prevalência em cavalos da microrregião de Goiânia. Para a pesquisa foram utilizadas 182 amostras de soro, colhidas conforme delineamento estatístico. As amostras foram submetidas à pesquisa de anticorpos específicos através da prova de soroaglutinação microscópica, utilizando-se antígenos vivos cultivados em meio EMJH, enriquecido com 10% de soro de coelho, referentes aos seguintes sorovares: australis, autumnalis, ballum, bataviae, butembo, canicola, grippotyphosa, hardjo, icterohaemorrhagiae, javanica, panama, pomona, pyrogenes, tarassovi, whitcombi e wolffi.Considerou-se amostra positiva aquela que apresentou aglutinação igual ou superior a 1/100. Dos 182 soros sangüíneos analisados, 82 (45,05%) foram reagentes a um ou mais sorovares de Leptospira interrogans e 100 (54,95%)foram negativos. Dentre os soros reagentes, 56 (68,29%)foram positivos para o sorovar ictero haemorrhagie, 11(13,41%) para pomona, 7 (8,53%) para wolffi, 5 (6,09%) para hardjo e 3 (3,65%) para tipo canicola. PALAVRAS-CHAVE: Cavalos, leptospira interrogans, leptospirose, soroprevalência, sorovares, teste de soroaglutinação microscópica

Dinamic of natural infection in newborn calves exposed to by Babesia bigemina as detected by Polimerase reaction chain

Com o objetivo de estudar por PCR a dinâmica da infecção natural da Babesia bigemina em bezerros criados em sistema extensivo, foram colhidas 266 amostras de sangue de um grupo de 37 bezerros, a partir do nascimento até aproximadamente 165 dias de vida, com intervalo médio de 19 dias entre as colheitas. Distribuíram-se as amostras de acordo com os grupos de diferentes faixas etárias (entre 0 e 15 dias, entre 16 e 30 dias e assim sucessivamente até 165 dias). Do total de 266 amostras, 116 (43,60%) mostraram- se positivas para a PCR. A reação foi capaz de detectar a presença do parasito em todos os intervalos das colheitas e registrou-se o maior número de primo-infecções – 12 em 37 (32,43%) – no período de 31 a 45 dias. Dos 37 bezerros estudados, apenas um apresentou resultado da PCR positivo nos dois grupos de faixa etária inferior a 31 dias. Este animal apresentava dois dias de vida no momento da colheita, sugerindo um caso de transmissão transplacentária de B. bigemina. _______________________________________________________________________________ ABSTRACTWith the objetive of using PCR to study the dynamic of natural infection caused by Babesia bigemina in calves livestock in extensive system, 266 samples of blood were collected from a group of 37 calves from birth to approximately 165 days old. The samples were collected with an average intervale of 19 days and distributed according to age 0 to 15 days old, 16 to 30 days and successively until 165 days. Out of the total of the 266 samples, 116 (43.60%) were PCR positive. The reaction detected the presence of the parasite in all the intervals of collection and most of the prime infection, 12 in 37 (32.43%) were detected in the period between 31 and 45 days. Out of the 37 calves analysed, only one presented a positive PCR result within the two groups aged under 31 days. This animal was two days old at the moment of the collection. This result suggest a case of transplacentary transmission of Babesia bigemina

Epidemiological aspects and treatment of tungiasis in cattle from the municipality of Jataí, state of Goiás

O presente trabalho teve como objetivo relatar a ocorrência de tungíase em bovinos oriundos de seis propriedades rurais localizadas na região sudoeste do Estado de Goiás. De um total de 550 animais examinados clinicamente, 375 (68%) apresentavam lesões características da tungíase. Constatou-se que as extremidades distais dos membros locomotores, especialmente a zona de crescimento do casco, o espaço interdigital e a região dos talões, foram os locais mais acometidos. Através de enucleação cirúrgica, foram colhidas algumas amostras das lesões para o exame microscópico, que permitiu a identificação morfológica das fêmeas ovígeras de Tunga penetrans. Em 43 vacas, observaram-se também lesões típicas nos tetos, sendo que quatro apresentavam mastite clínica. Alguns animais claudicavam durante a marcha. _______________________________________________________________________________ ABSTRACTThis study was intended to describe the occurence of tungiasis in cattle from six farm in the southwest of the State of Goiás. 550 cows were submitted to clinical exams, which detected 375 (68%) animal with classical lesions due to tungiasis. The distal parts of the limbs, specially in the growing zone of the roof, and the interdigital tissue were affected mostly. Some lesions were collected by surgical procedure to be submitted to microscopic examinations. Parasites were found within these samples and they were identified by morfological characterization as mature females of Tunga penetrans. 43 cows showed typical lesions in the teats and 4 of those had clinicalmastites. Some animalswere limping

Specific discrimination between Taenia saginata and Taenia solium by one step PCR assay and duplex-PCR

Este estudo teve como objetivo a padronização de protocolos e a seleção de novos primers para a identificação espécie-específica de Taenia saginata e Taenia solium através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e duplex-PCR. Inicialmente, foram recuperadas seqüências depositadas no GenBank (acesso n° AB020399 para T. saginata e n° AB020395 para T. solium) referentes ao gene da subunidade maior do ribossomo (LSU RNAr) de tenídeos. A partir do alinhamento das seqüências, um primer genérico denominado TBR-3 (5’- ggcttgtttgaatggtttgacg- 3’) foi selecionado de região conservada e, de diferentes regiões semi-conservadas, os primers específicos TBR-4 para T. saginata (5’-cgactcatgaagataaacaaggt-3’) e TBR- 5 (5’-cggtcgaacagaccataaatct-3’) e TBR-6 (5’- gctactacacctaaattctaacc- 3’) para T. solium. Os primers foram avaliados quanto à especificidade através da PCR empregandose DNA total (DNAt) de amostras de cisticercos e proglotes dos parasitos, previamente identificadas por critérios morfológicos. O par de primers TBR-3/TBR-4 permitiu a amplificação específica do fragmento esperado de 328 pb a partir do DNAt de T. saginata. Os pares TBR-3/TBR-5 e TBR-3/TBR-6 permitiram a amplificação, respectivamente, dos fragmentos específicos de 310pb e 286pb a partir do DNAt de T. solium. A identidade dos produtos de PCR foi comprovada comparando-se a seqüência dos amplicons obtidos às seqüências de referência do gene LSU RNAr registrado no GenBank (n° AB020399 e n° AB020395). As reações apresentaram sensibilidade para detecção de até 1fg do DNAt de T. solium e 0,2fg do DNAt de T. saginata. A combinação dos primers TBR-3/TBR-4 e TBR3/TBR-6 e o tamanho dos fragmentos gênicos obtidos permitiram o estabelecimento de ensaios de duplex-PCR, eficaz na detecção simultânea do DNA de T. saginata e T. solium em sistema único de reação. Os primers utilizados não geraram qualquer produto de amplificação cruzada quando testados com DNAt de Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana e Moniezia expansa, nem frente ao DNAt dos hospedeiros Homo sapiens, Bos taurus e Sus scrofa.This study was conducted to evaluate a protocol and to select novel primers for the species-specific identification of Taenia saginata and Taenia solium by PCR and duplex- PCR assays. Sequences of the LSU rRNA gene of taenids were obtained from the GenBank (T. saginata access n° AB020399 and T. solium access n° AB020395). The sequences were aligned and then used for primer design. The generic primer TBR3 (5’- ggcttgtttgaatggtttgacg- 3’) was selected from a conserved region. The T. saginata specific primer TBR-4 (5’- cgactcatgaagataaacaaggt-3’) as well as T. solium specific primers TBR-5 (5’-cggtcgaacagaccataaatct-3’) and TBR-6 (5’- gctactacacctaaattctaacc- 3’) were selected from different semiconserved regions. The selected sequences were examined in for similarities with other organisms through the GenBank Blast procedure and experimentally by PCR using total DNA (tDNA)extracted from cysticerci and proglottids from both parasites. The primer pair TBR-3/TBR-4 amplified specific fragments of 328 bp from T. saginata tDNA. The pairs TBR-3/TBR5 and TBR-3/TBR-6 amplified, respectively, the expected and specific fragments of 310bp and 286bp from the T. solium tDNA. Sequencing of the amplicons followed by comparison to GenBank reference sequences confirmed the identities of the PCR products. The detection sensitivity was equivalent to 1fg of T. solium tDNA and 0,2fg of T. saginata tDNA. The combination of primers TBR-3/TBR-4 and TBR3/TBR-6 and the size of amplicons allowed the establishment of a duplex-PCR assay to detect T. saginata and T. solium DNA. No cross reaction was observed with any combination of primers in reactions with tDNA of the parasites Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana and Moniezia expansa, nether from the hosts tDNA Homo sapiens, Bos taurus nor Sus scrofa