Atividade β-galactosidase associada com a senescência em fibroblastos do estroma ovariano in vitro

Introducción: Un campo de investigación creciente de la biología es la senescencia celular, mecanismo que ha sido asociado -bajo determinadas circunstancias- con la transformación maligna.Teniendo en cuenta la elevada incidencia de cáncer ovárico y su génesis preferencial a partir del epitelio superficial del ovario, así como la posibilidad de ocurrencia de una transición epiteliomesenquimática, se evaluó, tanto el crecimiento in vitro de los fibroblastos del estroma cortical, como la actividad a pH 6 de la β-galactosidasa, enzima cuya expresión ha sido clásicamente considerada como marcador de senescencia replicativa. Metodología: 48 muestras de fibroblastos de la corteza ovárica provenientes de donantes sin antecedentes de cáncer fueron cultivadas en forma seriada hasta el final de su vida replicativa. Mediante el método quimioluminiscente, en cada pase fue cuantificada la actividad β-galactosidasa a pH 6. Como control se utilizaron cultivos de células del epitelio superficial ovàrico de las mismas donantes. La actividad enzimática fue también evaluada en fibroblastos previamente inducidos a senescencia con peróxido de hidrógeno. Resultados: Las lecturas de actividad enzimática, analizadas en conjunto con la capacidad replicativa, indican que los cultivos de fibroblastos alcanzaron el estado senescente hacia los pases 4-5, lo que también ocurrió con las células epiteliales. Los fibroblastos inducidos a senescencia mostraron valores variables de actividad enzimática. Conclusiones: La semejanza entre los fibroblastos y las células epiteliales en cuanto al inicio de la senescencia podría estar relacionado con la transición epitelio-mesenquimática que ha sido descrita como factor de riesgo de cáncer derivado del epitelio superficial ovàrico. Valores bajos de actividad β-galactosidasa podrían sugerir que, en algunos casos, ocurrió inactivación de las vías de respuesta al estrés oxidativo.Introduction: A growing biological research field is the cellular senescence, a mechanism that has been associated, under certain circumstances, with malignant transformation. Given the high incidence of ovarian cancer and its main origin from the ovarian surface epithelium, as well as the possibility that an epithelial-mesenchymal transition occurs, we evaluated both the in vitro growth of stromal fibroblasts from the ovarian cortex and their β-galactosidase activity at pH 6, enzyme whose expression is considered as a marker of replicative senescence. Methods: 48 samples of ovarian cortical fibroblasts from donors without a history of cancer were serially cultured until the end of their replicative life. β-galactosidase activity at pH 6 was quantified in each passage by the chemiluminiscent method. As control, we used ovarian epithelial cell cultures from the same donors. The enzyme activity was also evaluated in fibroblasts previously induced to senescence by exposure to hydrogen peroxide. Results: The analysis of the enzyme activity and the replicative capacity taken together showed that the fibroblast cultures reached the senescent state at passages 4-5, as what happened with the control epithelial cells. Fibroblasts induced to senescence showed high variability in the values of enzymatic activity. Conclusions: The similarity between both types of cells in reaching the senescent state deserves to be taken into account in relation to the epithelialmesenchymal transition that has been proposed to explain their behavior in the genesis of cancer arising from ovarian surface epithelium. Low β-galactosidase activity values at pH 6 would suggest possible inactivation of the response pathways to oxidative stress.Introdução: um campo de pesquisa crescente da biologia é a senescência celular, mecanismo que tem sido associado, sob determinadas circunstancias, com a transformação maligna. Tendo em conta a elevada incidência de câncer ovariano e sua gênese preferencial a partir do epitélio superficial do ovário, assim como a possibilidade de ocorrência de uma transição epitélio-mesenquimática, se avaliou, tanto o crescimento in vitro dos fibroblastos do estroma cortical, como a atividade a pH 6 da β-galactosidase, enzima cuja expressão tem sido classicamente considerada como marcador de senescência replicativa. Metodologia: 48 amostras de fibroblastos do córtex ovariano provenientes de doadores sem antecedentes de câncer foram cultivadas em forma seriada até o final de sua vida replicativa. Mediante o método quimioluminescente, em cada passe foi quantificada a atividade β-galactosidase a pH 6. Como controle utilizou-se cultivos de células do epitélio superficial ovariano das mesmas doadoras. A atividade enzimática foi também avaliada em fibroblastos previamente induzidos a senescência com peróxido de hidrogeno. Resultados: as leituras da atividade enzimática, analisada em conjunto com a capacidade replicativa, indicam que os cultivos de fibroblastos alcançaram o estado senescente para os passes 4-5, o que também ocorreu com as células epiteliais. Os fibroblastos induzidos a senescência mostraram valores variáveis de atividade enzimática. Conclusões: as semelhanças entre os fibroblastos e as células epiteliais em quanto ao inicio da senescência poderia estar relacionado com a transição epitélio-mesenquimática que tem sido descrita como fator de risco de câncer derivado do epitélio superficial ovariano. Valores baixos de atividade β-galactosidase poderiam sugerir que, em alguns casos, ocorreu inativação das vias de resposta ao estresse oxidativo

Revisando la inactivación del cromosoma X y su impacto en la longevidad femenina

La inactivación del cromosoma X es el mecanismo genético por el cual la expresión génica ligada al X se iguala entre los géneros masculinos y femeninos de todas las especies de mamíferos placentarios. Dado que la probabilidad de expresión de alelo ligado a X mutante disminuye como resultado de la inactivación, se ha propuesto que las hembras tienen ventajas biológicas en relación con los machos. Estas ventajas han captado la atención de la comunidad científica en los últimos años y la han centrado en este tema y sus implicaciones clínicas. Para arrojar algo de luz sobre este fenómeno intrigante, este artículo revisa los eventos moleculares más relevantes involucrados en este proceso. Estos eventos incluyen el papel de Xist , el mecanismo de selección para la futura inactivación del cromosoma X, la inactivación relacionada con la edadsesgo y la relación entre la inactivación y la aparición de enfermedades ligadas al cromosoma X, posibles tratamientos y longevidad.X-chromosome inactivation is the genetic mechanism by which X-linked gene expression is equalized between the male and female genders of all placental mammal species. Given that the probability of mutant X-linked allele expression decreases as a result of the inactivation, it has been proposed that females have biological advantages relative to males. These advantages have grabbed the attention of the scientific community in recent years and have focused it on this topic and its clinical implications. To shed some new light on this intriguing phenomenon, this article reviews the most relevant molecular events involved in this process. These events include the role of Xist, the selection mechanism for future X-chromosome inactivation, the age-related inactivation skewing, and the relationship between inactivation and the emergence of X-linked diseases, possible treatments, and longevit

Expressão de TRF2 e GAPDH no envelhecimento do epitélio superficial do ovário in vitro

Se ha demostrado que la proteína GAPDH se puede unir al ADN telomérico de cadena sencilla, tanto in vitro como in vivo. Por lo tanto, se ha planteado la hipótesis de que la GAPDH juega un papel importante en la protección de los telómeros, papel que podría ser compartido con la TRF2, proteína que participa en una gran variedad de funciones relacionadas con la homeostasis telomérica. Objetivo: el objetivo de este estudio fue determinar si existe una correlación entre la expresión de ambos genes en el epitelio superficial del ovario in vitro. Materiales y métodos: la expresión relativa de cada gen fue establecida mediante qRT-PCR, en cultivos primarios de células del epitelio superficial del ovario provenientes de un grupo de 22 donantes colombianas mestizas sanas. Resultados: las pruebas no paramétricas de Kendall y Spearman permitieron establecer que existe una correlación significativa entre los niveles de expresión de GAPDH y TRF2 a lo largo de la historia replicativa de los cultivos, en forma independiente de la edad de las donantes. Conclusión: nuestros resultados sugieren un efecto sinérgico entre TRF2 y GAPDH, que podría estar orientado a contrarrestar la reducción de los telómeros in vitro.GAPDH can bind single-strand telomere DNA both in vitro and in vivo. Thus, it was hypothesisedthat GAPDH has an important role in protecting the telomeres, role that could be shared with TRF2, a well-known telomeric protein involved in a myriad of functions related to telomere homeostasis. Objective: The aim of this study was to determine if there was a correlation between the expression of these genes in the in vitro ovarian surface epithelium. Materials and methods: The relative expression of each gene was established by qRT-PCR in primary cell cultures of the ovarian surface epithelium from 22 healthy mestizo Colombian donors. Results: The Kendall and Spearman non-parametric tests established a significant correlation between the levels of expression in subsequent passages of the cell line, in an age-independent way. Conclusion: Our findings suggest a synergistic effect between TRF2 and GAPDH that could counter telomere shortening in vitro.Tem se demonstrado que GAPDH pode-se unir ao DNA telomérico de cadeia simples, tanto in vitro quanto in vivo. Portanto, tem se apresentado a hipótese de que GAPDH joga um papel importantena proteção dos telómeros, papel que poderia ser compartilhado com TRF2, proteína que participa em uma grande variedade de funções relacionadas com a homeostase telomérica. Objetivo. O objetivo deste estudo foi determinar se existe uma correlação entre a expressão de ambos os genes no epitélio superficial do ovário in vitro. Materiais e métodos: A expressão relativa de cada gene foi estabelecida mediante qRT-PCR em cultivos primários de células do epitélio superficial do ovário provenientes de um grupo de 22 doadoras colombianas mestiças sanas. Resultados. As provas não paramétricas de Kendall e Spearman permitiram estabelecer que existe uma correlação significativa entre os níveis de expressão de GAPDH e TRF2 ao longe da história replicativa dos cultivos, em forma independente da idade das doadoras. Conclusão. Nossos resultados sugerem um efeito sinérgico entre TRF2 e GAPDH que poderia estar orientado a contra-arrestar a redução dos telómeros in vitro

High chromosomal instability in workers occupationally exposed to solvents and paint removers

Background: Painters are exposed to an extensive variety of harmful substances like aromatic hydrocarbons used as solvents and paint removers, some of which have shown clastogenic activity. These substances constitute a complex mixture of chemicals which contain well-known genotoxicants, such as Benzene, Toluene and Xylene. Thus, chronic occupational exposure to such substances may be considered to possess genotoxic risk. In Colombia the information available around the genotoxic damage (Chromosomal and DNA damage) in car paint shop workers is limited and the knowledge of this damage could contribute not only to a better understanding of the carcinogenic effect of this kind of substances but also could be used as biomarkers of occupational exposure to genotoxic agents. Results: In this study, the genotoxic effect of aromatic hydrocarbons was assessed in peripheral blood lymphocytes of 24 workers occupationally exposed and 24 unexposed donors, by using Cytogenetic analysis and comet assay. A high frequency of Chromosomal alterations was found in the exposed group in comparison with those observed in the unexposed group. Among the total of CAs observed in the exposed group, fragilities were most frequently found (100 %), followed by chromosomal breaks (58 %), structural (41.2 %) and numerical chromosomal alterations (21 %). Numerical chromosomal alterations, fragilities and chromosomal breaks showed significant differences between exposed and unexposed groups. Among the fragilities, fra(9)(q12) was the most frequently observed. DNA damage index was also significantly higher in the exposed group compared to the unexposed group (p < 0.000). Conclusions: Our results revealed that occupational exposure to aromatic hydrocarbons is significantly associated with Chromosomal and DNA damage in car paint shops workers and are also indicative of high chromosomal instability. The high frequency of both Chromosomal Alterations and DNA Damage Index observed in this study indicates an urgent need of intervention not only to prevent the increased risk of developing cancer but also to the application of strict health control and motivation to the use of appropriate protecting devices during wor

Biocirugía: utilización de larvas de insectos necrófagos en la curación de heridas. La terapia larval

La terapia larval es una técnica que permite aplicarlas larvas de algunas especies de dípteros sobre heridas crónicas o sobre focos de infección localizados, con la finalidad de restaurar el tejido afectado. La velocidad y la eficacia del tratamiento, sumadas a la casi nula pérdida de tejido sano durante el proceso de reparación tisular, han hecho de la terapia larval o biocirugía una alternativa viable para la curación de heridas asociadas con entidades como pie diabético, úlceras venosas, úlceras crónicas de la piel y quemaduras, así como de ciertos tipos de tumores benignos, abscesos y osteomielitis. Aunque la medicina moderna ha sido, en muchos casos, reticente a la aplicación de terapias de esta índole, eventos como la resistencia a los antibióticos y las alteraciones en el proceso de cicatrización en las heridas crónicas han permitido modificar la posición inicial de muchos médicos al respecto

Entomología forense : insectos al servicio de la justicia

La creciente presencia de lesiones osteomusculares que afectan, alteran o transforman los patrones de movimiento de los trabajadores que realizan actividades industriales, plantean serios interrogantes para las disciplinas científicas que tratan de estudiar la naturaleza del movimiento humano. Conocedor de esta problemática, el Grupo de Investigación Salud, Cognición y Trabajo (GiSCYT) de la Facultad de Rehabilitación y Desarrollo Humano de la Universidad del Rosario, ha venido desarrollando herramientas para el estudio del movimiento en el trabajo, con el fin de identificar estrategias para la prevención de lesiones a través del análisis del gesto precursor de las mismas y poder así replantearlo en términos de funcionalidad y eficiencia. Las necesidades de coordinación, velocidad y fuerza requeridas en el desarrollo de las actividades productivas están relacionadas con los patrones de movimiento de los trabajadores; por lo tanto, cualquier alteración en dichos patrones puede traer consecuencias para el sistema de producción y para la salud. Para poder enfrentar estos problemas, los investigadores del GiSCYT, Juan Castillo y Alejandro Orozco, han logrado identificar las formas mediante las cuales los trabajadores logran la integración y desarrollo de habilidades para ejecutar movimientos bien orientados, con alto grado de precisión; movimientos que son de uso común en el mundo del trabajo y cuya importancia es frecuentemente subestimada. Cuando ocurren lesiones o daños en el aparato locomotor se presentan alteraciones en los patrones de movimiento humano, ésto trae como consecuencia problemas asociados a la autonomía y el control para desplazarse o ejercer fuerza y realizar movimientos. En algunas ocasiones incluso llega a limitar la capacidad individual para ejecutar las tareas domésticas y cotidianas más simples. Es así como se evidencia un vínculo entre estudio del movimiento y lesiones osteomusculares al tratar de comprender los mecanismos que operan en el control del movimiento y de la postura. A la par, también se hace evidente la importancia de las estrategias de control y de anticipación desarrolladas por los individuos, y que en muchos casos hacen la diferencia frente al riesgo de lesión o trauma

Con larvas de moscas sanan heridas crónicas

Diminutas, blancas, silenciosas, similares a los ‘gusanos’ que se encuentran en una guayaba, son las larvas esterilizadas de una mosca verde conocida científicamente como Lucilia sericata, capaces de sanar las heridas de una vaca y varios conejos. Así lo pudieron constatar los miembros del grupo de investigación en terapia larval de la Facultad de Medicina de la Universidad del Rosario, dirigidos por el profesor Felio Bello, biólogo y Ph.D en Entomología. Aunque las investigaciones, experimentos, mediciones y cura no se están aplicando en Colombia en humanos en esta primera fase del proyecto, la terapia larval, conocida en el mundo como terapia de gusano, terapia de desbridamiento larval o biocirugía, sí es una esperanza de cura para personas diabéticas, por ejemplo, que sufren de úlceras crónicas en la piel cuando sus heridas no responden a tratamientos convencionales.(1) La terapia larval, como alternativa de tratamiento para estas heridas que no cicatrizan, es un método más económico, de evolución más rápida y seguro. (1) Stoddard et al.1995, Mumcuoglu et al. 1998, 1999, Thomas et al. 1999, Tantawi et al. 2007

Determination Of Interleukine-10 In Cancer Patients In Stages Iii And Iv Treated With Dexamethasone.

La utilización de la dexametasona está asociada con la supresión de la respuesta inmune en pacientes con cáncer en estadíos III y IV, debido posiblemente a una acción inhibidora sobre las células dendríticas presentadoras de antígenos. Bajo la acción de la dexametasona, las células dendríticas secretan niveles muy bajos de IL-10, lo que a su vez disminuye, tanto la respuesta mediada por los linfocitos Th2 como la inducida por las células NK. La IL-10 tiene pues un efecto dual, si se tiene en cuenta que, en la mayoría de los modelos experimentales, aumenta en pacientes tratados con glucocorticoides tipo dexametasona e inhibe la respuesta mediada por los linfocitos Th1, con una consecuente exacerbación del proceso. Metodología: Se utilizó la prueba de ELISA para determinar IL-10 en pacientes con diferentes tipos de tumor en estadíos III y IV, sometidos a quimioterapia y tratados con dexametasona-metoclopramida como antiemético y en un grupo control de personas sanas. Resultados: En este modelo experimental, todos los pacientes con cáncer en estadíos III y IV presentaron niveles séricos de IL-10 muy bajos, comparados con los del grupo control. Además, IL-10 no aumentó su concentración en los pacientes tratados con dexametasona. Conclusión: IL-10 no provoca anergia de las células dendríticas ni disminución de la respuesta citotóxica mediada por Th1. Por tanto, se sospecha que es la dexametasona y no la IL-10 la responsable de la supresión en la respuesta inmune en pacientes con cáncer en estadíos III y IV, lo que podrá ser demostrado en posteriores estudios que complementen los resultados obtenidos.Dexamethasone treatment in patients with cancer in stages III and IV is associated with immune response suppression, possibly because of the inhibiting effect produced by antigen presenting dendritic cells. Under dexamethasone action, dendritic cells secrete very low levels of IL-10 that not only diminish the Th2 lymphocyte response but also the one induced by NK cells. In most of experimental models, IL-10 levels increase when patients have been previously treated with dexamethasone, which inhibits the Th1 lymphocytes response and produces worsening of the process. Methodology: ELISA test was used to determine IL-10 in patients with different tumors in stages III and IV treated with chemotherapy and dexamethasone-metoclopramide and in healthy controls. Results: In the experimental model, all patients with cancer in stages III and IV exhibited very low levels of IL- 10, compared to those of the control group. In addition, IL-10 concentration did not increase in patients treated with dexamethasone. Our results show that IL-10 does not produce dendritic cells anergy nor cytotoxic response mediated by Th1 lymphocytes. Conclusion: it is possible that immune response suppression in this type of patients is the result of dexamethasone and not of IL-10 effect

Quantification of cell-free DNA for evaluating genotoxic damage from occupational exposure to car paints

Background: For several years, cell-free DNA has been emerging as an important biomarker for non-invasive diagnostic in a wide range of clinical conditions and diseases. The limited information available on the genotoxic effects associated with occupational exposure to car paints, as well as the fact that up-to-date there are not reports about cell-free DNA measurements for assessing this condition, led us to evaluate the DNA damage caused by the occupational exposure to organic solvents contained in car paints, through the quantification of the cell-free DNA and the comet assay, in a sample of 33 individuals taken from 10 automobile paint shops located in Bogota DC, Colombia. Results: By applying the two methods, cell-free DNA and comet assay, we found a significant increase in the extent of DNA damage in the exposed individuals compared with the non-exposed ones within the control group. Conclusions: Our findings provide useful information about the cell-free DNA levels in this type of exposure and can be considered as a support tool that contributes to the diagnosis of genotoxic damage in individuals occupationally exposed to car paints. © 2016 The Author(s)

Quantification of cell-free DNA for evaluating genotoxic damage from occupational exposure to car paints

cfDNA concentrations and type of comet in the exposed individuals - grouped by car paint shops - and BTX concentrations in the indoor air. Table S2. Socio-demographic data of the exposed cohort. Table S3. Socio-demographic data of the non-exposed cohort. Table S4. Exposed cohort. cfDNA and total count and types of comet. Table S5. Non-exposed cohort. cfDNA and total count and types of comet. Table S6. Air borne solvents concentrations in workshops. Table S7. Exposed cohort. Comet score data. Table S8. Non-exposed cohort. Comet score data. (DOCX 73 kb