Análise do microbioma procarionte de fêmeas e cultura celular embrionária de Rhipicephalus sanguineus linhagens tropical e temperada de duas localidades no Brasil

Two lineages of Rhipicephalus sanguineus are known in Brazil: the temperate or southern and the tropical or northern populations. The distribution patterns of both lineages of R. sanguineus have epidemiological implications that can affect vectorial competence concerning Ehrlichia canis, the agent of canine monocytic ehrlichiosis. Intending to identify the microbiomes of both lineages and compare microorganisms in R. sanguineus, we used the 16S rRNA (V4-V5 region) gene-based metataxonomic approach, through NGS sequencing on the MiSeq Illumina platform. We selected specimens of females from the environment and samples of primary embryonic cell cultures, from both lineages, and this was the first study to investigate the prokaryotic microbiome in tick cell cultures. The results showed that many bacterial taxa detected in the samples were typical members of the host environment. A significant diversity of microorganisms in R. sanguineus females and in embryonic cell cultures from both lineages was found, with emphasis on the presence of Coxiella in all samples, albeit in different proportions. The Coxiella species present in the two lineages of ticks may be different and may have co-evolved with them, thus driving different patterns of interactions between ticks and the pathogens that they can harbor or transmit to vertebrate hosts.Duas linhagens de Rhipicephalus sanguineus são conhecidas no Brasil: populações da linhagem temperada ou do sul, e tropical ou do norte. Os padrões de distribuição de ambas as linhagens de R. sanguineus têm implicações epidemiológicas, podendo afetar a competência vetorial de Ehrlichia canis, o agente etiológico da erliquiose monocítica canina. Com a intenção de identificar os microbiomas de ambas as linhagens e comparar microrganismos de R. sanguineus, foi utilizada a metataxonomia, baseada no gene 16S rRNA (região V4-V5), por meio do sequenciamento de nova geração na plataforma MiSeq Illumina. Foram selecionadas amostras de fêmeas do ambiente e cultivo primário de células embrionárias, considerando-se as duas linhagens conhecidas do Brasil. Este é o primeiro estudo que investiga o microbioma procariótico de células de cultura de carrapato. Os resultados mostram que muitos grupos de bactérias detectadas nas amostras são membros típicos do ambiente do hospedeiro. Uma diversidade significativa de microrganismos em fêmeas e cultura de células embrionárias nas duas linhagens de R. sanguineus foi encontrada, com ênfase na presença de Coxiella em todas as amostras, ainda que em diferentes proporções. Possivelmente, as espécies de Coxiella presentes nas duas linhagens de carrapatos são diferentes e co-evoluíram com essas linhagens, conduzindo a diferentes padrões de interação entre carrapatos e patógenos que podem abrigar ou transmitir aos hospedeiros vertebrados

ASSISTÊNCIA DE ENFERMAGEM NA PREVENÇÃO DO DESMAME PRECOCE: Revisão Integrativa da Literatura.

Breastfeeding is considered the first healthy lifestyle of human beings, it should be exclusive in the first six months of life and complemented until two years of age. However, this may encounter several barriers to its realization, since early weaning is influenced by several social, emotional and cultural factors. In this sense, it is the nurse's role to demystify beliefs and myths and adopt different strategies to maintain exclusive breastfeeding. The objective was to analyze the performance of nursing care in preventing early weaning and its causes. This is an integrative literature review, carried out in the BVS, SciELO, LILACS, BDENF and PubMed databases. Studies published in the last ten years were included, considering complete articles in English or Portuguese from 2013 to 2023, which responded to the objectives of the present study. In addition, duplicate, incomplete, review articles that did not respond to the objectives of the studies and are not in the time frame of the last ten years were excluded. 14 articles were selected, which were within the eligibility criteria. It was evident that the belief in the “weak” and “insufficient” bed, the need to return to extra-domestic work and the difficulty in maintaining the breastfeeding routine results in early weaning. It is concluded that the participation of the nursing professional during the breastfeeding process contributes to its being exclusive up to an ideal date, thus avoiding the introduction of other foods before the correct period.O aleitamento materno é considerado o primeiro estilo de vida saudável do ser humano, deve ser exclusivo nos primeiros seis meses de vida e complementado até os dois anos. Todavia, essa exclusividade encontra diversas barreiras para a sua realização, posto que o desmame precoce é influenciado por inúmeros fatores sociais, emocionais e culturais. Neste sentido, é papel do enfermeiro desmistificar as crenças e mitos e adotar diferentes estratégias para a manutenção do aleitamento exclusivo. Objetivou-se analisar a atuação da assistência da enfermagem na prevenção ao desmame precoce e suas causas. Trata-se de uma revisão integrativa de literatura, realizada nas bases de dados BVS, SciELO, LILACS, BDENF e PubMed. Foram incluídos estudos publicados nos últimos dez anos, considerando artigos completos em inglês ou português no período de 2013 a 2023, os quais responderam os objetivos do presente estudo. Ademais, foram excluídos os artigos duplicados, incompletos, de revisão, que não responderam os objetivos dos estudos e não estão no recorte temporal dos últimos dez anos. Foram selecionados 14 artigos, os quais estavam dentro dos critérios de elegibilidade. Evidenciou-se que a crença no leito “fraco” e “insuficiente”, a necessidade de retornar ao trabalho extra doméstico e a dificuldade de manter a rotina de amamentação resulta no desmame precoce. Conclui-se que a participação do profissional de enfermagem durante o processo de amamentação contribui para que esta seja exclusiva até a data ideal, evitando, assim, a introdução de outros alimentos antes do período correto

Assistência de Enfermagem em Crianças com Leishmaniose Visceral: Revisão Integrativa.

Visceral Leishmaniasis is characterized as a disease of serious public health problem in Brazil and worldwide, popularly known as calazar, identified by long-lasting fever, asthenia, anemia, weight loss, among other clinical manifestations. When not properly treated, the individual dies. Therefore, the objective of this study is to describe the nursing attributions in the cases of children affected by visceral leishmaniasis. The integrative literature review was developed through articles found in the following databases: Lilacs; Scielo, PubMed; BVS-BIREME, and BDENF, considering the time frame of the last 10 years. After applying the eligibility criteria, ten studies were found for analysis. As a result, it was observed that the nursing process is characterized by the interrelationship and dynamism of each step. The implementation of this assistance is an indispensable procedure both for early detection of children with visceral leishmaniasis and for rehabilitation. Thus, patient care involves dialogue, humanized care, multidisciplinary service provision, focusing not only on curative assistance, but also to develop educational actions.A Leishmaniose Visceral caracteriza-se por ser uma doença de grave problema para saúde pública no Brasil e no mundo, popularmente conhecida como calazar, identificada por febre de longa duração, astenia, anemia, perda de peso, dentre outras manifestações clínicas. Quando não tratada adequadamente leva o indivíduo ao óbito. Para tanto, o objetivo deste trabalho, consiste em descrever as atribuições da enfermagem frente aos casos de crianças acometidas por leishmaniose visceral. A revisão integrativa da literatura foi desenvolvida através de artigos alcançados nas bases de dados: Lilacs; Scielo, PubMed; BVS-BIREME, e BDENF, considerando o recorte temporal dos últimos 10 anos. Diante da aplicação dos critérios de elegibilidades, encontraram-se dez estudos para análise. Como resultado, observou-se que o processo de enfermagem é caracterizado pelo inter-relacionamento e dinamismo de cada etapa. A implementação dessa assistência faz-se um procedimento imprescindível tanto para detecção precoce de crianças com leishmaniose visceral quanto para a reabilitação. Assim, o cuidado com o paciente envolve diálogo, atendimento humanizado, prestação de serviço multidisciplinar, com foco não apenas na assistência curativa, mas também, o desenvolvimento de ações educativas

Estabelecimento e caracterização de linhagens celulares embrionárias de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (RBME-6) e Amblyomma sculptum (ASE-14) (Acari:Ixodida) do Brasil

Ticks are arthropods of great medical and veterinary importance, being responsible for the transmission of viruses, bacteria, helminths and protozoa to their hosts. Some of the tick-borne pathogens are difficult to grow in vitro, and do not grow on artificial media or other substrates. Tick cell lines represent a useful tool for studying many aspects of tick and tick-borne pathogen research. Here, we established and characterized two cell lines RBME-6 and ASE-14 derived from embryos of Rhipicephalus microplus and Amblyomma sculptum, respectively, both from Brazil. Primary tick cell cultures were prepared in L-15B at 30ºC.When they reached an adequate density, the cells were subcultured and cryopreserved in several passages. Cytological analysis were performed using phase contrast microscopy and cytocentrifuge smears stained with Giemsa, while periodic acid-Schiff and bromophenol blue staining techniques were used to detect total polysaccharides and the total protein, respectively. Anaplasma spp., Anaplasma marginale, Babesia/Theileria spp., Coxiella spp., Ehrichia canis, Mycoplasma spp. and Rickettsia sp. were not detected in the cells through PCR assays. In addition, we performed chromosomal characterization of the tick cell line and confirmed the origin of the cell line through conventional PCR and sequencing of the 16S rRNA gene mitochondrial fragment. In conclusion, two new cell lines derived from embryos of ticks were generated and characterized in this study. These cell lines can be used in future studies on different aspects, such as the relationship between ticks and pathogens transmitted by them, expression of proteins in infected and non-infected cells and obtaining antigens. In addition, it is important to have a larger panel of tick cell lines, as they can serve as efficient tools for advancing research in various areas of virology, bacteriology, biology and control of these ticks.Os carrapatos são artrópodes de grande importância médica e veterinária, sendo responsáveis pela transmissão de vírus, bactérias, helmintos e protozoários aos seus hospedeiros. Alguns dos patógenos transmitidos por carrapatos são difíceis de cultivar in vitro e não se multiplicam em meios artificiais ou outros substratos. As linhagens de células de carrapatos representam uma ferramenta útil para estudar muitos aspectos da pesquisa de carrapatos e patógenos transmitidos por eles. Aqui, estabelecemos e caracterizamos duas linhagens celulares RBME-6 e ASE-14 derivadas de embriões de Rhipicephalus microplus e Amblyomma sculptum, respectivamente, ambos coletados no Brasil. Culturas primárias de células foram preparadas a partir de ovos embrionados das duas espécies de carrapatos, em meio L-15B, e mantidas à 30 º C. Quando as culturas atingiram uma densidade celular adequada, foram subcultivadas e criopreservadas em várias passagens. As análises citológicas foram feitas usando microscopia de contraste de fase, com células que foram submetidas à citocentrifugação e coradas com Giemsa, enquanto a técnica de coloração com azul de bromofenol foi usada para detectar proteína e a reação com Ácido Periódico de Schiff (PAS) foi usada para detectar polissacarídeos. Não foi detectado o DNA de Anaplasma spp., Anaplasma marginale, Babesia/Theileria spp, Bartonella spp., Coxiella spp., Ehrlichia canis, Rickettsia spp. ou Mycoplasma spp. nas células por meio de ensaios de PCR. Além disso, realizamos a caracterização cromossômica das linhagens celulares de ambas as espécies de carrapatos e confirmamos a origem dessas linhagens por meio de PCR convencional e sequenciamento de um fragmento do gene mitocondrial 16S rRNA. Em conclusão, duas novas linhagens celulares derivadas dos embriões de carrapatos foram geradas e caracterizadas neste estudo. Essas linhagens celulares poderão ser usadas em estudos futuros sobre diferentes aspectos, como as relações entre carrapatos e patógenos transmitidos por eles, expressão de proteínas em células infectadas e não infectadas e obtenção de antígenos. Além disso, é importante ter um painel maior de linhagens de células de carrapatos, pois elas podem servir como ferramentas eficientes para o avanço de pesquisas em várias áreas da virologia, bacteriologia, biologia e controle desses carrapatos

Embryonic cell culture of ticks of the genus Rhipicephalus for cultivation of Ehrlichia canis and Anaplasma marginale

No Brasil, carrapatos do gênero Rhipicephalus são representados pelas espécies Rhipicephalus sanguineuss.l. (Latreille) e Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini), sendo que a primeira espécie possui especificidade com cães domésticos e a segunda com bovinos. Para o cão, R. sanguineus s.l. é o principal vetor de agentes causadores da babesiose canina e da erliquiose, enquanto que nos bovinos, R. microplus é responsável, principalmente, pela transmissão de agentes causadores da babesiose e anaplasmose. Alguns dos patógenos causadores dessas doenças são difíceis de serem cultivados in vitro, e não crescem em meios artificiais, especialmente Anaplasma spp. Assim, muitas linhagens celulares de carrapatos foram desenvolvidas nos últimos 40 anos e têm sido amplamente utilizadas para isolamento e propagação de microrganismos patogênicos. Cultivos celulares obtidos de células embrionárias de carrapatos oferecem um sistema de vetor in vitro, que é útil principalmente para estudos de agentes intracelulares. Dessa forma, a obtenção de culturas de células embrionárias de R. sanguineus (origens tropical e temperada) e de R. (B.) microplus, bem como, sua infecção com Ehrlichia canis e Anaplasma marginale, respectivamente, são objetivos do presente estudo. Os cultivos celulares dessas espécies de carrapatos foram preparados com massas de ovos de diferentes idades e mantidos à 30 °C em meio de cultura L15-B, suplementado com 10% de Triptose Fosfato e 20% de Soro Fetal Bovino. Subcultivos foram realizados após a formação da monocamada celular confluente. As identidades celulares foram confirmadas pela PCR e sequenciamento, utilizando um fragmento do gene mitocondrial 16S rDNA. As sequências das culturas de células de R. sanguineus (tropical e temperada) e de R. microplus foram depositadas no GenBank. Essas culturas de células foram infectadas com E. canis e A. marginale (cepas Jaboticabal), respectivamente, e mantidas em meio L-15B (Vitrocell) suplementado com Soro Fetal Bovino enriquecido com ferro (Hyclone) nas concentrações de 2% e 5%. As células infectadas foram mantidas em propagações sucessivas até a terceira passagem, para novas culturas de células não infectadas, sendo então criopreservadas. O DNA extraído das células infectadas e não infectadas de R. sanguineus (de ambas as origens) e de R. microplus, foi analisado pela PCR quantitativa em tempo real (qPCR), utilizando os genes E. canis-dsb e msp1β, respectivamente. Propagações de células de carrapatos infectadas para as novas culturas de R. sanguineus (origem tropical) e R. (B) microplus, foram bem sucedidas. Por outro lado, as células de R. sanguineus (origem temperada) não se tornaram infectadas no presente estudo.In Brazil, ticks of the genus Rhipicephalus are represented by the species Rhipicephalus sanguineus s.l. (Latreille) and Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini), being that the first one has specificity with domestic dogs and the second with cattle. For dogs, R. sanguineus s.l. is the main vector of causative agents of canine babesiosis and ehrlichiosis, whereas in cattle, R. microplus is responsible, mainly, for the transmission of agents that cause babesiosis and anaplasmosis. Some of the pathogens that cause these diseases are difficult to grow in vitro, and do not grow on artificial media, especially Anaplasma spp. Therefore, many tick cell lines were developed in the last 40 years and have been used for the isolation and propagation of pathogenic microorganisms. Cell cultures obtained from embryonic tick cells offer an in vitro vector system, which is mainly useful for studies of intracellular agents. The aim of the present study was to obtain cultures of R. sanguineus (tropical and temperate lineages) and R. microplus embryonic cells and their infection with Ehrlichia canis and Anaplasma marginale. Cell cultures from the tick species were prepared with egg masses of different ages and kept at 30 ° C in L15-B culture medium supplemented with 10% Tryptose Broth and 20% Fetal Bovine Serum. Subcultures were done after confluent cell monolayer formation. Cellular identities were confirmed by PCR and sequencing using a 16S rDNA mitochondrial gene fragment. Sequences of R. sanguineus (tropical and temperate) and R. microplus cell cultures were deposited on GenBank. These cell cultures were infected with E. canis and A. marginale (Jaboticabal strains), respectively, and maintained in L-15B medium and Fetal Bovine Serum with iron (Hyclone) supplemented at 2% and 5% concentrations. The infected cells were maintained in successive propagations until the third passage, to new cultures of uninfected cells, and then were cryopreserved. DNA extracted from infected and uninfected R. sanguineus (both origin) and R. microplus cells was analyzed by quantitative real-time PCR (qPCR) using the E. canis-dsb and msp1β genes, respectively. Propagations of infected tick cells to the new cultures of R. sanguineus (tropical origin) and R. microplus, were successful. On the other hand, the R. sanguineus cells (temperate origin) did become infected in the present study

Unraveling molecular characteristic of fluoride neurotoxicity on U87 glial-like cells: insights from transcriptomic and proteomic approach

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) from Brazilian Ministry of Science, Technology, Innovation and Communications.Federal University of Pará. Institute of Biological Sciences. Laboratory of Functional and Structural Biology. Belém, PA, Brazil / Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Laboratório de Cultura Celular e Citogenética. Ananindeua, PA, Brasil.Federal University of Pará. Institute of Biological Sciences. Laboratory of Functional and Structural Biology. Belém, PA, Brazil.Federal University of Pará. Institute of Biological Sciences. Laboratory of Functional and Structural Biology. Belém, PA, Brazil.National Council for Scientific and Technological Development. National Institute of Science and Technology in Stem Cell and Cell Therapy. Center for Cell-Based Therapy. Ribeirão Preto, SP, Brazil / Fundação de Amparo á Pesquisa do Estado de São Paulo. Centro de Pesquisa, Inovação e Desenvolvimento. Ribeirão Preto, SP, Brazil.University of São Paulo. Bauru School of Dentistry. Department of Biological Sciences. Bauru, SP, Brazil.University of São Paulo. Bauru School of Dentistry. Department of Biological Sciences. Bauru, SP, Brazil.Federal University of Pará. Institute of Biological Sciences. Laboratory of Neurophysiology Eduardo Oswaldo Cruz. Belém, PA, Brazil.Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde e Ambiente. Instituto Evandro Chagas. Laboratório de Cultura Celular e Citogenética. Ananindeua, PA, Brasil.Federal University of Pará. Institute of Biological Sciences. Laboratory of Functional and Structural Biology. Belém, PA, Brazil.The potential of fluoride (F) as a neurotoxicant in humans is still controversial in the literature. However, recent studies have raised the debate by showing different mechanism of F-induced neurotoxicity, as oxidative stress, energy metabolism and inflammation in the central nervous system (CNS). In the present study, we investigated the mechanistic action of two F concentration (0.095 and 0.22 µg/ml) on gene and protein profile network using a human glial cell in vitro model over 10 days of exposure. A total of 823 genes and 2,084 genes were modulated after exposure to 0.095 and 0.22 µg/ml F, respectively. Among them, 168 were found to be modulated by both concentrations. The number of changes in protein expression induced by F were 20 and 10, respectively. Gene ontology annotations showed that the main terms were related to cellular metabolism, protein modification and cell death regulation pathways, such as the MAP kinase (MAPK) cascade, in a concentration independent manner. Proteomics confirmed the changes in energy metabolism and also provided evidence of F-induced changes in cytoskeleton components of glial cells. Our results not only reveal that F has the potential to modulate gene and protein profiles in human U87 glial-like cells overexposed to F, but also identify a possible role of this ion in cytoskeleton disorganization

Molecular Survey of Hemotropic <i>Mycoplasma</i> spp. and <i>Bartonella</i> spp. in Coatis (<i>Nasua nasua</i>) from Central-Western Brazil

Even though previous works showed molecular evidence of hemotropic Mycoplasma spp. (hemoplasmas) in ring-tailed coatis (Nasua nasua) from Brazil, Bartonella sp. has not been reported in these mammals so far. The present study aimed to detect the above-mentioned agents in coatis’ blood and associated ectoparasites, assessing the association between these infections and red blood parameters. Between March 2018 and January 2019, coati (n = 97) blood samples, Amblyomma sp. ticks (2242 individual ticks, resulting in 265 pools), and Neotrichodectes pallidus louse (n = 59) were collected in forested urban areas from midwestern Brazil. DNA extracted from coatis’ blood, and ectoparasite samples were submitted to quantitative PCR (qPCR) (16S rRNA) and conventional PCR (cPCR) (16S rRNA and 23S rRNA) for hemoplasmas and qPCR (nuoG gene) and culturing (only blood) for Bartonella spp. Two different hemoplasma genotypes were detected in blood samples: 71% coatis positive for myc1 and 17% positive for myc2. While 10% of ticks were positive for hemoplasmas (myc1), no louse was positive. The estimated bacterial load of hemoplasmas showed no association with anemia indicators. All coatis were negative for Bartonella sp. in qPCR assay and culturing, albeit two Amblyomma sp. larvae pools, and 2 A. dubitatum nymph pools were positive in the qPCR. The present work showed a high occurrence of hemoplasmas, with two distinct hemoplasma genotypes, in coatis from forested urban areas in midwestern Brazil