Expression of a splice variant of the platelet-activating factor receptor transcript 2 in various human cancer cell lines.

Platelet-activating factor receptor (PAF-R) transcripts were analysed by reverse transcriptase-polymerase chain reaction in five human cancer cell lines derived from the breast (BT20, SKBR3 and T47D cells), the pancreas (Miapaca cells) and the bladder (5,637 cells) in order to confirm the existence of a splice variant of the PAF-R transcript 2. After cloning and sequencing, we confirmed its existence in all cell lines. It consisted of the PAF-R transcript 2 lengthening with 82 nucleotides from the 3' end of exon 1 of the PAF-R gene. The role of this elongated form of the tissue-type PAF-R transcript in cell physiology remains to be elucidated

No evidence for a putative involvement of platelet-activating factor in systemic lupus erythematosus without active nephritis.

BACKGROUND: Platelet-activating factor (PAF) seems to be implicated in systemic lupus erythematosus (SLE) patients with associated renal diseases. AIMS: In this study, we ensured the role of PAF in SLE patients without renal complications. METHODS: Blood PAF and acetylhydrolase activity, plasma soluble phospholipase A(2), and the presence of antibodies against PAF were investigated in 17 SLE patients without active nephritis and in 17 healthy controls. RESULTS: Blood PAF levels were not different (p=0.45) between SLE patients (6.7+/-2.8 pg/ml) and healthy subjects (9.6+/-3.1 pg/ml). Plasma acetylhydrolase activity (the PAF-degrading enzyme) was significantly (p=0.03) elevated in SLE patients (57.8+/-6.4 nmol/min/ml) as compared with controls (37.9+/-2.6 nmol/min/ml). Plasma soluble phospholipase A(2) (the key enzyme for PAF formation) was not different (p=0.6) between SLE patients (59.1+/-5.1 U/ml) and controls (54.7+/-2.4 U/ml). Antibodies against PAF were detected only in 3/17 SLE patients. Flow cytometry analysis did not highlight PAF receptors on circulating leukocytes of SLE patients. CONCLUSION: This clinical study highlights no evidence for a putative important role of PAF in SLE patients without active nephritis

The 5′HS4 insulator element is an efficient tool to analyse the transient expression of an Eμ-GFP vector in a transgenic mouse model

Letter to the Edito

The Long-Baseline Neutrino Experiment: Exploring Fundamental Symmetries of the Universe

The preponderance of matter over antimatter in the early Universe, the dynamics of the supernova bursts that produced the heavy elements necessary for life and whether protons eventually decay --- these mysteries at the forefront of particle physics and astrophysics are key to understanding the early evolution of our Universe, its current state and its eventual fate. The Long-Baseline Neutrino Experiment (LBNE) represents an extensively developed plan for a world-class experiment dedicated to addressing these questions. LBNE is conceived around three central components: (1) a new, high-intensity neutrino source generated from a megawatt-class proton accelerator at Fermi National Accelerator Laboratory, (2) a near neutrino detector just downstream of the source, and (3) a massive liquid argon time-projection chamber deployed as a far detector deep underground at the Sanford Underground Research Facility. This facility, located at the site of the former Homestake Mine in Lead, South Dakota, is approximately 1,300 km from the neutrino source at Fermilab -- a distance (baseline) that delivers optimal sensitivity to neutrino charge-parity symmetry violation and mass ordering effects. This ambitious yet cost-effective design incorporates scalability and flexibility and can accommodate a variety of upgrades and contributions. With its exceptional combination of experimental configuration, technical capabilities, and potential for transformative discoveries, LBNE promises to be a vital facility for the field of particle physics worldwide, providing physicists from around the globe with opportunities to collaborate in a twenty to thirty year program of exciting science. In this document we provide a comprehensive overview of LBNE's scientific objectives, its place in the landscape of neutrino physics worldwide, the technologies it will incorporate and the capabilities it will possess.Comment: Major update of previous version. This is the reference document for LBNE science program and current status. Chapters 1, 3, and 9 provide a comprehensive overview of LBNE's scientific objectives, its place in the landscape of neutrino physics worldwide, the technologies it will incorporate and the capabilities it will possess. 288 pages, 116 figure

Modèles "in vivo" pour l'étude de la régulation transcriptionnelle par les activateurs du locus IgH

L'étude de la régulation transcriptionnelle du locus des chaînes lourdes des immunoglobulines (IgH) est rendue particulièrement complexe par l'existence d'éléments cis-régulateurs multiples situés non seulement en 5' mais également en 3' du locus. Chez la souris, la région 3' comporte quatre activateurs transcriptionnels (hs3a, hs1,2, hs3b, hs4) dont l'association constitue une "Région de Contrôle du Locus" (LCR). In vitro, ils se comportent comme de puissants co-activateurs de l'élément intronique Em, situé en 5' du locus.Dans une première étude, nous avons montré qu'in vitro la région 3'IgH se comporte comme une LCR "partielle" ne permettant pas un niveau d'expression d'un transgène associé dépendant du nombre de copies intégrées dans des lignées cellulaires B de souris. Nous avons alors testé la possibilité de recourir à des isolateurs, éléments régulateurs de la transcription ayant pour propriété de protéger un gène de signaux inappropriés émanant des séquences alentours, ainsi que des effets répressifs de la chromatine adjacente. Ainsi, nous avons flanqué nos vecteurs d'expression d'un isolateur du locus de la b-globine de poulet : l'expression des différents vecteurs étudiés devient alors dépendante du nombre de copies intégrées permettant alors à la région 3' IgH de se comporter comme une LCR totale. Les isolateurs semblent ainsi être des outils intéressants pour l'étude de transgènes intégrés de façon aléatoire dans le génome.Parallèlement, nous avons développé des modèles de souris transgéniques afin d'étudier in vivo la contribution des régions régulatrices 5' et 3' dans la modulation de l'expression du locus IgH au cours de la lymphopoïèse B. Les transgènes associent le gène rapporteur GFP soit à Eæ, soit à la LCR, ou bien à l'association de ces deux régions régulatrices. Nos résultats montrent que, seuls, la LCR ou Eæ ne permettent pas une expression du gène rapporteur GFP. En revanche, leur association entraîne une activation de la transcription, confirmant ainsi que les régions 5' et 3' IgH agissent en synergie afin d'obtenir une activité transcriptionnelle maximale. Les souris Eæ-GFP-LCR présentent une expression du transgène spécifique dans la lignée lymphocytaire B. Cette expression débute à un stade très précoce de la différenciation B puisque des cellules fluorescentes (GFP+) pro-B sont détectées, et elle se poursuit tout au long du développement jusqu'au stade de cellules B matures. Pour éviter le phénomène d'inactivation, le vecteur GFP-LCR a été flanqué de l'isolateur de poulet. L'expression du transgène a alors pu être observée au sein de la lignée B, ne débutant qu'au stade pré-B et se prolongeant au stade B mature.LIMOGES-BU Sciences (870852109) / SudocSudocFranceF

Selection for intrabody solubility in mammalian cells using GFP fusions

International audienceEctopically expressed intracellular recombinant antibodies, or intrabodies, are powerful tools to visualize proteins and study their function in fixed or living cells. However, many intrabodies are insoluble and aggregate in the reducing environment of the cytosol. To solve this problem, we describe an approach based on GFP-tagged intrabodies. In this protocol, the GFP is used both as a folding-reporter to select correctly folded intrabodies and as a fluorescent tag to localize the scFv and its associated antigen in eukaryotic cells. Starting from a scFv gene cloned in a retroviral vector, we describe retrovirus production, cell line transduction, and soluble intrabody characterization by microscopy and FACS analysis