Standardization of molecular monitoring for chronic myeloid leukemia in Latin America using locally produced secondary cellular calibrators

Residual disease in chronic myeloid leukemia (CML) patients undergoing therapy with tyrosine kinase inhibitors (TKIs) is measured by assessing the quantity of transcripts of the BCR-ABL1 fusion gene in peripheral white blood cells. This analysis is based on reverse-transcription quantitative PCR (RT–qPCR) technology; however, the wide array of methods used worldwide has led to large variation in quantitative BCR-ABL1 measurements, which hamper inter-laboratory comparative studiesFil: Ruiz, María Sol. Fundación Cáncer. Centro de Investigaciones Oncológicas; ArgentinaFil: Medina, M.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Tapia, I.. Fundación Cáncer. Centro de Investigaciones Oncológicas; ArgentinaFil: Mordoh, Jose. Fundación Cáncer. Centro de Investigaciones Oncológicas; ArgentinaFil: Cross, N. C. P.. Universidad de Southampton Uk; Reino UnidoFil: Larripa, Irene Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Bianchini, Michele. Fundación Cáncer. Centro de Investigaciones Oncológicas; Argentin

An unusual translocation, t(1;11)(q21;q23), in a case of chronic myeloid leukemia with a cryptic Philadelphia chromosome

Chronic myeloid leukemia is characterized by the translocation t(9;22)(q34;q11) (Philadelphia chromosome). Although it is not frequent, additional chromosome abnormalities can be detected at diagnosis and some of them have been associated with adverse cytogenetic and molecular outcome. We report a case of Chronic myeloid leukemia presenting the translocation t(1;11)(q21;q23) and a cryptic Philadelphia chromosome. The presence of additional chromosome abnormalities could generate greater genetic instability, promoting the emergence of further alterations. Our findings suggest that t(1;11)(q21;q23) avoided good response to tyrosine kinase inhibitors therapy. The patient evolves with primary resistance and subsequently at the recent control the T315I mutation was detected.Fil: Gutierrez, Leandro German. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Noriega, Maria Fernanda. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; ArgentinaFil: Laudicina, Alejandro. Lexel SRL; ArgentinaFil: Quatrin, Mariana. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital de Niños "Sor María Ludovica" de la Plata; ArgentinaFil: Bengió, Raquel María. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; ArgentinaFil: Larripa, Irene Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentin

Are int22h-mediated deletions a common cause of hemophilia?

Hemophilia A (HA) (OMIM 306700) is an X-linked inherited bleeding disorder caused by deleterious mutations in the coagulation factor VIII gene (F8). Even though there is a broad diversity of HA-causative mutations, an uncommon type of rearrangement—a large DNA inversion involving F8 intron 22 (Inv22)—accounts for approximately one half of severely affected patients. Inv22 was formerly described by Lakich et al. [1] and Naylor et al. [2]. A collaborative international effort estimated that Inv22 is the cause of 43% (35%, 7%, and 1% for Inv22 type I, type II, and rare types, respectively) of severe HA cases worldwide with minor geographical or ethnical differences [3], in close agreement with our corresponding Argentinean series (42% of Inv22, and 34% and 7% for type I and type II, respectively) [4]. Naylor et al. [5] indicated that Inv22 originates by homologous recombination between well-defined duplicons (int22h) of 9.5 kb located one copy within F8 intron 22 (int22h-1, h1) and the other, inversely oriented, from a group of two extragenic copies (int22h-3, h3 for Inv22 type I and int22h-2, h2 for type II). It was formerly believed that h2 and h3 were equally oriented (i.e., head to tail). However, Ross et al. [6] determined that h2 and h3 are inversely oriented (i.e., head to head), both embedded in the arms of a large imperfect palindrome (Fig. 1). This finding prompted Bagnall et al. [7] to hypothesize recombination between these arms interchanging the location of the extragenic int22h copies and generating a non-deleterious inversion polymorphism in Xq28, i.e., h123 and h132. In this scenario, Inv22 type I may be generated from intrachromosomal recombination between h1 and h3 on the most frequent variant h123 whereas Inv22 type II may be generated between h1 and h2 on the least frequent h132 (Fig. 1). Moreover, on each of these normal structural variants of the X chromosome, recombination between h1 with either equally oriented copies (h2 or h3) may generate deletions (Del22) or duplications (Dup22) but not inversions [7]. More precisely, Del22 type I would be generated by recombination between h1 and h3 on variant h132 whereas Del22 type II by recombination between h1 and h2 on variant h123 [8] (Fig. 1).Fil: Abelleyro, Miguel Martin. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Rossetti, Liliana Carmen. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Radic, Claudia Pamela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; ArgentinaFil: Candela, Miguel. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; ArgentinaFil: Larripa, Irene Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; ArgentinaFil: de Brasi, Carlos Daniel. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Estudios citogenéticos y mecanismos moleculares en los Síndromes Mielodisplásicos

Las alteraciones genéticas debidas a mutaciones, hallazgos cromosómicos balanceados o no, disomía uniparental adquirida, haploinsuficiencia y los fenómenos epigenéticos estarían involucrados al inicio y en la progresión de los SMD. Entre los genes implicados se encuentran el NRAS, FLT3, TP53, RUNX1, p15INK4b, TET2, ASXL1 y RPS14. Un 30-59% de pacientes con SMD de novo presentan cariotipos alterados y este porcentaje se incrementa según el riego de los subtipos FAB o WHO. Las aberraciones citogenéticas más frecuentes son: -5/del(5q) [2%-11%], -7/del (7q) [2%-5%], +8 [3%-12%], del(20q) [2%-4%], –Y [2%-4%] y cariotipos complejos (≥3 alteraciones) [10-20%]. Un 60-90% de los SMD secundarios presentan cariotipos anormales, un aumento de translocaciones y de cariotipos complejos [50%]. Las alteraciones en los cromosomas 5/7 [80%] se asocian con exposición a agentes alquilantes y los rearreglos 11q23 o 21q22 con exposición a inhibidores de topoisomerasa II. El cariotipo ayuda en el diagnóstico, pronóstico, tratamiento y seguimiento de los pacientes. La categorización del riesgo citogenético del IPSS ha sido comprobada aplicando las clasificaciones FAB y WHO, y validada en el WPSS. Aunque el grupo Intermedio es heterogéneo, el Consenso Internacional en Citogenética de los SMD sugiere la continuidad de su utilización hasta que se realice un nuevo estudio multicéntrico.Fil: Belli, Carolina Bárbara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex". Departamento de Genética; ArgentinaFil: Benasayag, Silvia. Fundagen; ArgentinaFil: Gallino, María Inés. Fundagen; ArgentinaFil: Correa, Walter A. Fundagen; ArgentinaFil: Larripa, Irene Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex". Departamento de Genética; Argentin

Improved Diagnosis of the Transition to JAK2V617F Homozygosity: The Key Feature for Predicting the Evolution of Myeloproliferative Neoplasms

Most cases of BCR-ABL1-negative myeloproliferative neoplasms (MPNs), essential thrombocythemia, polycythemia vera and primary myelofibrosis are associated with JAK2V617F mutations. The outcomes of these cases are critically influenced by the transition from JAK2V617F heterozygosity to homozygosity. Therefore, a technique providing an unbiased assessment of the critical allele burden, 50% JAK2V617F, is highly desirable. In this study, we present an approach to assess the JAK2V617F burden from genomic DNA (gDNA) and complementary DNA (cDNA) using one-plus-one template references for allele-specific quantitative-real-time-PCR (qPCR). Plasmidic gDNA and cDNA constructs encompassing one PCR template for JAK2V617F spaced from one template for JAK2Wild Type were constructed by multiple fusion PCR amplifications. Repeated assessments of the 50% JAK2V617F burden within the dynamic range of serial dilutions of gDNA and cDNA constructs resulted in 52.5364.2% and 51.4664.21%, respectively. The mutation-positive cutoff was estimated to be 3.65% (mean +2 standard deviation) using 20 samples from a healthy population. This qPCR approach was compared with the qualitative ARMS-PCR technique and with two standard methods based on qPCR, and highly significant correlations were obtained in all cases. qPCR assays were performed on paired gDNA/cDNA samples from 20 MPN patients, and the JAK2V617F expression showed a significant correlation with the allele burden. Our data demonstrate that the qPCR method using one-plus-one template references provides an improved assessment of the clinically relevant transition of JAK2V617F from heterozygosity to homozygosity.Fil: Gonzalez, Mariana Selena. Consejo Nacional de Invest.cientif.y Tecnicas. Instituto de Medicina Experimental;Fil: de Brasi, Carlos Daniel. Consejo Nacional de Invest.cientif.y Tecnicas. Instituto de Medicina Experimental;Fil: Bianchini, Michele. DTO. DE GENETICA;Fil: Gargallo, Patricia Martha. INST. DE INVEST. HEMATOLOGICAS;Fil: Stanganelli, Carmen Graciela. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Invest. Hematologicas "mariano R. Castex";Fil: Zalcberg, Ilana. Molecular Biology, Laboratory, Instituto Nacional do Caˆncer, Rio de Janeiro, Brazil;Fil: Larripa, Irene Beatriz. Consejo Nacional de Invest.cientif.y Tecnicas. Instituto de Medicina Experimental

Estudios citogenéticos y mecanismos moleculares en los Síndromes Mielodisplásicos

Las alteraciones genéticas debidas a mutaciones, hallazgos cromosómicos balanceados o no, disomía uniparental adquirida, haploinsuficiencia y los fenómenos epigenéticos estarían involucrados al inicio y en la progresión de los SMD. Entre los genes implicados se encuentran el NRAS, FLT3, TP53, RUNX1, p15INK4b, TET2, ASXL1 y RPS14. Un 30-59% de pacientes con SMD de novo presentan cariotipos alterados y este porcentaje se incrementa según el riego de los subtipos FAB o WHO. Las aberraciones citogenéticas más frecuentes son: -5/del(5q) [2%-11%], -7/del (7q) [2%-5%], +8 [3%-12%], del(20q) [2%-4%], –Y [2%-4%] y cariotipos complejos (≥3 alteraciones) [10-20%]. Un 60-90% de los SMD secundarios presentan cariotipos anormales, un aumento de translocaciones y de cariotipos complejos [50%]. Las alteraciones en los cromosomas 5/7 [80%] se asocian con exposición a agentes alquilantes y los rearreglos 11q23 o 21q22 con exposición a inhibidores de topoisomerasa II. El cariotipo ayuda en el diagnóstico, pronóstico, tratamiento y seguimiento de los pacientes. La categorización del riesgo citogenético del IPSS ha sido comprobada aplicando las clasificaciones FAB y WHO, y validada en el WPSS. Aunque el grupo Intermedio es heterogéneo, el Consenso Internacional en Citogenética de los SMD sugiere la continuidad de su utilización hasta que se realice un nuevo estudio multicéntrico.Fil: Belli, Carolina Bárbara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex". Departamento de Genética; ArgentinaFil: Benasayag, Silvia. Fundagen; ArgentinaFil: Gallino, María Inés. Fundagen; ArgentinaFil: Correa, Walter A. Fundagen; ArgentinaFil: Larripa, Irene Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex". Departamento de Genética; Argentin

Clinical outcome of chronic myeloid leukemia imatinib-resistant patients: Do BCRABL kinase domain mutations affect patient survival? First multicenter Argentinean study

In imatinib-treated patients with chronic myeloid leukemia (CML), BCRABL mutations are the most common mechanism of resistance. Here we report the first multicenter Argentinean study investigating mutations in those patients with CML who fail or lose response to imatinib, with or without previous interferon treatment. Point mutations were detected in 36 of 154 patients by direct sequencing. In our series, the single most common mutations were G250E, E255K/V, and M351T. The presence of mutations correlated significantly with accelerated phase, lack of molecular response, and lower cytogenetic and hematological responses. While overall survival did not differ between patients with or without mutations, the probability of progression was higher in patients with mutations. Cases with non-P-loop mutations showed a significantly better overall survival from diagnosis. Multivariate analysis showed that the most significant variables related to the development of mutations were accelerated phase, duration of imatinib treatment, and time delay to starting imatinib. Our results demonstrated that mutation frequency increased with the progression of disease, and suggest that imatinib treatment should be started early.Fil: Bengió, Raquel M.. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Riva, Maria E.. Hospital San Mart́n; ArgentinaFil: Moiraghi, Beatriz. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos "Ramos Mejía"; ArgentinaFil: Lanari, Emilio. Hospital Jose Ramon Vidal ; Gobierno de la Provincia de Corrientes;Fil: Milone, Jorge. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Ventriglia, Veronica. Hospital Nacional Profesor Alejandro Posadas; ArgentinaFil: Bullorsky, Eduardo. Hospital Británico de Buenos Aires; ArgentinaFil: de Tezanos Pinto, Miguel. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; ArgentinaFil: Murro, Hector. No especifíca;Fil: Bianchini, Michele. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Larripa, Irene Beatriz. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Evaluation of the primitive fraction by functional in vitro assays at the RNA and DNA level represents a novel tool for complementing molecular monitoring in chronic myeloid leukemia

Quantification of BCR-ABL1 mRNA levels in peripheral blood of chronic myeloidleukemia patients is a strong indicator of response to tyrosine-kinase inhibitors (TKI)treatment. However, additional prognostic markers are needed in order to better classify patients. The hypothesis of leukemic stem cells (LSCs) heterogeneity and persistence, suggests that their functional evaluation could be of clinical interest. In this work, we assessed the primitive and progenitor fractions in patients at diagnosis and during TKI treatment using functional in vitro assays, defining a ?functional leukemic burden? (FLB). We observed that the FLB was reduced in vivo in both fractions upon treatment. However, different FLB levels were observed among patients according to their response to treatment, suggesting that quantification of the FLB could complement early molecular monitoring. Given that FLB assessment is limited by BCR-ABL1 mRNA expression levels, we developed a novel detection method of primitive cells at the DNA level, using patient-specific primers and direct nested PCR in colonies obtained from functional in vitro assays. We believe that this methodcould be useful in the context of discontinuation trials, given that it is unknown whether the persistent leukemic clone represents LSCs, able to resume the leukemia upon TKI removal.Fil: Ruiz, María Sol. Fundación Cáncer. Centro de Investigaciones Oncológicas; ArgentinaFil: Sanchez, María Belén. Fundación Cáncer. Centro de Investigaciones Oncológicas; Argentina. Argenomics; ArgentinaFil: Gutierrez, Leandro German. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentina. Instituto Alexander Fleming, Bs. As.; ArgentinaFil: Koile, Daniel Isaac. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Yankilevich, Patricio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Mosqueira, Celeste. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos "Ramos Mejía"; ArgentinaFil: Cranco, Santiago. Fundaleu; ArgentinaFil: Custidiano, María del Rosario. Hospital Italiano de La Plata; ArgentinaFil: Freitas, Josefina. Provincia de Buenos Aires. Hospital Nacional Profesor A. Posadas; ArgentinaFil: Foncuberta, Cecilia. Instituto Alexander Fleming; ArgentinaFil: Moiraghi, Beatriz. Fundación Cáncer. Centro de Investigaciones Oncológicas; ArgentinaFil: Pavlovsky, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Pérez, Mariel Ana. Fundación Cáncer. Centro de Investigaciones Oncológicas; ArgentinaFil: Ventriglia, Verónica. Provincia de Buenos Aires. Hospital Nacional Profesor A. Posadas; Argentina; ArgentinaFil: Sánchez Ávalos, Julio César Américo. Instituto Alexander Fleming; ArgentinaFil: Mordoh, Jose. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Fundación Cáncer. Centro de Investigaciones Oncológicas; ArgentinaFil: Larripa, Irene Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Bianchini, Michele. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Fundación Cáncer. Centro de Investigaciones Oncológicas; Argentin

Detection of leukemic stem cell (CD26+) in patients with chronic myeloid leukemia with different molecular response

La leucemia mieloide crónica (LMC) se caracteriza por la t(9;22)(q34;q11), generando el gen de fusión BCR-ABL1 que codifica la oncoproteina P210 con actividad constitutiva de tirosina kinasa. Los pa-cientes que presentan una profunda y sostenida res-puesta molecular a los inhibidores de tirosina kinasa (ITK) pueden interrumpir el tratamiento. Sin em-bargo, aproximadamente el 50% de los casos presen-tan recurrencia molecular, probablemente debido a la persistencia de la stem cell leucémica (SCL) quies-cente (no replicativa, transcripcionalmente silente). Recientes publicaciones han demostrado que la ex-presión de la enzima dipeptidil peptidasa IV (CD26) está restringida a la fracción CD45+/CD34+/CD38- de la SCL en LMC y no se ha detectado en otras SCL mieloides/linfoides ni en medula ósea normal. Por esta razón CD26 es considerado un nuevo y especí-fico bio-marcador de LMC.El objetivo del trabajo fue detectar las SCL CD26+ en pacientes con LMC con diferente respuesta molecular (RM) y determinar si estas células persisten aun en casos con respuesta molecular profunda (RMP).Se analizaron 193 muestras de pacientes con LMC (107 sexo masculino y 86 femenino) para evaluar la SCL mediante citometría de flujo usando el panel de anticuerpos monoclonales: CD45, CD34, CD38, CD26, CD117, CD123, CD3 y HLA-DR. En para-lelo se realizó el estudio de la respuesta molecular mediante qRT-PCR BCR-ABL1 (Método Taqman). Ambos estudios se realizaron en simultáneo en la misma muestra, durante el seguimiento en diferen-tes momentos bajo tratamiento con ITK (imatinib, nilotinib o dasatinib). Los pacientes con una reducción de BCR-ABL1 ≥ a 3 log tenían una significativa menor proporción de casos con SCL CD26+ comparado con aquellos que tenían <3 log de reducción de los transcriptos (p<0.0003, OR: 3.4, 95% CI: 1,7 - 6,8). Consideran-do los 76 casos con RMP (33 RM4.0; 38 RM4.5 y 5 RM5.0), solamente 12/76 (16%) mostraron per-sistencia de la SCL CD26+. La presencia de la SCL CD26+ se redujo acorde aumenta la profundidad de la RM: 21%, 13% y 0% en RM4.0, RM4.5 y RM5.0 respectivamente. Nuestros resultados muestran que los pacientes con buena RM (≥3log), se asociaron con baja propor-ción de casos con SCL CD26+. Cuando la detección de SCL se evaluó exclusivamente en los casos con RMP, se observó que el decrecimiento de la SCL se asoció a mayor profundidad de la RM. La stem cell leucémica es altamente quiescente por lo cual podría estar presente aun en casos con respuesta molecular indetectable. En nuestro estudio la persistencia de SCL fue del 16% en casos con respuesta molecular profunda, indicando que la SCL persiste a pesar de la RM alcanzada. Este nuevo abordaje investigando la SCL podría ser útil en el seguimiento a largo plazo y de gran importancia en la evaluación de la recu-rrencia molecular en los casos incluidos en protoco-los de discontinuación.Chronic Myeloid Leukemia (CML) is characterized by the reciprocal translocation t(9;22)(q34;q21) resulting in the BCR-ABL1 fusion gene encoding the P210 oncoprotein with a constitutive tyrosine kinase (TK) activity. It is known that patients with at least two years in deep and sustained molecular response could stop TK inhibitor (TKI) treatment. However, half of them show molecular recurrence, probably due to the persistence of transcriptionally quiescent leukemic stem cells (LSC). Recent studies show that the expression of the enzyme dipeptidylpeptidase IV (CD26) is mainly restricted to the CD45+/CD34+/ CD38- fraction in CML LSC, and it is not found in other myeloid/lymphoid LSC or in normal bone marrow. For this reason, CD26 is considered a novel specific biomarker in CML. The aim of this study was to detect the CD26+ LSC in CML patients with different molecular responses (MR) and to assess if these cells remain even in deep molecular response (DMR). We have evaluated 193 CML patients (107 males and 86 females) for detection of LSC by flow cytometry using the panel: CD45, CD34, CD38, CD26, CD117, CD123, CD3 and HLA-DR and the BCR-ABL1 quantification by qRT-PCR (Taqman method). Both studies were carried out simultaneously on the same sample, during the follow up at different time points under TKI treatment (Imatinib, Nilotinib, Dasatinib). Patients with ≥ 3 BCR-ABL1 log reduction had a significantly lower percentage of cases with CD26+ LSC compared with those who had < 3 log reduction (p<0.0003, OR: 3.4, 95% CI: 1,7 - 6,8). Out of the 76 patients with DMR (33 in MR4.0, 38 in MR4.5 and 5 in MR5.0) only 12/76 (16%) showed persistence of CD26+ LSC. Furthermore, the presence of CD26+ LSC decreased accordingly to the achieved DMR: 21%, 13% and 0% in MR4.0, MR4.5 and MR5.0 respectively, without significant differences. Our results show that patients with good MR (≥3log) were significantly associated with a lower proportion of cases with LSC presence. When the LSC analysis was performed exclusively in cases with DMR, we observed that the decrease of LSC accompanied the deepness of the molecular response. Since the LSC is highly quiescent, it could be present even in cases with undetectable MR. In our study persistence of LSC in cases with DMR was 16%, indicating that these cells remain despite the MR achieved. This new approach to the study of the LSC could be useful in long-term follow-up and of great importance in the evaluation of molecular recurrence in cases included in discontinuation protocols.Fil: Bengio, R. M.. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; ArgentinaFil: Peña, M.. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; ArgentinaFil: Palacios, F.. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; ArgentinaFil: Moiraghi, B.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos "Ramos Mejía"; ArgentinaFil: Negri Aranguren, P.. Instituto Privado de Hematologia y Hemoterapia; ArgentinaFil: Enrico, A.. Hospital Italiano de La Plata; ArgentinaFil: Mariano, R.. Provincia de Entre Rios. Hospital San Martin; ArgentinaFil: Toloza, Maria Jazmin Ayelen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Larripa, Irene Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentin

Application of the revised International Prognostic Scoring System (IPSS-R) for Myelodysplastic Syndromes (MDS) in 511 Argentinean patients

El Índice Pronóstico Internacional, el “gold standard” de los sistemas disponibles para predecir el comportamiento de los pacientes con SMD, ha sido recientemente revisado (IPSS-R). Nuestro objetivo fue aplicar el IPSS-R en pacientes de población Argentina debido a su factible utilización en la práctica diaria. Se analizó una serie de 511 pacientes (290 pertenecientes al Registro Argentino de Enfermedades Hematológicas) con SMD de novo (1981-2013), con una edad mediana de 70 años y una relación de sexos M/F de 1,3. Durante el seguimiento (mediana de sobrevida: 44 meses), 22% de los pacientes presentaron progresión leucémica y 43% fallecieron. La descripción demográfica, la distribución de los parámetros clínicos, citogenéticos y grupos de riesgo según el IPSS, y los respectivos tiempos de sobrevida y de progresión leucémica, obtenidos en nuestra serie fueron similares a los descriptos en el trabajo original. Los pacientes fueron clasificados según el IPSS-R en: 104 (20%) Muy Bajo, 209 (41%) Bajo, 75 (15%) Intermedio, 71 (14%) Alto y 52 (10%) Muy Alto, con una sobrevida (50%) de 125, 62, 34, 19 y 13 meses (p<0,001) y tiempo de progresión leucémica (25%) de 125, 124, 23, 6 y 5 meses (p<0,001), respectivamente. Los pacientes categorizados según el IPSS fueron re-distribuidos en las categorías definidas por el IPSS-R (Kendall’s tau= 0,702) mostrando que el grupo de riesgo Intermedio-1 representa el 83% (62/75) del riesgo Intermedio y el 24% (17/71) del riesgo Alto. La edad y el sexo mostraron diferencias significativas para predecir sobrevida en los grupos de menor riesgo. La aplicación del IPSS-R ajustado por edad permitió individualizar un 18% de pacientes de riesgo Bajo con una sobrevida significativamente menor (23 meses, p<0,001). El IPSS-R resultó simple de aplicar debido a que incluye variables accesibles mostrando una buena reproducibilidad en la diferenciación de grupos de riesgo en nuestra población.The International Prognostic Scoring System, the gold standard for risk assessment in MDS, has been recently revised (IPSS-R). The aim of this study was to apply the IPSS-R in Argentinean MDS patients. We retrospectively analyzed a cohort of 511 (290 patients belong to the MDS Registry promoted by the SAH) de novo MDS patients (1981-2013). The median age was 70 (17-92) with a gender ratio of 1.3. During the follow-up (median overall survival: 44 months), 22% evolved to AML and 43% died. The demographic description, obtained percentages, survival times and time to leukemic evolution for our patients regarding cytogenetic, hematological parameters, and IPSS subgroups were similar to the IWG-PM database. Patients were classified by IPSS-R as very-low (20%), low (41%), intermediate (15%), high (14%), and very-high risk (10%), with median survival of 125, 62, 34,19 and 13 months (p<0.001), and time to leukemic evolution (25%) of 125, 124, 23, 6, and 5 months, respectively (p<0.001). The IPSS-R showed effective separation of the IPSS risk categories (Kendall’s tau= 0.702) and the intermediate group was mainly (83%) composed by intermediate-1 IPSS risk patients. Age and gender sowed statistical differences for predicting survival in the very low/ low risk group (p=0.001). The proposed age-adjusted categorization helped us to identify 18% among low risk IPSS-R patients with an inferior median survival (23 months, p<0,001). It can be concluded that the IPSS-R system was simple to use since includes accessible variables showing a good reproducibility and effectiveness in predicting clinical outcome in our series.Fil: Belli, Carolina Bárbara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Bestach, Yesica Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Prates, M. V.. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Sakamoto, F.. Grupo Montecaseros; ArgentinaFil: Alfonso, Guillermo. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Hospital Nacional “Profesor Alejandro Posadas”; ArgentinaFil: Rosenhain, M.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos "Dr. Enrique Tornú"; ArgentinaFil: Narbaitz, M.. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; ArgentinaFil: Gonzalez, J.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos "Carlos G. Durand"; ArgentinaFil: Bengió, R.. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; ArgentinaFil: Larripa, Irene Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentina. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex"; Argentin