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    Hacia la determinacion in situ de aminas biogenas.

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    Las aminas biógenas (AB) son una familia muy amplia de biomoléculas de bajo peso molecular que poseen en su estructura al menos un grupo amino. Realizan múltiples funciones, especialmente neurotransmisoras y hormonales, por lo que el organismo dispone de una ruta para su síntesis a partir de los aminoácidos precursores (descarboxilación con Aminoácido Descarboxilasa, AAAD); sin embargo, su exceso puede provocar problemas de intolerancia o intoxicaciones, por lo que también tiene mecanismos para su regulación (oxidación metabólica con Diamino Oxidasa, (DAO), o la ruta de la Monoaminooxidasa (MAO)..

    METODOS ANALITICOS CON IMÁGENES DIGITALES

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    Se ha desarrollado un método para la determinación de sulfitos mediante la captura de imágenes digitales y lectura de colores RGB reflejados producidos en la reacción cromogénica con nitroprusiato, o reacción de Boedeker. Se estudia la influencia de factores de reacción como: tensoactivos, preparación de micro-partículas reactivas de nitroprusiato-zinc y diferentes aminas. Las aminas estudiadas han sido: la hexametilentetramina que se aplica como reactivo alternativo a la Piridina. Por otra parte aminas como, putrescina, cadaverina e histamina, han demostrado una diferente influencia en la cromaticidad. Así, la histamina favorece significativamente la coloración, mientras que la putrescina y la cadaverina son menos sensibles y más similares entre ellas. Se han evaluado factores instrumentales como: el soporte donde se desarrolla la reacción y el tipo y color de iluminación ‘w-rgb’ de la imagen digital, además de la influencia de la captura de la imagen en un sistema abierto o cerrado con luz parásita controlada. Se caracteriza la varianza cromática y su distribución en los factores fundamentales: analito, cámara y método. Las mejores prestaciones analíticas se consiguen con iluminación blanca, y colores reflejados R- G, lo que reduce el Límite de detección de 6.0 a 3.0 mg/l. Se ha estudiado la aplicación de un método de regresión múltiple, MLR, basado en la lectura de los colores RGB con iluminaciones roja, verde y azul. El método se ha aplicado al control de sulfitos en vino blanco comercial. La determinación se ha validado frente a un método de referencia oficial. La comparación estadística de resultados demuestra que no hay errores sistemáticos. Así mismo los valores de recuperación de una muestra aditivada, son del 98%

    Activación y sensibilización de ensayos enzimáticos en el control de aminas biógenas

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    Estudio para la evaluación de la determinación analítica de cadaverina, parámetro de calidad en alimentos.El procedimiento está implementado en un soporte de papel la reacción se lleva a cabo mediante microfluídica.Se han caracterizado y sensibilizado etapas del procedimiento y se ha aplicado a muestras reales.<br /

    DESARROLLOS EN MICROFLUÍDICA COMO TÉCNICA PARA LA IMPLEMENTACIÓN DE MÉTODOS RÁPIDOS EN EL CONTROL DE CALIDAD DE AMINAS

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    Se ha trabajado en la determinación analítica de aminas biógenas, ABs -tiramina como modelo- mediante reacción colorimétrica con nanopartículas de Au y sobre soporte de microfluidica en papel. La medida de color se lleva a cabo por la técnica ‘Digital Image Colorimetry, DIC’, con cámaras digitales-Smartphone para obtener colores básicos RGB y su posterior relación con la concentración. Ha sido orientado a su aplicación en el control rápido de alimentos. La técnica de microfluidica en papel ha requerido el estudio de distintos papeles cromatográficos, sus características de flujo y detección; así como consideraciones prácticas en la preparación de los chips-soportes de reacción. Tras su estudio, se ha considerado que los chips de papel Whatman grado 4 con forma de discos circulares de diámetro 8 mm preparados mediante corte con molde metálico han sido los que mejores resultados nos podían proporcionar en nuestra reacción.En un primer lugar, se han realizan experimentos con el formaldehído para caracterizar los factores que influyen en el proceso y se ha visto su aplicación en la determinación del formaldehído en agua.En la determinación de la tiramina en microfluidica en papel los mejores resultados se han obtenido con iluminación White y el canal red. Se ha realizado un diseño factorial, DOE, para saber cuáles son las condiciones óptimas: 30 mM Au, 25 ud/ml enzima y 1 M NaOH. Obtenemos un rango lineal menor que para el formaldehido y mayor sensibilidad. Se ha visto su aplicación en la determinación de la tiramina en vino blanco, donde se pueden apreciar dificultades debidas al efecto matriz.<br /

    Detección de aminas biógenas en la salubridad de alimentos, mediante métodos de tratamiento de imágenes digitales

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    Se han desarrollado métodos de colorimetría digital para la determinación de peróxido de hidrógeno y putrescina a través de cámara digital, con medidas del color RGB reflejado en tiras reactivas, con 3, 3', 5, 5'-tetrametilbencidina. Se estudiaron factores de reacción tales como: adición de la secuencia de reactivos y composición de surfactante. También se consideraron factores instrumentales: tipo de formato de imagen, número de píxeles, cámara digital y color de la iluminación de la escena digital. En primer lugar, se estudió y optimizó la determinación de HP en tiras reactivas comerciales con peroxidasa HRP y sustrato TMB. Se aplicaron tres procedimientos diferentes de calibración, entre lo que se incluyó redes neuronales artificiales, RNA. Las predicciones se llevaron a cabo no solo a partir de un único color sino también según valores de RGB. Se evidenciaron diferencias en las prestaciones analíticas, además de errores de predicción. La variación de color y el análisis de factores del proceso cromático demostraron que la componente R con iluminación blanca justificó el 67% de la variación cromática. La influencia de la iluminación evidenció que el la iluminación r favoreció el color R reflejado, que aumentó y justificó el 93% de la variación cromática. Se adaptaron estudios previos de detección de HP a putrescina como amina biógena sobre tiras reactivas. La enzima DiAminoOxidasa demostró ser un catalizador eficiente para la descomposición de la diamina con producción de HP. También se evaluó el rendimiento analítico en diferentes condiciones de iluminación. Se estudió y caracterizó interferencias tales como la cadaverine. Ese método se ha aplicado al control de aminas biógenas en embutidos. La comparación estadística con patrones de referencia demostró que no hubo errores sistemáticos en la determinación

    Diferencias entre aminas biógenas mediante ensayos enzimáticos en soporte microfluídico

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    Se ha llevado a cabo un estudio para la evaluación de la determinación analítica de cadaverina y putrescina, aminas biógenas, que son parámetros de salubridad y calidad en alimentos. El método está basado en una reacción selectiva de oxidación enzimática de las aminas seguida de la reducción de Au(III) a Au (0) que aparece en forma de nanopartículas coloreadas. El procedimiento se implementa en un soporte de papel de pequeñas dimensiones y permite la captura de la imagen digital fotográfica de la reacción en un teléfono móvil. La transformación de los colores digitales a coordenadas RGB permite obtener una relación cuantitativa entre la intensidad colorimétrica y la concentración. En el caso presentado se obtiene una relación lineal óptima en la coordenada R y con una concentración de formaldehído en el rango 9-50 mg/L, de acetaldehído para 8-40 mg/L, de cadaverina en el rango 15-50 mg/L y de putrescina para 15-50 mg/L.<br /

    Calibración multivariable en métodos con imágenes digitales

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    El TFG presenta un estudio teórico sobre la varianza de la información analítica y su modelización mediante diferentes regresiones. Se ha aplicado a sistemas cromáticos que son captados de imágenes digitales en diferentes condiciones de iluminación. Y de los cuales se mide la intensidad de los colores reflejados primarios R-G-B. Se ha demostrado que la varianza cromática se incrementa significativamente utilizando diferente tipo de iluminación. Así se han utilizado iluminaciones pan-cromáticas, y también monocromáticas. De modo que pueden obtenerse hasta un máximo de 12 variables cromáticas. El uso de regresiones multi-variables ha permitido modelizar la respuesta del sistema cromático formado por los iones sulfitos en la reacción de Boedecker. Mediante parámetros de calidad de las regresiones, se ha puesto de manifiesto, las diferencias entre regresiones: MLR, PCR y PLS. Así mismo, se evidencia la influencia del número de variables en la capacidad de predicción. En las mejores condiciones, se ha podido proponer una regresión para superar los efectos de varianza en muestras de vino blanco y predecir los contenidos de sulfito total. Los resultados han sido validados frente a resultados de métodos de referencia

    Calidad en las determinaciones analíticas de aminas biógenas con imágenes digitales

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    Este trabajo supone un primer paso para la determinación de aminas biógenas en soporte de papel en el que se ha impreso un circuito de microfluídica. El procedimiento permite inyectar disoluciones de reactivos y muestras sobre el papel, para que migren hacia la zona reactiva, en la que se produce una reacción colorimétrica. La zona de color es captada mediante cámaras digitales. A través de la intensidad de los componentes RGB se determinan cuantitativamente el contenido de analito. Principalmente se ha estudiado la realización del circuito-microchip en papel cromatográfico que permite un microflujo direccionado de disoluciones acuosas. Se han evaluado diferentes diseños de circuitos, modos de impresión y tratamientos térmicos para favorecer la creación de canales hidrofóbicos profundos en el soporte de papel. <br /
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