Analysis of factors regulated by CovR and VicRK involved in the susceptibility to opsonization by the complement system and systemic virulence in "Streptococcus mutans"

Orientador: Renata de Oliveira Mattos GranerTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Streptococcus mutans (SM) é uma espécie bacteriana comum da cavidade bucal de humanos envolvida na patogênese da cárie dental, a qual pode promover infecções sistêmicas ao atingir e persistir na corrente sanguínea (Nomura et al., 2006). Para persistir nos nichos do hospedeiro, SM utiliza sistemas reguladores transcricionais de dois componentes (SDCs). Os SDCs CovR e VicRK de SM regulam genes de virulência associados à ligação a polissacarídeos extracelulares (PEC) produzidos a partir da sacarose (gbpB, gbpC e epsC) e/ou na interação da parede celular com a matriz de biofilmes (wapE, lysM, 2146c, smaA). A inativação destes SDCs promove resistência à fagocitose por PMN na presença de sangue (Negrini et al.,2012), indicando papel da regulação de funções de escape a opsoninas do sangue, como o sistema complemento. O objetivo deste trabalho foi identificar os mecanismos moleculares através dos quais CovR e VicRK modulam a susceptibilidade de SM à imunidade mediada pelo sistema complemento e a sobrevivência em sangue. Os resultados obtidos foram incluídos em três artigos científicos apresentados em capítulos. No capítulo I, caracterizamos o perfil de susceptibilidade ao complemento na espécie SM. Análises de citometria de fluxo e de RT-PCRq revelaram que cepas isoladas de infecções sistêmicas têm menor susceptibilidade à opsonização pelo complemento e expressão reduzida de covR comparadas a isolados bucais. A inativação de covR em SM UA159 aumentou a resistência à opsonofagocitose por PMN mediada pelo complemento, de forma dependente da ligação a PEC, e aumentou a sobrevivência em sangue humano ex vivo e na corrente sanguínea de ratos. Isolados de sangue mostraram expressão significativamente maior de genes reprimidos por CovR (gbpC e epsC) e a maior ligação a PEC. Consistentemente, a inativação de gbpC e epsC reduziu a ligação a PEC e aumentou a susceptibilidade ao complemento, estabelecendo a função destes genes no escape à opsonofagocitose. No capítulo II, mostramos que VicRK regula a susceptibilidade de SM ao complemento de forma independente de PECs. A inativação de vicK promoveu resistência à opsonização pelo complemento. Análises transcricionais indicaram que VicR reprime a expressão de proteases Smu.399 e PepO e de proteínas enolase e gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase de superfície (GAPDH), implicadas na virulência de estreptococos. A inativação de smu.399 e pepO aumentou a susceptibilidade ao complemento, revelando papel na virulência. No capítulo III, demonstramos que CovR e VicRK regulam a proteína ligadora de colágeno Cnm, associada com à virulência por mecanismos não completamente conhecidos. Análises transcricionais e de interação entre proteínas recombinantes rVicR e rCovR com a região promotora de cnm demonstraram que CovR e VicR atuam respectivamente, como indutor e repressor de cnm. Os mutantes covR e vicK demonstraram diversos fenótipos compatíveis com as alterações na expressão de cnm. Assim, estabelecemos que os SDCs CovR e VicRK regulam múltiplos fatores de escape à opsonização pelo sistema complemento e/ou na sobrevivência em sangue. Estes resultados contribuem para a definição de alvos terapêuticos para controle das infecções sistêmicas por esta espécieAbstract: Streptococcus mutans (SM) is a common bacterial species of the oral cavity of humans involved in the pathogenesis of dental caries, which can promote systemic infections once reaching and persisting in the bloodstream (Nomura et al., 2006). To persist in the host niches, SM applies two-component transcriptional regulatory systems (TCS). The TCS CovR and VicRK of SM regulate virulence genes associated with SM-binding to extracellular polysaccharides (EPS) produced from sucrose (gpbB, gbpC and epsC) and /or involved in the interaction of the cell wall with the biofilm matrix (wapE, lysM, 2146c, smaA). Inactivation of this TCS promotes resistance to phagocytosis by PMN when in the presence of blood (Negrini et al., 2012), indicating that these systems regulate genes for evasion to blood opsonins, such as the complement system. The aim of this study was to identify the molecular mechanisms through CovR and VicRK modulate the susceptibility of S. mutans to complement mediated immunity and survival in the bloodstream. The results obtained were included in three scientific articles which are presented as chapters. In chapter I, we characterize the profile of SM strains susceptibilities to the complement. Flow cytometry and RT-PCR analysis revealed that strains isolated from systemic infections show lower susceptibility to complement deposition and reduced expression of covR compared to oral isolates. Inactivation of covR in SM UA159 increased resistance to complement mediated opsonophagocytosis by PMN in a way dependent on binding to EPS, ex vivo survival in human blood and in the bloodstream of rats. Blood isolates showed significantly higher expression of CovR-repressed genes (gbpC and epsC) and, consistently, increased binding to EPS. Consistently, inactivation of gbpC or epsC reduced binding to EPS and increased susceptibility to complement. In Chapter II, we show that VicRK regulates SM susceptibility to complement-mediated immunity, in a EPS-independent way. Inactivation of vicK increased resistance to complement opsonization. VicRK was shown to directly or indirectly repress the expression of Smu.399 and PepO complement proteases and the enolase and surface glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) proteins implicated in systemic virulence in other streptococci. Finally, in Chapter III, we established that CovR and VicRK directly regulate the Cnm protein, a which is important for systemic virulence in a sub-set of strains harboring cnm gene. Transcriptional analyses and assessment of interaction of recombinant proteins rCovR and rVicR with the cnm promoter region established that CovR acts as an inducer of cnm, whereas vicR acts as a repressor. Cnm-mediated virulence phenotypes were significantly associated with lower and higher cnm expression in the covR and vicK mutants, respectively. Thus, we showed that the TCSs CovR and VicRK regulate several systemic virulence factors dependent and independent of the interaction with EPS, involved in evasion to complement-mediated immunity and survival in blood. These results further confirm the importance of SM in systemic infections and contribute to the definition of therapeutic targets for controlling these infectionsDoutoradoMicrobiologia e ImunologiaDoutora em Biologia Buco-Dental2015/07237-1FAPESPCAPE

Detection and quantification of pathogens in saliva of adolescents with cerebral palsy: a cross-sectional study

BackgroundElevated levels of inflammatory mediators in saliva have been described in individuals with cerebral palsy (CP).ObjectiveThe aim of this study was to detect and quantify the pathogens Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum and Prevotella intermedia in the saliva of adolescents with CP.MethodsThis is a cross-sectional study with adolescents with CP to detect periodontopathogens from saliva samples. Initially, saliva was collected from the CP (n = 34) and control groups (n = 31), followed by the gingival index (GI) for distribution of the groups of individuals with CP and control with gingivitis (bleeding on probing ≥ 10%) and without gingivitis. Bacterial DNA was extracted from saliva samples for detection of periodontopathogens by quantitative PCR (q-PCR). Data were analyzed by Mann–Whitney and Kruskal–Wallis tests, analysis of variance t-test (ANOVA) with Tukey–Kramer post-hoc tests (p < 0.05).ResultsThe quantification of DNA of periodontopathogens in saliva samples showed that adolescents with CP present a variability (22.93–39.56) in the detection of P. gingivalis and that some subjects with CP and gingivitis (n = 4) present high quantification of P. gingivalis (ranging 39.56–37.65), although no significant difference was found between the groups (p > 0.05). A significant contrast was observed for the pathogen P. intermedia when comparing the difference in the control group (p = 0.0396). No major differences were detected in the quantification of periodontopathogens evaluated between the control group and CP.ConclusionAdolescents with CP showed variability in the detection of DNA of periodontopathogens, especially a great variation in the detection of P gingivalis in saliva of CP with gingivitis

MORTALIDADE EM MULHERES JOVENS POR CÂNCER DE MAMA, NO NORDESTE DO BRASIL DE 2015 A 2019

Introduction: Breast tumors are the main cause of female mortality worldwide, with a high occurrence of these deaths in Brazil. Although the risk of breast cancer increases with age, young women tend to have more severe forms of the disease and a higher risk of mortality. Thus, describing breast cancer mortality in young women will contribute to health care and mortality reduction.  Objective: To describe breast cancer mortality in young women in the Northeast region of Brazil from 2015 to 2019. Methodology: Epidemiological, cross-sectional, descriptive, ecological, time-series study, with a quantitative approach to breast cancer mortality in young women in Northeast Brazil from 2015 to 2019. Study carried out through an electronic search of breast cancer deaths in young women, available in the Mortality Information System (SIM) of the Department of Informatics of the Unified Health System (DATASUS), of all reported deaths from breast cancer in young women in the Brazilian Northeast from January 2015 to December 2019,  by the variables: gender, age group, education, race/color, and all deaths from breast câncer. The analysis was performed by descriptive statistics, tabulated in a Microsoft Excel 10 spreadsheet arranged in tables by Microsoft Word 10. Crude mortality rates were calculated according to sociodemographic characteristics and age group, 20-39 years, DATASUS age category. Results: From 2015 to 2019, 146 deaths of young women due to breast cancer were identified in the Northeast, mostly brown (89), aged between 25 and 29 years (120), single (76), with 8 to 11 years of schooling (51) and a higher occurrence in 2015(34) and 2016 (34).Introdução: Os tumores mamários são os principais responsáveis pela mortalidade feminina mundial, tendo no Brasil a região Nordeste alta ocorrência desses óbitos. Embora, o risco da ocorrência de câncer de mama aumente com a idade, mulheres jovens tendem a apresentar formas mais graves da doença e maior risco de mortalidade. Assim, descrever a mortalidade em mulheres jovens por câncer de mama contribuirá para assistência em saúde e redução da mortalidade. Objetivo: Descrever a mortalidade em mulheres jovens por câncer de mama, na região Nordeste do Brasil de 2015 a 2019. Metodologia: Estudo epidemiológico, transversal, descritivo, delineamento ecológico do tipo séries temporais, com abordagem quantitativa da mortalidade em mulheres jovens por câncer de mama, no Nordeste do Brasil de 2015 a 2019. Estudo realizado por meio de busca eletrônica dos óbitos por câncer de mama em mulheres jovens, disponíveis no Sistema de Informação de Mortalidade (SIM) do Departamento de Informática do Sistema Único de Saúde (DATASUS), da totalidade dos óbitos notificados de câncer de mama em mulheres jovens no Nordeste brasileiro de janeiro de 2015 a dezembro de 2019, pelas variáveis: sexo, faixa etária, escolaridade, raça/cor e totalidade dos óbitos por câncer de mama. A análise foi realizada por estatística descritiva, tabulação em planilha eletrônica do programa Microsoft Excel 10 disposta em tabelas pelo Microsoft Word 10. Calculadas as taxas de mortalidade bruta conforme características sociodemográficas e grupo etário, 20-39 anos, categoria etária do DATASUS. Resultados: Foram identificados 146 óbitos de mulheres jovens por câncer de mama no Nordeste de 2015 a 2019, majoritariamente pardas (89), com idade entre25 e 29 anos (120), solteiras (76), com escolaridade de 8 a 11 anos de estudo (51) e maior ocorrência nos anos de 2015(34) e 2016 (34)

Reposição hídrica restritiva no manejo pós-operatório: Uma revisão bibliográfica

Introdução: Ainda hoje, não há consenso sobre a melhor estratégia a ser seguida no que se refere à administração de fluidos no período pós-operatório. Dessa forma, diversos estudos analisam as vantagens e desvantagens da restrição hídrica. O objetivo desta revisão é compilar as informações atuais, de forma a facilitar a tomada de decisão das equipes cirúrgicas a escolher a estratégia que viabilize melhor recuperação ao paciente. Metodologia: Foi realizada uma revisão sistemática através das bases de dados LILACS, SciELO e Pubmed, que resultou em 725 artigos. Após a exclusão daqueles que não apresentavam os critérios de inclusão/exclusão, restaram 10 artigos, os quais foram analisados e discutidos neste estudo. Resultados: Entre os estudos, foram encontradas redução da necessidade de transfusão sanguínea e do débito urinário entre os pacientes de restrição hídrica. Em relação à incidência de IRAs, há uma divergência sobre seu aumento ou não nos pacientes com restrição hídrica. E o critério mais abordado foi a redução do tempo de internação, associado à diminuição de complicações pós-operatórias. Conclusão: A restrição hídrica está associada à redução da necessidade de transfusão sanguínea e, especialmente, à diminuição do período de internação pós-operatório

Oferta de alimentos saudáveis em kits de merenda: estratégia para educação alimentar e nutricional durante a pandemia de COVID-19/ Healthy food in snack kits: a strategy for food and nutrition education during the COVID-19 pandemic

Em decorrência da suspensão das atividades educacionais presenciais como medida de controle da pandemia de COVID-19, a execução do Programa Nacional de Alimentação Escolar (PNAE) se tornou um desafio. Sabendo-se que a maioria dos alunos da região Nordeste tem a alimentação escolar como a principal refeição do dia, a manutenção do programa, com a oferta de alimentos saudáveis, é fundamental para a garantia da segurança alimentar e nutricional dos estudantes, principalmente nesse cenário. Todavia, especula-se que isso não esteja ocorrendo. Pensando nisso, este trabalho objetivou avaliar a oferta de alimentos saudáveis nos kits de merenda, distribuídos pelos municípios de Alagoas durante a pandemia de COVID-19. Trata-se de uma pesquisa realizada, entre 06 e 09 de maio de 2020, a partir do acesso online às contas nos veículos de comunicação digital (websites, Facebook, Instagram e Twitter) da prefeitura ou da secretaria municipal de educação dos 102 municípios alagoanos. Buscaram-se informações que permitissem identificar se o município estava executando o PNAE no período de suspensão das aulas por meio da distribuição de kits de merenda, bem como informações que descrevessem a composição desses kits. Os resultados foram analisados com auxílio do programa Epi-Info 7.2.4. Dos 102 municípios alagoanos, 42 (41,1%) distribuíram kits de merenda no período analisado. Desses, apenas 6 (14,3%) especificaram os alimentos incluídos nos kits. Entretanto, em todos esses houve a oferta de alimentos saudáveis, dentre os quais, arroz, feijão, leite, frutas, legumes e tubérculos. A quantidade de alimentos in natura ou minimamente processados variou de 1 a 5 itens, apresentando mediana de 3 alimentos saudáveis por kit. Apenas em 2 desses municípios houve a distribuição de alimentos cárneos no kit de alimentos. Identificou-se a oferta de alimentos saudáveis nos kits de merenda dos municípios que divulgaram as informações sobre a sua composição, ação que corrobora com as diretrizes do PNAE e consiste de per si em uma estratégia de EAN. Entretanto, essa oferta pode ter sido sub ou superestimada, devido à falta de informações quanto aos tipos de alimentos que compuseram os kits na maioria dos municípios

Distúrbios osteomusculares relacionados ao trabalho adquiridos por profissionais da enfermagem / Work-related musculoskeletal disorders acquired by nursing professionals

Identificar na literatura os principais distúrbios osteomusculares relacionados ao trabalho (DORT) adquiridos por profissionais da Enfermagem, assim como suas respectivas causas, consequências e medidas de prevenção. É uma revisão integrativa da literatura, que teve como questão norteadora: “Quais os principais DORT adquiridos por profissionais da Enfermagem, suas causas, consequências e medidas de prevenção?”. A busca foi realizada na base de dados LILACS. Utilizaram-se os Descritores em Ciências da Saúde (DeCS), a partir da combinação: Enfermagem AND "Transtornos Traumáticos Cumulativos" OR "Distúrbios Osteomusculares Relacionados ao Trabalho". Os critérios de inclusão foram: estudos disponíveis online, gratuitos, disponibilizados na íntegra, nos idiomas português, inglês e espanhol, publicados desde 2011 a 2021. Os critérios de exclusão foram: estudos duplicados e os que tratavam de outras classes profissionais ou que não fossem pertinentes ao objetivo da presente investigação. No total, foram encontradas 478 produções e, a partir da leitura dos títulos e dos resumos, utilizando os critérios de seleção estabelecidos, restaram 14 para a amostra final. Os principais DORT adquiridos por profissionais da Enfermagem são doenças que acometem tendões, músculos, fáscias e ligamentos, que podem ocorrer de forma isolada ou combinada, são problemas que acometem principalmente os membros superiores e a coluna, como as tendinites, lombalgias, cervicalgias e dorsalgias. Vários fatores de riscos estão associados às DORT, em razão de sua etiologia ser multifatorial, podendo ser de natureza ergonômica e/ou psicossocial. Observou-se que os principais DORT adquiridos por profissionais da Enfermagem são os que afetam principalmente os membros superiores e a coluna, a exemplo de tendinites, dorsalgia, lombalgia e cervicalgia, sendo as duas últimas as mais prevalentes

COMPARAÇÃO ENTRE DOENÇA DE PLUMMER E DOENÇA DE GRAVES: DIFERENÇAS CLÍNICAS, DIAGNÓSTICAS E TERAPÊUTICAS.

Plummer's Disease and Graves' Disease are prevalent hyperthyroid conditions with distinct pathophysiological mechanisms. While Plummer's Disease is characterized by autonomous nodules that produce hormones independently of TSH, Graves' Disease is an autoimmune condition with diffuse thyroid stimulation due to antibodies against the TSH receptor. Methodology: The research was conducted through online access to scientific databases such as Google Scholar, National Library of Medicine (PubMed), Virtual Health Library (BVS), and Scientific Electronic Library Online (SCIELO) for article selection, using keywords present in the descriptors: Plummer's Disease, Hyperthyroidism, Thyroid Ultrasonography, Graves' Disease, TSH Receptor Antibodies, and Exophthalmos. Results: Patients with Plummer's Disease present insidious hyperthyroid symptoms associated with palpable thyroid nodules, diagnosed by scintigraphy showing heterogeneous uptake. In Graves' Disease, in addition to the classic signs of hyperthyroidism, exophthalmos and other autoimmune symptoms are common, with diagnosis confirmed by TSH receptor antibodies and scintigraphy with diffuse uptake. Treatments for Plummer's Disease include radioactive iodine therapy and surgery, while for Graves' Disease, the initial approach is with antithyroid medications, followed by radioactive iodine therapy or surgery in refractory cases. Final considerations: Differentiating between Plummer's Disease and Graves' Disease is essential for effective treatment. Plummer's Disease requires interventions focused on hyperfunctioning nodules, while Graves' Disease necessitates a comprehensive approach that includes managing autoimmune manifestations. Personalized treatment based on the specific etiology of hyperthyroidism is crucial to optimizing therapeutic outcomes and patient quality of life. Keywords: Hyperthyroidism, Plummer's Disease, Graves' Disease, Differential Diagnosis, Thyroid Therapies, AutoimmunityA Doença de Plummer e a Doença de Graves são condições prevalentes de hipertireoidismo com distintos mecanismos patofisiológicos. Enquanto a Doença de Plummer é caracterizada por nódulos autônomos que produzem hormônios independentemente do TSH, a Doença de Graves é uma condição autoimune com estimulação difusa da tireoide devido a anticorpos contra o receptor de TSH. Metodologia:A pesquisa foi realizada através do acesso online nas bases de dados científicos como: Google Scholar, National Library  of Medicine(PubMed), Biblioteca Virtual em Saúde (BVS) e Scientific  Electronic  Library  Online(SCIELO) para seleção dos artigos, através de palavras-chave presentes nos descritoresPlummer's Disease, Hyperthyroidism, Thyroid Ultrasonography, Graves' Disease, TSH Receptor Antibodies e Exophthalmos. Resultados:  Pacientes com Doença de Plummer apresentam sintomas insidiosos de hipertireoidismo associados a nódulos tireoidianos palpáveis, diagnosticados por cintilografia mostrando captação heterogênea. Na Doença de Graves, além dos sinais clássicos de hipertireoidismo, são comuns exoftalmia e outros sintomas autoimunes, com diagnóstico confirmado por anticorpos antirreceptor de TSH e cintilografia com captação difusa. Tratamentos para Doença de Plummer incluem iodoterapia radioativa e cirurgia, enquanto para Doença de Graves, a abordagem inicial é com medicamentos antitireoidianos, seguidos de iodoterapia ou cirurgia em casos refratários.Considerações Finais: A diferenciação entre Doença de Plummer e Doença de Graves é essencial para um tratamento eficaz. A Doença de Plummer requer intervenções focadas nos nódulos hiperfuncionantes, enquanto a Doença de Graves necessita de uma abordagem ampla que inclui o manejo das manifestações autoimunes. A personalização do tratamento baseada na etiologia específica do hipertireoidismo é fundamental para otimizar os resultados terapêuticos e a qualidade de vida dos pacientes

Patologias atuais: a compulsão e a sociedade dos excessos: Current pathologies: compulsion and the society of excesses

O artigo em tela tem por objetivo analisar os aspectos biopsicossociais da conduta compulsiva de consumo. Propõe-se a apresentar os elementos psicológicos contidos nesse comportamento, além de verificar quais são os resultados decorrentes dessa compulsão. O consumo compulsivo, também chamado de oniomania, é um transtorno causado pela ansiedade despertada pela necessidade de comprar e saciada, somente, quando é materializada a aquisição daquilo que se deseja comprar. O estudo em questão pode ser classificado como sendo de cunho bibliográfico, a partir da análise de documentos publicados em forma de artigos científicos e livros em formato digital

Análise da eficácia da Tirzepatida como agente terapêutico para perda de peso em pacientes com Obesidade

A obesidade e o diabetes são doenças crônicas que afetam milhões de pessoas em todo o mundo, sendo consideradas epidemias crescentes. O tratamento da obesidade envolve uma abordagem multifacetada, incluindo mudanças no estilo de vida e intervenções farmacológicas. Nesse contexto, a tirzepatida, uma terapia combinada de dois medicamentos que atuam em diferentes vias metabólicas para reduzir o apetite e promover a perda de peso em pacientes com obesidade, tem se destacado como uma opção terapêutica promissora. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia e segurança da tirzepatida como agente terapêutico para perda de peso em pacientes com obesidade. Para isso, foram selecionados quatro artigos que avaliaram o uso da tirzepatida em pacientes com obesidade, publicados entre 2018 e 2023, nas bases de dados PubMed (Medline), Scientific Electronic Library Online (SciELO) e Cochrane Library. Os resultados indicam que a tirzepatida é uma terapia promissora e segura para perda de peso em pacientes com obesidade. Todos os estudos relataram perda de peso significativa em pacientes tratados com essa terapia, variando de 8,6% a 16,0% do peso corporal inicial. Além disso, a tirzepatida também apresentou efeitos benéficos em outros parâmetros metabólicos, como redução da glicemia e melhora da função hepática. Efeitos adversos foram relatados em menor frequência e gravidade em comparação com outras terapias para perda de peso. Em resumo, a tirzepatida é uma terapia combinada de dois medicamentos que tem demonstrado eficácia e segurança para a perda de peso em pacientes com obesidade, de acordo com os resultados de quatro estudos avaliados nesta pesquisa. Essa terapia pode ser uma opção terapêutica válida para pacientes com obesidade. No entanto, é importante destacar a necessidade de mais pesquisas para avaliar sua eficácia e segurança a longo prazo e sua aplicabilidade em diferentes populações. Portanto, é fundamental que o tratamento seja realizado com acompanhamento médico e que cada caso seja avaliado individualmente