Jelátvitel és génexpresszió a B sejtek fejlödése során, jelentösége az autoimmunitás kialakulásában = Signaling and gene expression in developing peripheral B cells, implications for autoimmunity

Célunk a B-sejt receptor (BCR), a Toll-szerű receptor 9 (TLR9), a B-sejt aktiváló faktor (BAFF) receptora, a BR3 és CD95/Fas együttes jelközvetítésének tanulmányozása, a jelpályák közötti együttműködés módjának felderítése volt. Megállapítottuk, hogy a BAFF, a TLR9 agonista, CpG, és az anti-IgG egyaránt gátolja a Fas-idukált apoptózist. A BCR és a CpG részben átfedő, (PKC) részben eltérő (PI3K vagy p38) jelpályák aktivációján keresztül fejtheti ki apoptózist gátló hatását. Elsőként jellemeztük, a Gab2 adapter szerepét B-sejtekben és leírtuk, hogy a fokozott Gab2 expresszió megmenti a B-sejteket a Fas-indukált sejthalálból, ami a Gab2 - PI3-K - Akt jelpálya aktiválásának köszönhető. A Tak1-p38 jelpálya kiemelt szerepet játszik a BCR és a TLR9 együttműködése során, míg a BR3–TLR9 együttes jelei főként az NF?B útvonalon fejtik ki a hatásukat. A ko-stimuláló jelek csökkenthetik a B sejtek aktivációs küszöbét. Eredményeink összesítve azt mutatják, hogy a TLR9-en keresztül érkező jelek kiváltják az emberi B sejtek aktiválódását, proliferációját és ellenanyag termelését, és az első két esetben szinergikus együttműködésben állnak a BCR által kiváltott jelekkel, ami arra utal, hogy a természetes immunválasz TLR9-en keresztül történő aktiválása az antigénre nem specifikus módon sejtproliferációt és ellenanyag termelést válthat ki. Ez fokozott védelmet biztosíthat a fertőző ágensekkel szemben, de fokozhatja az autoreaktív ellenanyagok termelésének veszélyét is. | Our aim was to reveal the mechanism of the cooperation between signals activated by the B-cell receptor complex (BCR), Toll-like receptor 9 (TLR9), receptor for the B-cell activating factor of tumor necrosis factor family (BAFFR, BR3) and the CD95/Fas. We have found that BAFF, TLR9 agonist CpG DNA as well as anti-IgG rescued B-cells from Fas-induced apoptosis. BCR and CpG rescue B-cells by partly overlapping (PKC mediated) and partly independent (PI3-K or p38 regulated) pathways. We first characterized the role of Gab2 adapter in B-cells, and described that enhanced expression of Gab2 rescues B-cells form Fas-induced apoptosis, that depends on the PH domain of Gab2, and it is most probably due to activation of the PI3-K-Akt pathway. Investigating the cooperation between signals stimulated by BCR, BAFF and TLR9 we described that the Tak1-p38 pathway plays the most important role in the synergism between BCR and TLR9, while BR3 and TLR9 synergism leads to NFkB activation. These co-stimulating signals decrease activation threshold of B-cells. Taking together our results indicate that TLR9 induces the activation, proliferation and antibody synthesis of B-cells, and synergizes with BCR mediated signals. This suggests that triggering the innate immune system may result in antigen independent proliferation and antibody production. That may protect against infectious agents but may also augment the danger of autoantibody production

Klinikai - immunológiai vizsgálatok szisztémás autoimmun kórképekben = Clinical-epidemiological studies in systemic autoimmune diseases

Klinikai - immunológiai vizsgálatok szisztémás autoimmun kórképekben Czirják László A populációs alapú vizsgálatainkat lezártuk, és a szisztémás sclerosis, Raynaud jelenség illetve rheumatoid arthritis prevalencia értékeit publikáltuk. A michrochimérismus vizsgálataink nem zárultak interpretálható eredményekkel. Megjegyzendő, hogy más nemzetközi munkacsoportoknak is problámát okozott a kimutathatósági határon levő vizsgálat reprodukálható elvégzése. Az indukált köpet vizsgálat nem bizonyult reprodukálhatónak. Más, alternatív módszert (surfactans D, KL-6) használunk a tüdőmanifesztáció vizsgálatára illetve követésére. Alapmunkánkat közlésre elfogadták, követéses vizsgálatunk publikálása folyamatban van. A hosszutávú követéses vizsgálataink eredményeit szisztémás sclerosisban publikáltuk, kimutattuk, hogy rossz prognozissal jár a papaneopláziás szindróma formájában jelentkező systemás sclerosis. Emellett kidolgoztunk és validáltunk egy a bőrfolyamat aktivitását mérő beteg önkitöltő kérdőívet. Az aktivitás vizsgálatához szükséges kérdőíveket (scleroderma-HAQ, DASH) magyar nyelven validáltuk. Az európai scleroderma aktivitási kritériumok validálása és egy új aktivitási kritériumrendszer kialakítása folyamatban van, már rendelkezésre áll egy igen nagyszámú betegből álló egyéves követéses vizsgálat adatsora (1. sz. melléklet). Gyulladásos izombetegségekben a prógnózist vizsgáló munkánat szintén lezártuk. | Clinical epidemiological studies on systemic autoimmune diseases We have finished our population-based studies on the prevalence of connective tissue diseases. With regard to rheumatoid arthritis, Raynaud?s phenomenon and systemic sclerosis we have published our results. Investigation of microchimesism in systemic sclerosis did not give conclusive results, we had detectability problems with this particular method, similar to other groups . The induced sputum investigations did not show reproducible results therefore we worked out other alternative methods for the evaluation of interstitial lung involvement in connective tissue diseases. Detection of surfactant D and KL-6 markers are good surrogate markers for the severity of lung disease. Our long term follow up studies on systemic sclerosis indicated that the presence of paraneoplastic syndrome and gastric antral ectasia (watermelon stomach) are poor prognostic signs besides the well known organ manifestations in systemic sclerosis. We worked out and validated a patient self assessment questionnaire measuring the skin thickness of scleroderma patients. We have also completed our clinical epidemiological studies on inflammatory myopathies. The presence of cancer associated myositis caused a poor prognosis. Conversely, interstitial lung disease did not cause an unfavourable prognosis in our cohort

Szisztémás autoimmun betegségek pulmonális érintettségének klinikai és laboratóriumi vizsgálata = Clinical and laboratory investigation of the pulmonary manifestation of systemic autoimmune diseases

Systemás sclerosis (SSc) tüdőérintettsége alapvető hatású a betegség kimenetelére. Szérumban is mérhető anyagok - mint pl. a KL-6 - jelentőségét vizsgáltuk a PF-ra nézve. A KL-6 PF-ra vonatkoztatott szenzitivitása emelkedő értéket mutatott a PF súlyosságának fokozódásával. Sok olyan beteg is volt, akinél a PF ellenére normál KL-6 szintet mértünk, azaz a szérummarkerek nem helyettesítik a konvencionális módszereket. Prospektív vizsgálatunk elején mért KL-6 szintek szignifikánsan magasabbak voltak azokban, akik később elhunytak, mint akik életben maradtak. A követés során mért KL-6 változás nem jelezte a PF súlyosságában bekövetkezett változásokat. A módosított Rodnan-féle bőrpontszámot tartják a legalkalmazhatóbb vizsgálati módszernek a bőrérintettség vizsgálatára. Alternatív módszer kifejlesztése fontos. Az általunk kialakított önkitöltős betegkérdőív validálhatóan alkalmasnak bizonyult a bőrfolyamat megítélésére. Az ún. European Scleroderma Study Group aktivitási index kellően jó validitásúnak mutatkozott vizsgálatunkban, azonban nem tükrözte megfelelően a tüdőérintettség állapotát. Egy új 12 pontos aktivitási indexet alakítottunk ki (a FVC/DLCO, DLCO-változás, bőrfekély-változás, a HAQ-DI és az új önkitöltős bőrpontszám hozzáadásával). Az új index szorosabb összefüggést mutatott a tüdőfolyamattal, mint az eredeti. Különböző biomarkerek, mint pl. a KL-6 hozzáadása az új indexhez azonban nem javította az index használhatóságát. | Lung involvement plays an important role in the outcome of systemic sclerosis (SSc). We investigated the notability of distinct serum markers, such as KL-6 in characterization of lung involvement. The sensitivity of KL-6 for pulmonary fibrosis (PF) is increased with the severity of PF. Significant number of patients with PF had normal level of these markers; therefore we conclude that the use of these markers can not replace the conventional techniques. In our prospective study, we measured significantly higher initial serum levels of KL-6 in patients who died than in survivors. However, any change of serum level of KL-6 during the follow up not predicts the alteration of severity of PF. The modified Rodnan skin score (mRSS) is considered the most appropriate technique for measuring skin involvement. There is a need for an alternative method. We established and validated a patient self assessment questionnaire for the evaluation of skin thickening in SSc. The validity of the European Scleroderma Study Group (EScSG) activity index is good, though the lung-related disease activity may not be sufficiently represented. We constructed a 12 point activity index (by adding the FVC/DLCO, change in DLCO, change in the ulcer scores, HAQ-DI and our new patient reported skin score), which showed closer correlation with lung involvement. Biomarkers - including KL-6 - were related to both the EScSG and the 12 point index, though they did not improve the total variance of the model

Familial Immune Thrombocytopenia Associated With a Novel Variant in IKZF1

We report a novel variant in IKZF1 associated with IKAROS haploinsufficiency in a patient with familial immune thrombocytopenia (ITP). IKAROS, encoded by the IKZF1 gene, is a hematopoietic zinc-finger transcription factor that can directly bind to DNA. We show that the identified IKZF1 variant (p.His195Arg) alters a completely conserved histidine residue required for the folding of the third zinc-finger of IKAROS protein, leading to a loss of characteristic immunofluorescence nuclear staining pattern. In our case, genetic testing was essential for the diagnosis of IKAROS haploinsufficiency, of which known presentations include infections, aberrant hematopoiesis, leukemia, and age-related decrease in humoral immunity. Our family study underscores that, after infections, ITP is the second most common clinical manifestation of IKAROS haploinsufficiency

Characteristics of ScleroID highlighting musculoskeletal and internal organ implications in patients afflicted with systemic sclerosis

BACKGROUND Systemic sclerosis (SSc) is a multi-organ disease with impaired health-related quality of life (HRQoL). The EULAR SSc Impact of Disease (ScleroID) is a newly introduced SSc-specific patient-reported outcome to evaluate HRQoL in SSc. OBJECTIVE To investigate the correlation between the ScleroID and the involvement of organ systems as well as disease activity/damage in a SSc cohort from a large tertiary care centre. PATIENTS AND METHODS The ScleroID and clinical characteristics including internal organ involvement and hand function were investigated in 160 consecutive patients with SSc (median age 46 (43;56) years; diffuse cutaneous SSc 55%). RESULTS A strong correlation was found between the ScleroID and articular disease activity scores (DAS28-CRP, DAS28-ESR, CDAI, SDAI), a hand function performance test, the Hand Anatomy Index and muscle strength tests. Additionally, a strong significant correlation was discovered using instruments representing hand function and musculoskeletal disability including the Cochin Hand Function Scale, the Quick Questionnaire of the Disability of the Hands, Arms and the Shoulders and the Health Assessment Questionnaire Disability Index. A significant negative correlation was found between the ScleroID score and the 6-min walking test (6MWT) (rho - 0.444, p < 0.001). Clinically mild lung/heart disease did not show increased ScleroID values. The Mouth Handicap in the Scleroderma Scale and the University of California Los Angeles Scleroderma Clinical Trials Consortium gastrointestinal tract 2.0 also showed significant positive correlations to the ScleroID score (rho: 0.626, p < 0.001; rho: 0.646, p < 0.001, respectively). Patients experiencing oesophageal difficulties bore a significantly higher score compared to individuals with a normal functioning oesophagus (3.2/1.5;4.5/ vs. 2.2/1.0;3.2/, p = 0.011). Moreover, the ScleroID showed a significant positive correlation to the revised EUSTAR disease activity index and modified activity index. CONCLUSION In a large single-centre cohort, the previously described ScleroID-related findings were confirmed. Furthermore, several organ involvement-related functional and performance tests showed a good correlation to the ScleroID including the 6MWT and gastrointestinal-related complaints. Many aspects of musculoskeletal damage, overall disease activity, pain and fatigue were also well represented in the ScleroID, which efficiently reflects the impact of organ involvement, disease activity and functional damage

A szeronegatív spondylarthritisek és a szisztémás kötőszöveti betegségek gastrointestinalis vonatkozásai = Gastrointestinal involvement of spondylarthropathies and systemic connective tissue disorders

A szisztémás autoimmun betegségek gyomor-bélrendszeri érintettségére vonatkozóan 3 kiemelt területen végeztünk kutatásokat: (1.) kísérletes állatmodellben a gastrointestinum különböző funkcióinak regulációjában részt vevő citokinek és neuropeptidek szerepe, (2.) a szeronegatív spondylarthritisek kialakulásában szerepet játszó genetikai jellegzetességek és (3.) a kötőszöveti betegségek (primer Sjögren szindróma és szisztémás sclerosis) gasztrointesztinális manifesztációinak vizsgálata Eredmények: (1.) Az interferon-α, amely egy hatékony antivirális és tumorellenes citokin, mind intravenásan, mind intracysternálisan adva csökkenti a gyomorszekréciót. A gyomorszekréciót gátló hatás kialakulása nitrogén monoxid felszabadulásán keresztül történik, és a központi idegrendszeri CRF ( 2-es típusú) receptort is magába foglalja. (2.) Crohn betegségben a CARD15/NOD2 intracelluláris receptor fehérjék polimorfizmusánakvizsgálata során azt találtuk, hogy a betegek 33.78 %ában van jelen a NOD2/CARD15 mutációja a control populációban észlelt 16.23 %-hoz képest. Arthropathia psoriaticaban szenvedő betegeknél ezeknek a géneknek a polymorphismusa nem játszik szerepet. (3.) Primer Sjögren szindrómában a májenzimek a beteget 20%-ában mutattak eltérés, 8 %-a autoimmun májbetegséghez kapcsolódik. A májenzim eltérésben szenvedő betegeknél a betegség korábbi életkorban jelentkezik, és gyakrabban van polyarthritisük. | Connective tisue diseases involve gastrointestinal tract. The major aims of our investigations were: (1.) examination of the role of different cytokines and neuropeptides in thr regulation of different functions of the gastrointestinal tract, (2.) genetic predisposition of and the role of mucosal integrity of seronegative spondylarthropathies, and (3.) gastrointestinal manifestations of connective tissuse diseases: liver involvement of primary Sjögren?s syndrome and disturbed gastrointestinal motility of systemic sclerosis. Results: (1.) Interferon-?, a potent antiviral and antitumor cytokine given intravenously and intracisternally decreases gastric secretion. The inhibition of gastric secretion involves nitrogen monoxide and central CRF type-2 receptors. (2.) CARD/15NOD2 polymorphism is present in 33.78 % of patient suffernig from Crohn?s disease. The presence of psoriatic arthritis is not associated with polkymorphism of CARD15/NOD2 proteins. (3.) Primary Sjögren?s syndrome is accompanied by elevation of liver enzymes in 20 % of patients. 8% of liver enzyme disturbences is duo to autoimmune liever diseases: autoimmune hepatitis or primary biliary cirrhosis. Patients having elevated liver enzymes show an early onset of disease and have polyarthritis much frequently in comparison with those having normal liver enzymes

Ligation of TLR Homologue CD180 of B Cells Activates the PI3K/Akt/mTOR Pathway in Systemic Sclerosis and Induces a Pathological Shift in the Expression of BAFF Receptors

The phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K)/Akt and the mammalian target of rapamycin (mTOR) pathways are known to play a key role in B-cell activation and fibrosis in systemic sclerosis (SSc). Receptors of B-cell activator factor (BAFF) utilize these pathways, which can be influenced by Toll-like receptors (TLRs), as TLRs can alter the expression of BAFF-binding receptors. Our results show that B-cell stimulation via TLR homologue CD180 phosphorylates Akt in diffuse cutaneous SSc (dcSSc) to a lower extent than in healthy controls (HCs). We found basal downregulated BAFF receptor (BAFF-R) and enhanced transmembrane activator and calcium-modulator and cyclophilin ligand interactor (TACI) expression in dcSSc B cells, which might enhance the formation of autoantibody-secreting plasma cells. Moreover, this pathological shift was observed in naive B cells, emphasizing the importance of their increase in SSc. Additionally, we measured higher serum levels of autoantibodies to BAFF in dcSSc patients, suggesting that an imbalance in the complex system of BAFF/anti-BAFF autoantibodies/BAFF-binding receptors may contribute to the development of SSc. Anti-CD180 antibody treatment had opposite effects on the expression of BAFF-R and TACI in HC B cells, resulting in similar levels as observed in SSc B cells without stimulation, which argues against the usefulness of such therapy in SSc

Germline Mutations in NFKB2 Implicate the Noncanonical NF-κB Pathway in the Pathogenesis of Common Variable Immunodeficiency

Common variable immunodeficiency (CVID) is a heterogeneous disorder characterized by antibody deficiency, poor humoral response to antigens, and recurrent infections. To investigate the molecular cause of CVID, we carried out exome sequence analysis of a family diagnosed with CVID and identified a heterozygous frameshift mutation, c.2564delA (p.Lys855Serfs∗7), in NFKB2 affecting the C terminus of NF-κB2 (also known as p100/p52 or p100/p49). Subsequent screening of NFKB2 in 33 unrelated CVID-affected individuals uncovered a second heterozygous nonsense mutation, c.2557C>T (p.Arg853∗), in one simplex case. Affected individuals in both families presented with an unusual combination of childhood-onset hypogammaglobulinemia with recurrent infections, autoimmune features, and adrenal insufficiency. NF-κB2 is the principal protein involved in the noncanonical NF-κB pathway, is evolutionarily conserved, and functions in peripheral lymphoid organ development, B cell development, and antibody production. In addition, Nfkb2 mouse models demonstrate a CVID-like phenotype with hypogammaglobulinemia and poor humoral response to antigens. Immunoblot analysis and immunofluorescence microscopy of transformed B cells from affected individuals show that the NFKB2 mutations affect phosphorylation and proteasomal processing of p100 and, ultimately, p52 nuclear translocation. These findings describe germline mutations in NFKB2 and establish the noncanonical NF-κB signaling pathway as a genetic etiology for this primary immunodeficiency syndrome