Deletion of the Pichia pastoris KU70 Homologue Facilitates Platform Strain Generation for Gene Expression and Synthetic Biology

Targeted gene replacement to generate knock-outs and knock-ins is a commonly used method to study the function of unknown genes. In the methylotrophic yeast Pichia pastoris, the importance of specific gene targeting has increased since the genome sequencing projects of the most commonly used strains have been accomplished, but rapid progress in the field has been impeded by inefficient mechanisms for accurate integration. To improve gene targeting efficiency in P. pastoris, we identified and deleted the P. pastoris KU70 homologue. We observed a substantial increase in the targeting efficiency using the two commonly known and used integration loci HIS4 and ADE1, reaching over 90% targeting efficiencies with only 250-bp flanking homologous DNA. Although the ku70 deletion strain was noted to be more sensitive to UV rays than the corresponding wild-type strain, no lethality, severe growth retardation or loss of gene copy numbers could be detected during repetitive rounds of cultivation and induction of heterologous protein production. Furthermore, we demonstrated the use of the ku70 deletion strain for fast and simple screening of genes in the search of new auxotrophic markers by targeting dihydroxyacetone synthase and glycerol kinase genes. Precise knock-out strains for the well-known P. pastoris AOX1, ARG4 and HIS4 genes and a whole series of expression vectors were generated based on the wild-type platform strain, providing a broad spectrum of precise tools for both intracellular and secreted production of heterologous proteins utilizing various selection markers and integration strategies for targeted or random integration of single and multiple genes. The simplicity of targeted integration in the ku70 deletion strain will further support protein production strain generation and synthetic biology using P. pastoris strains as platform hosts

Werke der Barmherzigkeit. Mittel zur Gewissensberuhigung oder Motor zur Strukturveränderung?

„Was ihr für einen dieser Geringsten getan habt, das habt ihr mir getan.“ (Mt 25,40.45) In diesem Satz Jesu verdichtet sich die bereits zwei Jahrtausende leitende Auffassung, dass das Christentum die Hilfe zugunsten der am gesellschaftlichen Rand Stehenden, der Bedürftigen und Marginalisierten zu seinen leitenden Grundoptionen zählt: Die Verpflegung von Hungernden und Durstigen, die Aufnahme von Obdachlosen und Fremden, das Besuchen von Kranken und Gefangenen. Doch führte und führt dieser starke spirituelle Impuls der „Werke der Barmherzigkeit“ auch zu einer Veränderung gesellschaftlicher Unrechtsstrukturen? Motiviert er die Glaubenden, die Ursachen sozialer Ausgrenzung zu beseitigen? Oder leitet er ausschließlich dazu an, Symptome zu lindern? Ein kritischer inter- und transdisziplinärer Blick auf die Wirklichkeit hat diese Fragen erhellt. Inhaltsverzeichnis: MICHAEL ROSENBERGER: Gewissensberuhigung oder Strukturveränderung? Eine Einführung ins Thema; FRANZ KÜBERL: Barmherzigkeit: Herzschlag der Caritas; Diskussion im Anschluss an den Vortrag; ERIC OTTENHEIJM: Die Werke der Barmherzigkeit (Mt 25,31-46) als Öffentlichkeitsethik; Diskussion im Anschluss an den Vortrag; MARTIN HOCHLEITNER: „Gutmenschenkunst“ – Beispiele, Rezeption und Wirkung von Kunstprojekten der 1990er Jahre. Ein Resümee des Vortrages Diskussion im Anschluss an den Vortrag; KLAUS BAUMANN: Wieso „Barmherzigkeit“? Gerechtigkeit als Mindestmaß der Liebe; Diskussion im Anschluss an den Vortrag; KARIN SCHERSCHEL: Die Bedeutung des Rechts für gesellschaftliche Teilhabe – Staatenlosigkeit und Prekarität; Diskussion im Anschluss an den Vortrag; ANSGAR KREUTZER: Brot und Rosen. Die Symbolik von Inklusion und Exklusion aus systematisch-theologischer Sicht; Diskussion im Anschluss an den Vortrag; Schlussdiskussion; EDELTRAUD KOLLER: Das Konzept der Werke der Barmherzigkeit. Ein Instrument für die Gestaltung von sozialem Ein- und Ausschluss;Koller, Edeltraud ; Rosenberger, Michael ; Küberl, Franz ; Ottenheijm, Eric ; Hochleitner, Martin ; Baumann, Klaus ; Scherschel, Karin ; Kreutzer, Ansga