Analysis of biologically active substances using modern analytical methods

Tato práce se zabývá selektivní izolací hydrofobinu SC3 s využitím polytetrafluorethylenových mikročástic a jeho následnou identifikací. V další části byl popsán proces charakterizace azaphilovových pigmentů mořské houby Talaromyces albobiverticillius. V neposlední řadě byla věnována pozornost komplexnímu studiu medovin se zaměřením na nalezení vhodných ukazatelů pro kontrolu jejich kvality.This work deals with selective isolation of hydrophobin SC3 using polytetrafluoroethylene microparticles and its subsequent identification. In the next part the whole process of characterization of azaphilone pigments of Talaromyces albobiverticillius was described. Last but not least, attention was paid to the complex study of mead with a focus on finding suitable indicators for quality control of mead.Fakulta chemicko-technologickáDokončená práce s úspěšnou obhajobo

Rychlá HPLC/MS/MS analýza profilu a obsahu fenolických látek pro hodnocení kvality medovin

The monitoring of phenolic compounds in mead is a useful tool for the evaluation of its quality and potential adulteration because the profile and content of phenolic compounds strongly depend on the amount and type of honey used for mead production and on the technological process. Therefore, the aim of this study was the optimization of rapid reversed-phase high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry for the determination of 23 phenolic compounds in 22 mead samples. The isolation of monitored phenolic compounds was performed using liquid-liquid extraction with a mixture of diethyl ether and ethyl acetate. 3,4-dihydroxybenzoic, 4-hydroxybenzoic, caffeic, p-coumaric, salicylic, chlorogenic, gentisic, gallic and ferulic acids, together with apigenin, quercetin and 3,4-dihydroxybenzaldehyde were the most frequently occurred phenolic compounds in mead extracts. The instrumental limits of detection and quantification were for all compounds below 20 ug/L and 65 ug/L, respectively. Among the samples studied, four meads contained a low total amount of phenolic compounds (below 10 mg/L), and two of them did not even exceed 2 mg/L. Moreover, a very high concentration of vanillin as a flavouring was observed in one of those samples.Sledování fenolických sloučenin v medovině je užitečným nástrojem pro hodnocení její kvality a možného falšování, protože profil a obsah fenolických sloučenin silně závisí na množství a druhu medu použitého při výrobě medoviny a na technologickém postupu. Cílem této studie byla optimalizace rychlé vysokoúčinné kapalinové chromatografie v systémech s obrácenými fázemi ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií pro stanovení 23 fenolických sloučenin ve 22 vzorcích medoviny. Izolace sledovaných fenolických sloučenin byla provedena pomocí extrakce kapalina-kapalina směsí diethyletheru a ethylacetátu. Kyselina 3,4-dihydroxybenzoová, 4-hydroxybenzoová, kávová, p-kumarová, salicylová, chlorogenová, gentisová, galová a ferulová spolu s apigeninem, kvercetinem a 3,4-dihydroxybenzaldehydem byly nejčastěji se vyskytujícími fenolickými sloučeninami v medovinových extraktech. Instrumentální limity detekce a kvantifikace byly pro všechny sloučeniny pod 20 ug/l a 65 ug/l. Mezi studovanými vzorky čtyři medoviny obsahovaly nízké celkové množství fenolických sloučenin (pod 10 mg/l) a dvě z nich dokonce nepřesáhly 2 mg/l. Navíc byla v jednom z těchto vzorků pozorována velmi vysoká koncentrace vanilinu jako ochucovadla

HPLC/MS/MS analysis of polyphenolic compounds in meads

Medovina je alkoholický nápoj, k jehož tradiční výrobě se používá fermentovaná směs medu a vody, ale i ovocné šťávy (melomel) nebo koření a byliny (metheglin). Med obsahuje sacharidy, proteiny, enzymy, aminokyseliny, vitamíny, minerály a fenolické látky. Složení medoviny a obsah fenolických látek záleží vždy na konkrétním typu medu, který byl na výrobu medoviny použit a na technologickém procesu. Fenolické látky jsou sloučeniny, odvozené od sekundárních metabolitů rostlin, které jsou charakteristické svými antioxidačními vlastnostmi. Cílem této práce bylo stanovení 23 fenolických látek v medovinách,pomocí RP-HPLC/MS. Optimalizovaná separace trvala pouze 8 minut. Mezi analyzovanými vzorky medovin byl nalezen vzorek, který neobsahoval běžně se vyskytující fenolické látky. Jednalo se zřejmě o falzifikát a tento vzorek medoviny nebyl vyroben z medu. Na základě výsledků této práce by analýza fenolických látek mohla sloužit jako jeden z parametrů k ověřování kvality medovin, protože pokud se v medovině fenolické látky nevyskytují, znamená to, že při výrobě této medoviny nebyl použit med nebo byl použit med nekvalitní.Mead is alcoholic beverage created by fermenting honey with water and yeast, sometimes can also be added various fruits juice (Melomel), herbs or spices (Metheglin). Honey is composed of saccharides, proteins, enzymes, amino acids, vitamins, minerals and phenolic compounds. Phenolic compounds content in meads depends on honey and used ingredients. Phenolic compounds profile is strongly influenced by the addition of fruit juices and herbal extracts. It is also changed during technological processes, such as fermentation, heat treatment, storage. In this work the quantitative analysis of 23 selected polyphenolic compounds was performed using reversed-phase high-performance liquid chromatography (HPLC) separation coupled with mass spectrometric (MS) detection. Optimized HPLC/MS separation was carried out in 8 min. The mead without any honey phenolic compounds was found in one studied sample, which can be probably caused by falsification. Therefore the monitoring phenolic profile in mead can help to verify quality of mead

HPLC/MS/MS analysis of polyphenolic compounds in meads

Medovina je alkoholický nápoj, k jehož tradiční výrobě se používá fermentovaná směs medu a vody, ale i ovocné šťávy (melomel) nebo koření a byliny (metheglin). Med obsahuje sacharidy, proteiny, enzymy, aminokyseliny, vitamíny, minerály a fenolické látky. Složení medoviny a obsah fenolických látek záleží vždy na konkrétním typu medu, který byl na výrobu medoviny použit a na technologickém procesu. Fenolické látky jsou sloučeniny, odvozené od sekundárních metabolitů rostlin, které jsou charakteristické svými antioxidačními vlastnostmi. Cílem této práce bylo stanovení 23 fenolických látek v medovinách,pomocí RP-HPLC/MS. Optimalizovaná separace trvala pouze 8 minut. Mezi analyzovanými vzorky medovin byl nalezen vzorek, který neobsahoval běžně se vyskytující fenolické látky. Jednalo se zřejmě o falzifikát a tento vzorek medoviny nebyl vyroben z medu. Na základě výsledků této práce by analýza fenolických látek mohla sloužit jako jeden z parametrů k ověřování kvality medovin, protože pokud se v medovině fenolické látky nevyskytují, znamená to, že při výrobě této medoviny nebyl použit med nebo byl použit med nekvalitní.Mead is alcoholic beverage created by fermenting honey with water and yeast, sometimes can also be added various fruits juice (Melomel), herbs or spices (Metheglin). Honey is composed of saccharides, proteins, enzymes, amino acids, vitamins, minerals and phenolic compounds. Phenolic compounds content in meads depends on honey and used ingredients. Phenolic compounds profile is strongly influenced by the addition of fruit juices and herbal extracts. It is also changed during technological processes, such as fermentation, heat treatment, storage. In this work the quantitative analysis of 23 selected polyphenolic compounds was performed using reversed-phase high-performance liquid chromatography (HPLC) separation coupled with mass spectrometric (MS) detection. Optimized HPLC/MS separation was carried out in 8 min. The mead without any honey phenolic compounds was found in one studied sample, which can be probably caused by falsification. Therefore the monitoring phenolic profile in mead can help to verify quality of mead

Stanovení 5-hydroxymethylfurfuralu a vybraných sacharidů v medovinách

This work is focused on determination of 5-hydroxymethylfurfural (HMF), glucose, fructose and sucrose in meads. Reversed-phase high performance liquid chromatography with spectrophotometric detection was used for the separation of HMF. Saccharides were separated using hydrophilic interaction liquid chromatography with refractive index detector. These techniques were employed for determination of the content of HMF and saccharides in 23 samples of meads obtained from different producers. The content of these compounds is strongly dependent on the technological process of mead production and could be used as a marker of mead quality. The content of HMF is lower in samples obtained from beekeepers than in samples purchased in local stores.Tato práce je zaměřena na stanovení 5-hydroxymethylfurfuralu (HMF), glukosy, fruktosy a sacharosy v medovinách. Pro stanovení HMF byla použita vysokoúčinná kapalinová chromatografie v systémech s obrácenými fázemi se spektrofotometrickou detekcí. Sacharidy byly separovány s využitím chromatografie hydrofilních interakcí s refraktometrickou detekcí. Pomocí výše zmíněných separačních technik byl stanoven obsah HMF a sacharidů ve 23 vzorcích medovin získaných od různých výrobců. Jejich obsah se lišil v závislosti na technologickém postupu výroby medoviny a mohl by být použit jako ukazatel kvality medovin. Obsah HMF byl nižší u vzorků medovin získaných od včelařů než u vzorků medovin získaných v místní obchodní síti

Natural representation of carotenoids in Brazilian fruit

Tato práce je zaměřena na extrakci karotenoidů hexanem a ethylacetátem ve dvou druzích brazilského ovoce: Pequi a Ora pro nobis. V další fázi byla provedena optimalizace separace karotenoidů pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie ve spojení s hmotnostní spektrometrií (HPLC/MS). Jelikož přirozené složení karotenoidů v tomto ovoci nebylo dosud zkoumáno, byla cílem této práce byla snaha o identifikaci jednotlivých karotenoidů.This work is focused on the extraction of carotenoids with hexane and ethyl acetate in two types of Brazilian fruit: Pequi and Ora for nobis. The optimization of carotenoid separation by high performance liquid chromatography coupling with mass spectrometry (HPLC/MS) was performed in the next phase. Since the natural carotenoids composition in this fruit has not yet been studied, the aim of this work was to identify individual carotenoids