Hairy cell leukemia: a histo-cytochemical and ultra-structural study

We studied five patients with hairy cell leukemia (HCL) diagnosed within the last ten years at the Department of Hematology of Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) - Escola Paulista de Medicina. Our purpose was to analyze the value of transmission electron microscopy (TEM) by comparing this method with the conventional ones. At diagnosis, patients presented weight loss, spleen enlargement and hairy cells (HC) in peripheral blood and bone marrow slides. HC was characterized by morphology and tartrate test resistance in the acid phosphatase reaction (TRAP). At the evaluation time, the amount of HC ranged from 1% to 85% of WBC count. All patients, except two, had phenotype B. In these last two, TRAP as well as phenotype B could not be documented due to low HC numbers in their exams. Cytoplasmatic projections and the absence of lamellar ribosomic complex were the most frequent ultrastructural findings, even in those patients with the lowest HC numbers. Based on these features, TEM is an efficient method for searching for HC at HCL diagnosis and during the course of the disease.Estudamos cinco pacientes com leucemia de células pilosas (LCP), diagnosticada nos últimos dez anos na Disciplina de Hematologia da Escola Paulista de Medicina. O principal objetivo foi analisar o valor da microscopia eletrônica de transmissão (MET) pela comparação deste método com os convencionais. Pacientes apresentavam no diagnóstico perda de peso, esplenomegalia e células pilosas (CP) no sangue periférico e medula óssea. As CP foram caracterizadas pela morfologia e resistência ao tartarato na reação de fosfatase ácida (FATR). Na época em que foram avaliados, a quantidade de CP variou de 1 a 85% da leucometria. Todos os pacientes tinham fenótipo B, excetuando-se dois nos quais FATR e imunofenótipo não puderam ser documentados devido ao baixo número de CP no sangue periférico e medula óssea. Projeções citoplasmáticas e ausência de complexo ribosômico lamelar foram os mais freqüentes achados na MET, mesmo nos pacientes com baixa porcentagem de CP. Baseado nestes achados concluímos que MET é um método eficiente no diagnóstico e evolução da LCP.Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)UNIFESPSciEL

Fluorescent in-situ hybridization (FISH) for BCR/ABL in chronic myeloid leukemia after bone marrow transplantation

CONTEXT: Identification of Philadelphia chromosome or BCR/ABL gene rearrangement in chronic myeloid leukemia is important at diagnosis as well as after treatment. OBJECTIVE: To compare the results of karyotyping using fluorescent in-situ hybridization (FISH) upon diagnosis and 1 year after bone marrow transplantation in 12 patients. TYPE OF STUDY: Diagnostic test and residual disease detection. SETTING: Hematology and Hemotherapy Department, Federal University of São Paulo/Escola Paulista de Medicina, São Paulo, Brazil. SAMPLE: 12 patients with chronic myeloid leukemia at diagnosis and 1 year after bone marrow transplantation. DIAGNOSTIC TEST: Karyotyping was done in the usual way and the BCR/ABL gene-specific probe was used for FISH. MAIN MEASUREMENTS: Disease at diagnosis and residual. RESULTS: At diagnosis, 10 patients presented t(9;22)(q34.1;q11) as well as positive FISH. Two cases did not have metaphases but FISH was positive. After bone marrow transplantation, 8 patients presented normal karyotype, 1 had persistence of identifiable Philadelphia chromosome and 3 had no metaphases. Two cases showed complete chimera and 2 had donor and host cells simultaneously. FISH was possible in all cases after bone marrow transplantation and confirmed the persistence of identifiable Philadelphia chromosome clone in one patient, and identified another that did not present metaphases for analysis. Cases that showed mixed chimera in karyotype were negative for BCR/ABL by FISH. CONCLUSION: The applicability of FISH is clear, particularly for residual disease detection. Classical and molecular cytogenetics are complementary methods.CONTEXTO: Na leucemia mielóide crônica, a detecção do cromossomo Philadelphia ou o rearranjo gênico BCR/ABL é importante tanto ao diagnóstico como após o tratamento. OBJETIVO: Comparar os resultados do cariótipo com a hibridação in situ por fluorescência ao diagnóstico e, após um ano de transplante de medula óssea, em 12 pacientes com leucemia mielóide crônica. TIPO DE ESTUDO: Teste diagnóstico e detecção de doença residual. LOCAL: Disciplina de Hematologia e Hemoterapia da Universidade de São Paulo/Escola Paulista de Medicina. AMOSTRA: 12 pacientes com leucemia mielóide crônica ao diagnóstico e um ano após transplante de medula óssea. TESTE DIAGNÓSTICO: A análise do cariótipo (forma clássica) e a hibridação in situ por fluorescência com a sonda específica para os genes BCR/ABL. VARIÁVEIS ESTUDADAS: Doença ao diagnóstico e residual. RESULTADOS: Ao diagnóstico, 10 pacientes apresentaram t(9;22)(q34.1;q11) no cariótipo assim como pela hibridação in situ por fluorescência. Dois casos em que na citogenética não havia mitoses, apresentaram rearranjo pela hibridação in situ por fluorescência. Após o transplante de medula óssea, o cariótipo mostrou ausência do cromossomo Philadelphia em 8 casos, persistência em um e ausência de metáfases em três. Em dois casos havia quimera completa e em outros dois havia concomitância de células do doador e do receptor. A hibridação in situ por fluorescência foi possível em todos os casos após o transplante de medula óssea, confirmando a persistência do clone cromossomo Philadelphia num paciente em que o cariótipo também havia mostrado e identificando noutro em que não havia metáfases. Os casos de quimera mista foram negativos para BCR/ABL pela hibridação in situ por fluorescência. CONCLUSÃO: Ficou evidente a aplicabilidade da hibridação in situ por fluorescência, particularmente na detecção de doença residual. A citogenética clássica e a molecular são métodos complementares.Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) Escola Paulista de Medicina Discipline of Hematology and HemotherapyUNIFESP, EPM, Discipline of Hematology and HemotherapySciEL

Combined method for simultaneous morphology, immunophenotype and karyotype (MAC) in leukemias

In the present study, a combined method (CM) for attaining simultaneous identification of leukemic cell morphology, karyotype and immunophenotype has been evaluated in 21 patients with acute leukemia and 1 with CML in blast crisis were studied for morphology, citochemistry, immunophenotype and karyotype. Karyotype was performed in a bone marrow sample by using conventional techniques. In each case, direct method (DM) and/or three cultures were tried. The CM consisted in separating a small part of the material resulting from any of the cultures or DM, preparing slides through cytospin and immunophenotyping through APAAP method using the same monoclonal antibodies (MoAb) as for diagnosis. In 14 cases, the metaphases proved positive to the MoAb: in 4, the cells with abnormality had their origin defined; in other 4 the karyotype was normal preventing any identification; 6 cases had minimal abnormalities not visible through CM; and in two cases abnormal karyotypes were detected only in the cultures with GM-CSF. This study showed that CM is feasible in cases where evident numerical or structural chromosomal abnormalties are present.Este trabalho avaliou um método combinado (MC) para identificação simultânea da morfologia, cariótipo e imunofenótipo da célula leucêmica. Foram estudados 21 pacientes com leucemia aguda e 1 com LMC em crise blástica através da morfologia, citoquimica, imunofenotipagem e citogenética. O cariótipo foi feito em material proveniente da medula óssea pelas técnicas convencionais e para cada caso, foi feito o método direto (MD) e/ou três culturas. O MC consistia em separar pequena parte do material de qualquer cultura ou MD, preparar as laminas através de citocentrífuga e fazer a imunofenotipagem pelo método do APAAP com os mesmos anticorpos monoclonais (AcMo) usados ao diagnóstico. Em 14 casos as metáfases mostraram positividade para os AcMo: em 4 as células com anormalidades tiveram sua origem definida, em 4 casos o cariótipo era normal impedindo identificações e 6 tinham aberrações mínimas impossíveis de serem vistas através do MC. Em dois casos o cariótipo anormal foi encontrado apenas nas culturas com GM-CSF. O estudo mostrou que o MC é válido para casos com alterações cromossômicas numéricas ou estruturais evidentes.Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Escola Paulista de Medicina (EPM)UNIFESP, EPMSciEL

Prognostic factors in non-Hodgkin lymphomas

CONTEXT: In Hodgkin's disease, each clinical or pathologic stage can be related to the extent of the area involved and predicts the next anatomical region at risk for tumor dissemination. OBJECTIVE: To determine the best prognostic factors that could predict survival in non-Hodgkin lymphoma cases. DESIGN: A retrospective study. LOCATION: Department of Hematology and Transfusion Medicine, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) - Escola Paulista de Medicina. PARTICIPANTS: 142 patients with non-Hodgkin lymphoma diagnosed between February 1988 and March 1993. MAIN MEASUREMENTS: Histological subset, Sex, Age, Race, B symptoms, Performance status, Stage, Extranodal disease, Bulk disease, Mediastinal disease, CNS involvement, BM infiltration, Level of DHL, Immunophenotype. RESULTS: In the first study (113 patients), the following variables had a worse influence on survival: yellow race (P<0.1); ECOG II, III e IV (P<0.1) and extranodal disease (P<0.1) for high grade lymphomas; constitutional symptoms (P<0.1), ECOG II, III e IV (P<0.1) and involvement of CNS (P<0.1) for intermediate grade and the subtype lymphoplasmocytoid (P=0.0186) for low grade lymphomas. In the second survey (93 patients), when treatment was included, the variables related to NHL survival were: CNS involvement (P<0.1) for high grade lymphomas, constitutional symptoms (P<0.1), ECOG II, III, IV (P=0.0185) and also CNS involvement (P<0.1) for the intermediate group. There were no variables related to the survival for low-grade lymphomas. CONCLUSIONS: The intermediate grade lymphomas were more compatible with data found in the literature, probably because of the larger number of patients. In this specific case, the treatment did not have an influence on the survival.CONTEXTO: Na doença de Hodgkin, cada estágio clínico ou patológico pode ser relacionado com a extensão da área envolvida e predizer a próxima região anatômica de risco para disseminação. OBJETIVO: Estabelecer os fatores prognósticos que melhor predizem sobrevida em LNH. TIPO DE ESTUDO: Estudo retrospectivo LOCAL: Disciplina de Hematologia e Hemoterapia, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) - Escola Paulista de Medicina. PARTICIPANTES: 142 pacientes com LNH diagnosticados entre fevereiro de 1988 e março de 1993. VARIÁVEIS ESTUDADAS: Tipo histológico, sexo, idade, raça, sintomas, sitação performance, estágio, doença extranodal, desenvolvimento de Bulk, comprometimento mediastinal, envolvimento do SNC, infiltração da medúla óssea, nível de desidrogenose láctica, fenótipo imune. RESULTADOS: Ao primeiro estudo (113 pacientes), as seguintes variáveis tiveram uma pior influência na sobrevida: raça amarela (P<0.1); ECOG II, III e IV (P<0.1) e doença extranodal (P<0.1) para os linfomas de alto grau; sintomas constitucionais (P<0.1), ECOG II, III e IV (P<0.1) e envolvimento de SNC (P<0.1) para os linfomas de grau intermediário e o subtipo linfoplasmocitóide (P=0.0186) para os linfomas de baixo grau. Ao segundo estudo (93 pacientes), quando inclui-se o tratamento, as variáveis relacionadas a sobrevida foram : envolvimento de SNC (P<0.1) para o linfomas de alto grau; sintomas constitucionais (P<0.1), ECOG II, III, IV (P=0.0185) e envolvimento de SNC (P<0.1) para o grupo intermediário. Nenhuma variável relacionou-se com a sobrevida para os linfomas de baixo grau. CONCLUSÕES: Os linfomas de grau intermediário, provavelmente devido ao maior número de pacientes, foram mais compatíveis com os dados encontrados na literatura. Neste caso específico, o tratamento não influenciou a sobrevida.Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)UNIFESPSciEL

Karyotype of cryopreserved bone marrow cells

The analysis of chromosomal abnormalities is important for the study of hematological neoplastic disorders since it facilitates classification of the disease. The ability to perform chromosome analysis of cryopreserved malignant marrow or peripheral blast cells is important for retrospective studies. In the present study, we compared the karyotype of fresh bone marrow cells (20 metaphases) to that of cells stored with a simplified cryopreservation method, evaluated the effect of the use of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) as an in vitro mitotic index stimulator, and compared the cell viability and chromosome morphology of fresh and cryopreserved cells whenever possible (sufficient metaphases for analysis). Twenty-five bone marrow samples from 24 patients with hematological disorders such as acute myeloid leukemia, acute lymphoblastic leukemia, myelodysplastic syndrome, chronic myeloid leukemia, megaloblastic anemia and lymphoma (8, 3, 3, 8, 1, and 1 patients, respectively) were selected at diagnosis, at relapse or during routine follow-up and one sample was obtained from a bone marrow donor after informed consent. Average cell viability before and after freezing was 98.8 and 78.5%, respectively (P < 0.05). Cytogenetic analysis was successful in 76% of fresh cell cultures, as opposed to 52% of cryopreserved samples (P < 0.05). GM-CSF had no proliferative effect before or after freezing. The morphological aspects of the chromosomes in fresh and cryopreserved cells were subjectively the same. The present study shows that cytogenetic analysis of cryopreserved bone marrow cells can be a reliable alternative when fresh cell analysis cannot be done, notwithstanding the reduced viability and lower percent of successful analysis that are associated with freezing.Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) Escola Paulista de Medicina Disciplina de Hematologia e HemoterapiaUNIFESP, EPM, Disciplina de Hematologia e HemoterapiaSciEL

AUTONOMIA UNIVERSITÁRIA EM SÃO PAULO: UMA BREVE ANÁLISE DOS INDICADORES DE EXPANSÃO NOS ÚLTIMOS TRINTA ANOS

Em 2019 as três universidades públicas do estado de São Paulo: UNESP, UNICAMP e USP, completam trinta anos de autonomia na gestão didático-científica, administrativa, financeira e patrimonial, modelo único no país, pois vincula a dotação orçamentária de cada uma das instituições à um percentual da arrecadação do Imposto sobre a Circulação de Mercadorias e Serviços – ICMS estadual. De metodologia predominantemente qualitativa e classificada como uma pesquisa do tipo exploratória e documental, este trabalho objetiva, à partir da apresentação e análise comparativa dos indicadores de desempenho relacionados ao ensino e a pesquisa, fazer algumas reflexões sobre os impactos da autonomia universitária nas três universidades públicas paulistas nestes trinta anos. Os resultados encontrados indicam, por um lado, significativa expansão do ensino superior público no estado de São Paulo, seja no número de cidades onde estão instalados os campi universitários, seja nos indicadores de produtividade relacionados aos cursos de graduação e pós-graduação, às vagas oferecidas, ao número de alunos matriculados e aos títulos concedidos, além das publicações científicas. Esse crescimento é atribuído em grande parte ao modelo de autonomia universitária implantado em 1989 e que será discutido neste trabalho. Por outro lado, será apresentada uma preocupação surgida nos últimos anos, a queda na arrecadação do ICMS estadual e do consequente repasse financeiro às universidades, o que tornou diante da autonomia plena, um desafio maior para a gestão estratégica nessas IES

GESTÃO UNIVERSITÁRIA E OS DESAFIOS DA PANDEMIA: A MIGRAÇÃO DO ENSINO PRESENCIAL PARA O REMOTO EM UMA “IES” DO INTERIOR PAULISTA

Esta pesquisa descreve e analisa de forma breve, as ações da gestão universitária de uma IES e as percepções dos discentes de um de seus cursos, em relação a migração do ensino presencial para o remoto emergencial, disrupção esta imposta pelo cenário de pandemia provocado pela COVID 19 no ano de 2020. De abordagem predominantemente qualitativa e classificada como descritiva, utilizamos em seu delineamento a combinação de duas técnicas de coleta de dados: a documental e o levantamento, este realizado em dois momentos do cenário pandêmico. Os resultados encontrados demonstram que no aspecto gestão universitária, a IES agiu de forma rápida, proporcionando estrutura e capacitação necessária a todos os atores envolvidos no processo de ensino-aprendizagem, de maneira que a migração ocorresse em poucos dias. Em relação a percepção discente, estes relataram que é a primeira experiência com aulas remotas; não sentem dificuldades no formato, acesso e operação das plataformas; assistem as aulas de suas residências na forma síncrona; utilizam-se de PC ou Notebook e preferem que a duração das aulas remotas seja a mesma das presenciais. Como apoio didático às aulas remotas, a maioria dos discentes pesquisados se utiliza dos slides e textos postados antecipadamente pelos professores, revendo eventualmente as aulas que também são gravadas e disponibilizadas pela IES em uma plataforma própria. Sobre a condução das aulas no formato remoto por parte dos docentes, perceberam uma melhora ao longo do tempo, mas destacam que os professores poderiam melhorar ainda mais