Effect of tibolone on the morphology of skeletal muscle, liver enzymes and blood glucose level in castrated female rats

INTRODUÇÃO: O fígado é uma estrutura de elevada complexidade e é fundamental entender como determinadas substâncias podem afetar sua estrutura e suas funções. OBJETIVO: Analisar a influência da tibolona no metabolismo hepático por meio da avaliação de enzimas e metabólitos comumente utilizados em provas de função hepática. MÉTODOS: Foram utilizadas dez ratas Wistar, divididas em dois grupos: controle (n = 4) e tibolona (n = 6), em status de menopausa cirúrgica. A tibolona (1 mg) foi administrada diariamente por gavagem durante 20 semanas, com avaliação periódica do peso corporal. Após sedação, efetuou-se coleta de sangue para avaliação bioquímica de albumina (Alb) sérica, fosfatase alcalina (FA), transaminases (aspartato aminotransferase e alanina aminotransferase [AST/ALT]), gama-glutamiltranspeptidase (GGT) e glicose, mediante espectrofotometria. O músculo esquelético da coxa foi avaliado por histomorfometria em cortes histológicos corados com hematoxilina e eosina (HE). RESULTADOS: Os animais do grupo tibolona mostraram menor peso corporal, alterações musculares esqueléticas e discretas alterações bioquímicas. Além disso, AST e FA estavam diminuídas e GGT estava mais elevada, porém sem significância estatística. A histomorfometria do músculo revelou uma tendência de menor volume celular nesse grupo. CONCLUSÃO: A tibolona, administrada em alta dose e por tempo prolongado, não interfere de forma significativa nas funções metabólicas e de síntese hepáticas, bem como na permeabilidade da membrana celular, entretanto parece modular a expressão genômica da GGT. A tibolona apresenta influência sistêmica associada a menor peso e diminuição da massa muscular e aumento significativo no peso relativo do fígado, além de alteração da glicogenólise hepática e muscular, da gliconeogênese hepática e dos níveis de glicose circulante

Efeito do uso prolongado de tibolona no endométrio de ratas castradas: análise morfológica e imuno-histoquímica

A tibolona é um esteróide sintético com ações seletivas tanto estrogênicas, quanto progestogênicas e androgênicas. É o primeiro representante dos chamados reguladores de atividade estrogênica seletiva nos tecidos. Alguns estudos sugerem que o modo de ação da tibolona se faz da mesma forma tanto em modelo animal quanto em humanos. A pesquisa atual é um estudo de duração prolongada que deseja avaliar a ação de alta dose da tibolona no endométrio de ratas castradas. O projeto tem como objetivos comprovar a ação da tibolona no endométrio de ratas castradas e verificar a expressão da proteína Ki-67 (proliferação celular). Foram utilizadas 15 ratas albinas castradas da linhagem Wistar, com idade de 8 semanas e peso médio de 250g. A um grupo de 9 ratas foi administrada tibolona na dose de 1mg/dia por animal o que corresponde a cerca de 4mg por kg/pc. O fármaco foi administrado através de entubação esofágica durante um período ininterrupto de 20 semanas. O grupo controle foi composto de 6 ratas, recebendo apenas o veiculo carboximetilcelulose durante o mesmo período. Após as 20 semanas, os animais foram sacrificados e o útero foi retirado e analisado tanto pela histopatologia (morfometria e morfologia) quanto pela imuno-histoquímica. A avaliação histopatológica foi feita pela técnica habitual com coloração pela hematoxilina e eosina, e a avaliação da proliferação celular pela quantificação de células marcadas imuno-histoquimicamente para o antígeno Ki-67. Para análise dos resultados foram usados o teste T de Student e o teste não paramétrico de Mann- Whitney. Foi fixado em 5% (p<0,05) o nível de significância para rejeição da hipótese de nulidade. No grupo tibolona, os úteros se apresentaram bem desenvolvidos e houve aumento significativo (p0,001) de todos os parâmetros histomorfométricos (espessura do epitélio endometrial, espessura do estroma endometrial, área endometrial, número de glândulas endometriais e espessura do miométrio). A medida da área endometrial do grupo tibolona foi 10 vezes maior que no controle e o número absoluto de glândulas apenas 5 vezes. Essa diferença caracterizou uma menor densidade glandular no endométrio desse grupo. Em 8 dos 9 casos, o epitélio cilíndrico da cavidade endometrial tornava-se pavimentoso estratificado e a metaplasia escamosa recobria porções internas das glândulas em todos os casos. As ratas do grupo controle apresentaram útero atrofiado. Havia poucas glândulas de padrão tubular e escassa substância intercelular. Tais glândulas eram revestidas de epitélio cúbico que se estendia à superfície endometrial. A distribuição de células marcadas pelo anticorpo anti-Ki-67 foi mais freqüente no epitélio glandular, seguida do epitélio superficial. No grupo tratado com tibolona, o aumento de marcação pelo Ki-67 foi significativo (p<0,01). A tibolona administrada a ratas castradas em alta dose (1mg) e por período prolongado (20 semanas) produz no endométrio ação proliferativa e alteração da diferenciação celular (metaplasia escamosa), contudo, sem apresentar atipias celulares, nem lesão endometrial pré-maligna ou maligna nos animais estudadosTibolone is a synthetic steroid with selective actions, as estrogen, progestagen, and androgen. It is the first representative of the so-called regulatory activity of selective estrogen in tissues. Some studies suggest that the effect of tibolone is in the same way in both animal models and in humans. The current research is a study of long duration to evaluate the effect of high dose of tibolone in the endometrium of castrated rats. The project aims to demonstrate the effect of tibolone on the endometrium of castrated rats and detect the expression of the Ki-67 protein (cell proliferation). Fifteen castrated albino Wistar rats were used. Tibolone was administered to a group of 9 rats at a dose of 1mg/day per animal which is about 4mg per kg/bw. The drug was administered by esophagic intubation during an uninterrupted period of 20 weeks. The control group was composed of 6 rats, receiving only the vehicle carboxymethylcellulose during the same period. After the 20 weeks, the animals were euthanized and the uterus was removed and examined by histopathology (morphometry and morphology) and immunohistochemistry. The histopathological evaluation was made by the usual technique with the hematoxylin and eosin staining, and expression of Ki-67, by immunohistochemistry. Student's t test and non-parametric Mann-Whitney were used to analyze the results. It was set at 5% (P<0.05) the level of significance to reject the null hypothesis. In the tibolone group, the uterus was well developed and there was significant increase (P0.001) of all histomorphometric parameters (thickness of the endometrial epithelium, thickness of endometrial stroma, endometrial area, number of endometrial glands, and thickness of the myometrium). The extent of the area of endometrial tibolone group being 10 times higher than in the control and the absolute number of glands only about 5 times, characterized a higher density of endometrial glands than in the control group. In 8 of 9 cases, the cylindrical epithelium in the endometrial cavity was locally stratified and flattened; this squamous metaplasia covered portions of the internal glands in all cases. The rats in the control group had atrophied uterus. There were little glands of tubular pattern and little intercellular substance. These glands were coated with cubic epithelium which extended to the endometrial surface. The distribution of cells marked by anti-Ki-67 was more frequent in the glandular epithelium, followed by the superficial epithelium. In the group treated with tibolone, the increase in Ki-67 marking was significant (P<0.01). Tibolone administered to castrated rats at high dose (1mg) and by prolonged period (20 weeks) induces proliferative action on the endometrium and change of cell differentiation (squamous metaplasia), however, without showing cellular atypia, or endometrial pre-malignant or malignant lesions, in the studied animals109f

Efeito da tibolona sobre o endométrio de ratas castradas Effect of tibolone on endometrium of castrated rats

OBJETIVO: avaliar o efeito do uso prolongado de alta dose de tibolona na morfologia do endométrio em ratas castradas. MÉTODOS: foram utilizadas 15 ratas Wistar, fêmeas, com idade de oito semanas e peso médio de 250 g. Todas as ratas foram submetidas à ooforectomia bilateral e 30 dias depois foi coletada citologia vaginal, verificando-se o status de menopausa. As ratas foram divididas aleatoriamente em dois grupos: o tratado (n=9) recebeu via oral 1 mg tibolona/dia; o controle (n=6) recebeu apenas solução do veículo carboximetilcelulose. Após 20 semanas de tratamento, todos os animais foram sedados e sacrificados por deslocamento cervical. Os úteros foram retirados e fixados em formol 10% tamponado. Ambos os cornos uterinos foram clivados em três regiões (proximal, medial, distal) e processados para inclusão em parafina. Cortes histológicos corados com hematoxilina-eosina foram submetidos à análise morfológica e morfométrica. Foram avaliados os seguintes parâmetros: espessura do epitélio superficial endometrial, espessura do estroma endometrial, área endometrial, número absoluto de glândulas endometriais e número de glândulas/área endometrial. Os dados obtidos foram comparados mediante o teste t de Student. RESULTADOS: no Grupo Tibolona os úteros se apresentaram bem desenvolvidos e houve aumento significativo (pPURPOSE: to evaluate the effect of long-term use of a high dose of tibolone on the morphology of the endometrium of castrated female rats. METHODS: fifteen female Wistar rats, aged eight weeks and weighting about 250 g were used. All the female rats were submitted to bilateral oophorectomy and 30 days afterwards, vaginal cytology was collected, to verify the menopause status. The female rats were randomly divided in two groups. The Treatment Group (n=9) received 1 mg of tibolone/day orally; the Control Group (n=6) received a solution of carboxymethylcellulose vehicle. After 20 weeks of treatment, all the animals were sedated and sacrificed by cervical dislocation. The uterus was removed and fixated in 10% buffer formaldehyde. Both uterine horns were divided in three regions (proximal, medial and distal) and processed to be included in paraffin. Histological sections, stained with hematoxylin-eosin were submitted to morphological and morphometrical analysis. The following parameters have been analyzed: thickness of the endometrial superficial epithelium, thickness of the endometrium stroma, endometrial area, absolute number of endometrial glands and number of glands/endometrial area. The data obtained were compared by the t-Student test. RESULTS: in the Tibolone Group, the uteri were well developed and there was a significant increase (p<0.01) of all the histomorphometric parameters. In some cases, the cylindrical epithelium became stratified, pavimentous and covered the internal portions of the glands, as well as of the endometrium cavity. Rats from the Control Group presented uterine atrophy. There were few tubular-like glands and scarce intercellular substance. Glands were covered by cubic epithelium which extended itself to the endometrial cavity. CONCLUSIONS: high doses of tibolone, given for long periods of time to castrated female rats, have an estrogenic effect which can be dose-dependent, causing proliferation in the endometrium and causing changes in the cell differentiation (squamous metaplasia), but do not lead to hyperplasia

Histomorfometria do tecido ósseo em ratas castradas tratadas com tibolona

INTRODUÇÃO E OBJETIVO: O efeito da tibolona utilizada em alta dose e por tempo prolongado foi analisado mediante estudo histomorfométrico de tíbias e fêmures de ratas castradas. MÉTODOS: O experimento utilizou 20 ratas Wistar, com peso médio de 250 g. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em três grupos: ooforectomizado recebendo tibolona (OVX + T) (n = 9), ooforectomizado (OVX) (n = 6) e grupo controle não ooforectomizado (C) (n = 5). Deu-se início ao protocolo experimental 30 dias após a ooforectomia, perdurando por 20 semanas, com administração de tibolona (1 mg/dia) a OVX + T e carboximetilcelulose a OVX. O grupo C não foi submetido a qualquer tratamento. Tíbias e fêmures direitos foram fixados em formol a 10% tamponado, descalcificados e processados para inclusão em parafina. Os cortes histológicos foram corados mediante hematoxilina-eosina para análise histomorfométrica. Mediram-se a espessura cortical e a cavidade medular em cortes transversais de tíbia e fêmur e percentual de porosidade e densidade trabecular em cortes longitudinais de fêmur. RESULTADO E DISCUSSÃO: Não houve diferença estatística entre OVX e OVX + T nas diversas análises. Os resultados demonstram que a tibolona não melhorou de forma significativa a qualidade óssea, porém preservou a massa óssea cortical, nas diáfises femoral e tibial, e o osso trabecular, nos côndilos femorais. O uso prolongado de tibolona em concomitância com alta dose pode ter influenciado tais efeitos, já que estudos recentes têm preconizado a utilização de doses mais baixas na prevenção da osteoporose. CONCLUSÃO: A ooforectomia ocasionou perda óssea nas regiões analisadas; a tibolona, apesar de não ter aumentado a massa óssea, manteve-a em níveis satisfatórios

Influence of estrogen deficiency and tibolone therapy on trabecular and cortical bone evaluated by computed radiography system in rats Influência da deficiência estrogênica e do tratamento com tibolona no osso trabecular e cortical avaliada pelo sistema de radiografia computadorizada em ratas

PURPOSE: To verify the effects of tibolone administration on trabecular and cortical bone of ovariectomized female rats by computed radiography system (CRS). METHODS: The experiment was performed on two groups of rats previously ovariectomized, one received tibolone (OVX+T) while the other did not (OVX), those groups were compared to a control group (C) not ovariectomized. Tibolone administration (1mg/day) began thirty days after the ovariectomy and the treatment remained for five months. At last, the animals were euthanized and femurs and tibias collected. Computed radiographies of the bones were obtained and the digital images were used to determine the bone optical density and cortical thickness on every group. All results were statistically evaluated with significance set at P<0.05%. RESULTS: Tibolone administration was shown to be beneficial only in the densitometric analysis of the femoral head, performing higher optical density compared to OVX. No difference was found in cortical bone thickness. CONCLUSION: Ovariectomy caused bone loss in the analyzed regions and tibolone administered in high doses over a long period showed not to be fully beneficial, but preserved bone mass in the femoral head.<br>OBJETIVO: Verificar o efeito da administração de tibolona no tecido ósseo cortical e trabecular de ratas castradas através de radiografia computadorizada. MÉTODOS: O experimento foi realizado em dois grupos de ratas previamente ooforectomizadas, onde um grupo recebeu tibolona (OVX+T) e o outro não (OVX). Esses grupos foram comparados a um grupo controle (C) não ooforectomizado. A administração de tibolona (1mg/dia) começou trinta dias após a ooforectomia e o tratamento teve duração de cinco meses. No final, os animais foram mortos e fêmures e tibias coletados. As radiografias computadorizadas dos ossos foram obtidas e as imagens digitais usadas para determinar a densidade óssea e a espessura cortical em todos os grupos. Todos os resultados foram avaliados estatisticamente com significância estabelecida a 5%. RESULTADOS: A administração de tibolona mostrou ser benéfica apenas para análise densitométrica da cabeça do fêmur, apresentando maiores valores de densidade comparada ao grupo OVX. Nenhuma diferença significativa foi encontrada para espessura óssea cortical. CONCLUSÃO: A ooforectomia ocasionou perda óssea nas regiões analisadas e a tibolona administrada, em dose elevada e durante um longo período, mostrou não ser totalmente benéfica, porém preservou a massa óssea na cabeça femoral