Estratégias para incrementar relaxamento cervical, resposta ovariana e produção de embriões em ovelhas submetidas a recuperação não-cirúrgica de embriões

Multiple ovulation and embryo transfer (MOET) play a key role in accelerating sheep farming, but it is still limited by obstacles such as embryo recovery technique and variability in the superovulatory (SOV) response. This study evaluates alternatives to these limitations, aiming to increase in vivo embryo production in sheep. The first chapter reviews some relevant points of non-surgical embryo recovery (NSER): ovine cervical anatomy, physiological mechanisms of cervical relaxation, and current cervical relaxation protocols (PRC). The second and third chapters evaluate the efficiency of PRC using zero (0.0mg), half (0.5mg), or full dose (1.0mg) of estradiol benzoate (EB) in synchronized and/or superovulated ewes and its effects on NSER feasibility and luteal function. Sheep were randomly assigned to receive 37.5 µg of d-cloprostenol i.m. and 0.0 mg (0EB group; n=12); 0.5 mg (0.5EB group; n=12) or 1.0 mg EB (1.0EB group, n=12) 16 h before and 50 IU oxytocin i.v. 20 minutes before the NSER. In synchronized sheep, NSER was performed in 91.7% (33/36) with a longer transposition duration with Hegar dilator and longer catheter-mandrel (P0.05) in the duration of uterine flushing or the rate of structure recovery. In superovulated ewes, there was no treatment or category effect (P>0.05) concerning NSER success. There was a reduction (P0.05). The hCG increased (P0.05) on functional luteolysis. The fifth chapter studies the effect of 250, 333, or 400 IU of a commercial pFSH (1FSH: 1LH) on follicular growth, SOV response, and embryo yield. Superovulated ewes with decreasing doses of 250 (G250), 333 (G333), or 400 IU (G400) of pFSH were submitted to NSER. Estrus response, estrus interval, CL and LUF counts and follicular growth did not differ (P>0.05) between groups. The treatments did not differ (P>0.05) in embryo yield, but G333 and G400 showed a tendency (P=0.06) to have a higher mean of recovered structures compared to G250. This study concludes that: 1) NSER can be successfully performed in different sheep breeds, regardless of category, using a cervical relaxation protocol without estradiol benzoate; 2) the use or not of EB affected the luteal function, interfering mainly in estradiol levels; 3) hCG treatment increased circulating P4 before NSER and may prevent early luteal regression; 4) protocols using 250, 333 and 400 IU of pFSH are efficient in promoting follicular growth and superovulatory responses, but 333 IU appears to be more efficient in increasing embryo yield. Keywords: Biotechnologies. Embryos. MOET. Transcervical.A múltipla ovulação e transferência de embriões (MOTE) desempenha papel fundamental na aceleração da ovinocultura, mas ainda está limitada à técnica de recuperação de embriões e a variabilidade na resposta superovulatória (SOV). Este estudo avalia alternativas a essas limitações, visando incrementar a produção de embriões in vivo em ovinos. O primeiro capítulo revisa alguns pontos relevantes da recuperação não cirúrgica de embriões (NSER): anatomia cervical ovina, mecanismos fisiológicos de relaxamento cervical e protocolos de relaxamento cervical atuais (PRC). O segundo e terceiro capítulos avaliam a eficiência de PRC com redução de benzoato de estradiol (BE) em ovelhas sincronizadas e/ou superovuladas e seus efeitos na exequibilidade da NSER e função luteal. As ovelhas foram aleatoriamente designadas para receber 37,5 µg de d-cloprostenol i.m. e 0,0 mg (0,0EB; n=12); 0,5 mg (0,5EB; n=12) ou 1,0 mg de EB (1,0EB, n=12) 16 h antes e 50 UI de ocitocina i.v. 20 minutos antes do NSER. Em ovelhas sincronizadas, a NSER foi realizada em 91,7% (33/36) com transposição cervical mais longa (P0,05) na duração da lavagem uterina nem na taxa de recuperação da estrutura. Em ovelhas superovuladas, não houve efeito de tratamento ou categoria (P>0,05) em relação ao sucesso de NSER. Houve redução (P0,05). A hCG aumentou (P0,05) sob a luteólise funcional. O quinto capítulo estuda o efeito de 250 (G250), 333 (G333) ou 400 UI (G400) de pFSH (1FSH:1LH) no crescimento folicular, resposta SOV e produção de embriões de ovelhas superovuladas submetidas a NSER. A resposta ao estro, o intervalo para o estro e as contagens de CL e LUF e crescimento folicular não diferiram (P>0,05) entre os grupos. Os tratamentos não diferiram (P>0,05) na produção de embriões, mas G333 e G400 mostraram uma tendência (P=0,06) a uma média de estruturas recuperados superior em relação ao G250. Este estudo conclui que: 1) NSER pode ser realizada com sucesso em diferentes raças de ovelhas, independentemente da categoria, utilizando um protocolo de relaxamento cervical sem benzoato de estradiol; 2) o uso ou não de EB afetou a função lútea, interferindo principalmente nos níveis de estradiol; 3) o tratamento com hCG aumentou o P4 circulante antes da NSER e pode prevenir a regressão luteal precoce; 4) protocolos usando 250, 333 e 400 UI de pFSH são eficientes na promoção do crescimento folicular e respostas superovulatórias, mas 333 UI parece ser mais eficiente no aumento população embrionária. Palavras-chave: Biotecnologias. Embriões. MOTE. Transcervical.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas GeraisCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio

Viability of the use of the gonadotrophic association for the induction of cyclicity in ewes outside the reproductive season

The association of progestogen and equine chorionic gonadotrophin (P4-eCG) is the best established protocol in the ovine species for estrus synchronization. This protocol has the best pregnancy rates obtained with both natural mating and artificial insemination, as well as the added benefits to the reproductive cycle, especially when using eCG. However, the eCG is not available alone for sale in all countries, so a commercial gonadotrophic association product (eCG + hCG) is required. In sheep, there are few studies involving the effects of adding hCG on ovulation induction protocol, specially comparing to the use of eCG alone. The objective of this study was to evaluate the efficacy of a P4-eCG+hCG protocol, compared to the conventional protocol P4 and P4-eCG alone, for induction of estrus and ovulation in prepubertal sheep during seasonal anestrous, based on the hypothesis that hCG associated with eCG would promote improvement in reproductive parameters. In a first experiment, 18 ewes were submitted to the following protocols: intravaginal device (DIV) containing medroxyprogesterone acetate (MAP) for 12 days (MAP; n = 13); 12-day DIV associated with 400IU eCG at DIV withdrawal; n = 26) or DIV for 12 days associated with 400IU eCG and 200IU hCG (eCG + hCG; n = 27) at DIV withdrawal. (n = 6 / group), and a greater follicular growth was observed in the groups treated with gonadotrophins compared to MAP alone (P <0.05). Progesterone levels nine days after treatments were higher in eCG + hCG compared to the other groups. Subsequently, 66 prepuberal ewes were submitted to the same treatments of experiment 1 and exposure to natural mounts with sheep. The rate of estrus manifestation was higher in eCG (88.5%, 23/26) and eCG + hCG (85.2%, 23/27), compared to MAP (33.3%, 4/12; P <0.05). The pregnancy rate was higher in eCG (34.6%, 9/26) than in MAP (0%, 0/13, P <0.05) and intermediate in the eCG + hCG group (18.6%; / 27). Serum progesterone levels did not differ between the eCG and eCG + hCG groups, with only one effect observed at the time Collectively, the results suggest that the association of eCG + hCG does not bring benefits in relation to the use of eCG alone.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESA associação de progestágeno e gonadotrofina coriônica equina (P4-eCG) é o protocolo melhor estabelecido na espécie ovina para sincronização de estro. Este protocolo tem as melhores taxas de prenhez obtidas tanto com cruzamento por monta natural como por inseminação artificial, e ainda pelos benefícios agregados ao ciclo reprodutivo, principalmente quando há utilização do eCG. No entanto, o eCG não se encontra disponível isoladamente para venda em todos os países, sendo então necessário a utilização de um produto comercial de associação gonadotrófica (eCG+hCG). Em ovinos, há poucos estudos envolvendo os efeitos da adição de hCG em protocolo de indução à ovulação, principalmente comparando ao uso de eCG isolado. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia de um protocolo P4-eCG+hCG, frente ao protocolo convencional P4-eCG e P4 isolado, para indução de estro e ovulação em cordeiras pré-púberes durante o anestro estacional, com base na hipótese de que o hCG associado ao eCG promoveria melhora nos parâmetros reprodutivos. No primeiro experimento, 18 fêmeas ovinas na contra-estação reprodutiva foram submetidas aos seguintes protocolos: dispositivo intravaginal impregnado com MAP (DIV) por 12 dias (MAP; n=63), DIV por 12 dias associado à 400UI de eCG na retirada do dispositivo (eCG; n=6) ou DIV por 12 dias associado à 400UI eCG e 200UI hCG (eCG+hCG; n=6) na retirada do dispositivo; para avaliação do desenvolvimento folicular, sendo observado um maior crescimento folicular nos grupos tratados com gonadotrofinas em comparação ao MAP (P<0,05). Os níveis de progesterona nove dias após os tratamentos foram superiores no eCG+hCG em comparação aos demais grupos. Posteriormente, 66 cordeiras pré-púberes foram submetidas aos mesmos tratamentos do experimento 1 e exposição à monta natural com carneiros. A taxa de manifestação de estro foi superior em eCG (88,5%; 23/26) e eCG+hCG (85,2%; 23/27), em comparação ao MAP (33,3%; 4/12; P<0,05). A taxa de prenhez foi superior no eCG (34,6%; 9/26) em relação ao MAP (0%; 0/13; P<0,05) e intermediária no grupo eCG+hCG (18,6%; 5/27). Os níveis de progesterona sérica não diferiram entre os grupos eCG e eCG+hCG, sendo observado apenas um efeito do momento. Coletivamente, os resultados sugerem que a associação de eCG+hCG não traz benefícios em relação ao uso de eCG isoladamente