Kétszer 1D kapilláris elektroforézis chip technológia = Microchip-based double 1D capillary electrophoresis

A projekt ütemezése során izoelektromos fókuszálás és zónaelektroforézis kisérleteket folytattunk különböző analitikai célokkal. Ebben szerepelt bakteriális fehérjék vizsgálata, optikai izomerek elválasztása, speciális detektálási technikák (pl. fluoreszcens) alkalmazásának megvizsgálása. A már rendelkezésre álló PrinCE moduláris "1D" kapilláris elektroforézis készüléken a kapilláris izoelektromos fókuszálás mobilizálási lépésének pulzáló módú elvégzésére a készülék alkalmas. Uncoated (kezeletlen) és coated (fedett) kapillárisok alkalmazásának összehasonlítása történt. Standard fehérjekeverékek és bakteriális sejtlizátumok analízise izoelektromos fókuszálással, tipikus izoelektroferogramok gyűjtése történt. A második dimenzió, vagyis elsősorban a zóna-elektroforetikus elválasztások esetében is több lépést végeztünk. Az injektált zónákat alkotó pufferhatású amfolit-komponensek és a második dimenzióban használt SDS együttes jelenléte elektroforézisre gyakorolt hatását vizsgáltuk. A témában közreműködő hazai és külföldi kutatók az elmúlt két évtizedben a projektben felvázolt kutatási területeken dolgoztak és dolgoznak. Szakmai eredményeik felölelik a kapilláris elektroforézis metodikai-technikai fejlesztésében és különböző alkalmazásokban való munkáik eredményeit. | The project prvided a possibility to make isoelectric focusing and zone-electrophoretic runs for a possible coupling this two techniques. First of all bacterial proteins, optical isomers were analysed, and the possibility of using fluorescens techniques were studied. The modular PRINCE electrophoresis equipment should the possibility to use a pulsed mode modification of isoelectric focusing. We compared the usability of coated and uncoated capillaries in IEF. Both, standard protein mixtures and also bacterial proteins were investigated. The second dimension, i.e. zone electrophoresis has been used. We tried the application of this method for the analysis of the ampholytes, which would be the most important question when the two technique is coupled sequentially. The researchers in this topic has been participating for long time in the developmenet and application of IEF and CE techniques. Their results provided a very good basis for the further developing steps

Az aktin citoszkeleton szabályozásának molekuláris aspektusai = Molecular Aspects of the Actin Cytoskeleton

Munkánk során számos - az aktin és az aktin citoszkeleton működésében fontos szerepet játszó - fehérje molekuláris tulajdonságait és kölcsönhatásait leírtuk. Folytattuk az aktin és miozin fehérjék kölcsönhatásának feltérképezését. Nemzetközi kooperációk keretei között gyors kinetikai módszereket alkalmazva jellemeztünk rovar (Drosophila) izomból származó miozint. Fluoreszcencia spektroszkópiai és kalorimetriai módszerekkel tanulmányoztuk az aktin kölcsönhatását toxikus peptidekkel (falloidin és jasplakinolid). A miozinok működésében meghatározó szerepet játszó nukleotidok, azokon belül is az ADP szerepét írtuk le részletesen egy összefoglaló cikkben. Vizsgáltuk a nem izom eredetű miozinok közül a patkányból származó miozin IX kinetikai tulajdonságait. Egy másik vizsgálatsorozatban a különböző emlős állatokból származó lassú és gyors miozin izoformák tulajdonságait írtuk le kinetikai módszerek segítségével. Ugyancsak nemzetközi együttműködés keretein belül tanulmányoztuk az aktinnak a forminokkal, a forminokon belül is az ún. Diaphanous Related forminokkal való kölcsönhatását. Megállapítottuk azt is, hogy az emlős (egér) sejtekből származó formin fragmentumok megváltoztatják az aktin filamentumok dinamikai tulajdonságait, konformációját. | We characterised a number of actin-binding proteins during the project. We described the dynamic aspects of the interaction between actin and myosin from rabbit skeletal muscle by using spectroscopic methods. Within the framework of international collaboration the properties of Drosophila flight muscle myosin was also investigated by rapid kinetic methods. We described the effect of toxic peptides (phalloidin and jasplakinolide) on the actin filaments by spectroscopic and calorimetric methods. By using rapid kinetic methods we studied the behaviour of a non-muscle myosin, rat myosin IX. In a separate study we described the differences between mysoin isoforms from various mammalian species. In another international collaboration we studied the interaction between actin and mammalian formins. We also showed by using specrtroscopic methods that these formin fragments change the dynamic and conformational properties of actin filaments

Involvement of serum retinoids and Leiden mutation in patients with esophageal, gastric, liver, pancreatic, and colorectal cancers in Hungary

AIM: To analyze the serum levels of retinoids and Leiden mutation in patients with esophageal, gastric, liver, pancreatic, and colorectal cancers. METHODS: The changes in serum levels of retinoids (vitamin A, α- and β-carotene, α- and β-cryptoxanthin, zeaxanthin, lutein) and Leiden mutation were measured by high liquid performance chromatography (HPLC) and polymerase chain reaction (PCR) in 107 patients (70 males/37 females) with esophageal (0/8), gastric (16/5), liver (8/7), pancreatic (6/4), and colorectal (30/21 including 9 patients suffering from in situ colon cancer) cancer. Fifty-seven healthy subjects (in matched groups) for controls of serum retinoids and 600 healthy blood donors for Leiden mutation were used. RESULTS: The serum levels of vitamin A and zeaxanthin were decreased significantly in all groups of patients with gastrointestinal (GI) tumors except for vitamin A in patients with pancreatic cancer. No changes were obtained in the serum levels of α- and β-carotene, α- and β-cryptoxanthin, zeaxanthin, lutein in patients with GI cancer. The prevalence of Leiden mutation significantly increased in all groups of patients with GI cancer. CONCLUSION: Retinoids (as environmental factors) are decreased significantly with increased prevalence of Leiden mutation (as a genetic factor) in patients before the clinical manifestation of histologically different (planocellular and hepatocellular carcinoma, and adenocarcinoma) GI cancer

Matematika

F

Matematika

2010. évi változatlan utánnyomás444 F

Antifungal activity of the primycin complex and its main components A1, A2 and C1 on a Candida albicans clinical isolate, and their effects on the dynamic plasma membrane changes

The in vitro antifungal activities of the macrolide lactone antibiotic complex primycin (PC) and its main components, A1 (50%), A2 (7.3%) and C1 (13%), against the opportunistic pathogenic fungus Candida albicans 33erg+ were determined by microdilution testing. The MIC100 values found, A2 (2 µg ml-1), PC (32 µg ml-1), A1 (32 µg ml-1) and C1 (64 µg ml-1), suggested that the biological activity of PC is highly dependent on the proportions of its constituents. In vivo measurements of the biophysical properties of plasma membranes were carried out by EPR spectroscopic methods, using the spin probe 5-(4,4- dimethyloxazolidine-N-oxyl)stearic acid. Conventional EPR measurements demonstrated altered phase transition temperatures (Tm) of the plasma membrane of strain 33erg+ as a consequence of treatment with PC or its constituents: for cells treated with 128 µg ml-1 PC, A1, A2 or C1 for 15 min, Tm was 17, 21, 14.5 and 15 °C, respectively, i.e. significantly higher than the Tm of untreated cells, 12 °C. The molecular motions of the near- surface hydrophobic region of the plasma membrane, estimated by saturation transfer EPR spectroscopy, reflected changes in the membrane phases after the treatment. Two physiological membrane phases were detected in control samples: liquid-ordered and liquid-disordered, characterized by molecular movements ~10-6- 10-8 s and ≥10-9 s. The cells treated with the investigated compounds showed the strong presence of a non-physiological gel phase additional to the above phases, characterized by movements ≤10-5 s