Obtenção e caracterização de anticorpo monoclonal murino anti-fator VIII da coagulação sangüínea Attainment and characterization of murine monoclonal anti-factor VIII antibodies

Entre os avanços da engenharia celular e biotecnologia nas últimas décadas, destaca-se a produção de anticorpos monoclonais murinos (AcMm) utilizados no aprimoramento diagnóstico nas rotinas laboratoriais. A produção de fator VIII de alta pureza sempre foi o desejo e a preocupação das indústrias de hemoderivados para tratamento de pacientes portadores de hemofilia A, porém este produto inexiste no Brasil, sendo necessária sua obtenção no mercado internacional a custos elevados. O trabalho tem por objetivo a produção de AcMm anti-fator VIII humano (FVIII H) através da expansão dos clones e caracterização imunoquímica do anticorpo. Camundongos Balb/c foram imunizados com FVIII H purificado como também proveniente de crioprecipitado e as células esplênicas dos animais foram fusionadas com células mielomatosas murinas segundo o método descrito por Kohler e Milstein para produção de híbridos em cultura. Foram testados 1.983 híbridos dos quais 105 foram submetidos à clonagem. Destes, 39 obtiveram monoclonalidade e 7 destes clones foram caracterizados através de técnicas de immunoblotting. Foram submetidas à purificação por cromatografia três imunoglobulinas de diferentes classes pertencentes aos clones LAMB1-10A1A4, LAMB1-17A1A1 e LAMB1-24A2A1. A imunoglobulina purificada pertencente ao clone LAMB1-10A1A4 foi adsorvida em coluna de imunoafinidade para purificação de concentrado de FVIII proveniente de crioprecipitado plasmático.<br>Among the advances in cellular engineering and biotechnology over the last decades, the production of murine monoclonal antibodies (AcMm), used to improve laboratory diagnoses, stands out. The production of very pure factor VIII has always been a concern of suppliers of blood products to treat patients with hemophilia A and this product is still not produced in Brazil. Hence, it can only be attained on the international market at a high cost. The aim of this work was to produce AcMm anti-factor VIII human (FVIIIh) by expanding clones and characterizing the antibodies by immunochemistry. Balb/c mice were immunized with FVIII both purified and from cryoprecipitation and the splenic cells of the animals were fused with myelomatous murine cells according to the method described by Kohler and Milstein to produce hybrids in a culture. A total of 1983 hybrids were tested and 105 were selected for cloning. Of these, 39 developed monoclonality and 7 of these clones were characterized through immunoblotting techniques. Three immunoglobulins from different classes, LAMB1-10A1A4, LAMB1-17A1A1 and LAMB1-24A2A1, were submitted to chromatography for purification. The purified immunoglobulin from the LAMB1-10A1A4 clone was adsorbed in the immunoaffinity column to purify the factor VIII concentrate coming from the plasmatic cryoprecipitate

Evaluation of platelet function and of serum fibrinogen levels in patients bitten by snakes of the genus Crotalus: preliminary report

Submitted by Guilherme Lemeszenski ([email protected]) on 2013-08-22T19:04:08Z No. of bitstreams: 1 S0036-46651991000300009.pdf: 117928 bytes, checksum: 30abc46c537d441fad2f2fdc2716cbf7 (MD5)Made available in DSpace on 2013-08-22T19:04:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 S0036-46651991000300009.pdf: 117928 bytes, checksum: 30abc46c537d441fad2f2fdc2716cbf7 (MD5) Previous issue date: 1991-06-01Made available in DSpace on 2013-09-30T17:42:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0036-46651991000300009.pdf: 117928 bytes, checksum: 30abc46c537d441fad2f2fdc2716cbf7 (MD5) S0036-46651991000300009.pdf.txt: 2 bytes, checksum: e1c06d85ae7b8b032bef47e42e4c08f9 (MD5) Previous issue date: 1991-06-01Submitted by Vitor Silverio Rodrigues ([email protected]) on 2014-05-20T13:38:46Z No. of bitstreams: 2 S0036-46651991000300009.pdf: 117928 bytes, checksum: 30abc46c537d441fad2f2fdc2716cbf7 (MD5) S0036-46651991000300009.pdf.txt: 2 bytes, checksum: e1c06d85ae7b8b032bef47e42e4c08f9 (MD5)Made available in DSpace on 2014-05-20T13:38:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S0036-46651991000300009.pdf: 117928 bytes, checksum: 30abc46c537d441fad2f2fdc2716cbf7 (MD5) S0036-46651991000300009.pdf.txt: 2 bytes, checksum: e1c06d85ae7b8b032bef47e42e4c08f9 (MD5) Previous issue date: 1991-06-01UNESP Hemocentro do Hospital das Clínicas Divisão de HemostasiaUNESP Faculdade de Medicina de Botucatu Depto. de UrologiaUNESP Faculdade de Medicina de BotucatuUNESP Faculdade de Medicina de Botucatu Departamento de Moléstias Infecciosas e ParasitáriasUNESP Centro de Estudos de Venenos e Animais PeçonhentosUNESP Hemocentro do Hospital das Clínicas Divisão de HemostasiaUNESP Faculdade de Medicina de Botucatu Depto. de UrologiaUNESP Faculdade de Medicina de BotucatuUNESP Faculdade de Medicina de Botucatu Departamento de Moléstias Infecciosas e ParasitáriasUNESP Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhento

Complicações da terapia anticoagulante com warfarina em pacientes com doença vascular periférica: estudo coorte prospectivo Complications of anticoagulant therapy with warfarin in patients with peripheral vascular disease: a cohort prospective study

OBJETIVO: Estudar prospectivamente a freqüência de complicações em pacientes tratados com warfarina e acompanhados no Ambulatório de Anticoagulação da Faculdade de Medicina de Botucatu da Universidade Estadual Paulista. MÉTODOS: Pacientes sorteados entre os agendados para consulta de junho de 2002 a fevereiro de 2004. Na primeira consulta, foi preenchida ficha com dados de identificação e clínicos. A cada retorno, ou quando o paciente procurou o hospital por intercorrência, foi preenchida ficha com a razão normatizada internacional, existência e tipo de intercorrência e condições de uso dos antagonistas da vitamina K. RESULTADOS: Foram acompanhados 136 pacientes (61 homens e 75 mulheres), 99 com tromboembolismo venoso e 37 com doença arterial; 59 pacientes eram de Botucatu, e 77, de outros municípios. Foram registradas 30 intercorrências: nove não relacionadas ao uso da warfarina e 21 complicações hemorrágicas (38,8 por 100 pacientes/ano). Uma hematêmese foi considerada grave (1,9 por 100 pacientes/ano). As demais foram consideradas moderadas ou leves. Não houve óbitos, hemorragia intracraniana ou necrose cutânea. A única associação significante foi da freqüência de hemorragia com nível médio de razão normatizada internacional. CONCLUSÃO: Nossos resultados mostram a viabilidade desse tratamento em pacientes vasculares em nosso meio, mesmo em população de baixo nível socioeconômico, quando tratados em ambulatório especializado.<br>OBJECTIVE: To prospectively study the frequency of complications in patients treated with warfarin followed at Botucatu Medical School. METHODS: Patients randomly selected among those with appointments scheduled from June 2002 to February 2004. At the first appointment, a protocol was filled with identification and clinical data. At every return or when the patient went to the hospital due to clinical events, another form was filled with the international normalized ratio, existence and type of clinical event and the conditions of use of vitamin K antagonists. RESULTS: A total of 136 patients (61 men and 75 women), were followed; 99 patients with venous thromboembolism and 37 with arterial disease; 59 were from Botucatu and 77 were from other municipalities. Thirty clinical events were registered: nine of them were not related to the use of warfarin and 21 were hemorrhagic complications (38.8 per 100 patients-year). One hematemesis was considered severe (1.9 per 100 patients-year). The others were considered moderate or mild. There were no deaths, intracranial hemorrhage or cutaneous necrosis. The only significant association was frequency of hemorrhage and average international normalized ratio level. CONCLUSION: Our results demonstrate the feasibility of this treatment in vascular patients in our country, even in socially and economically poor populations, when treated in specialized clinics