Extracción de productos extracelulares de aeromonas hydrophila y sus efectos en tilapia roja (oreochromis spp.) y cachama blanca (piaractus brachypomus)

Se obtuvo un extracto crudo toxigénico (ECT) de A. hydrophila en diversos medios de cultivo como caldo BHI con extracto de levadura, soya tripticasa (TSB) y medio de sales mínimas (MSM). Además, se usaron diversas técnicas de concentración como la precipitación con solventes ácidos y concentración por deshidratación a 4 ºC; como técnica integrada de cultivo y concentración se usó el cultivo sobre papel celofán. Los extractos se pasaron por columna de cromatografía (QAE)-Sephadex A-50 y se les efectuó electroforesis en SDS-PAGE. Se midió la actividad biológica in vitro (actividad hemolítica y proteolítica) e in vivo (toxicidad en peces). Los resultados indican que para la cepa de trabajo utilizada y bajo nuestras condiciones de cultivo (28 ºC) el medio óptimo para la obtención de extracto es el MSM, y la técnica de concentración más adecuada es la deshidratación a 4 ºC. El extracto obtenido en TBS tuvo una actividad hemolítica de 128 UH/μL, proteolítica de 38,4 UP/μL, produjo alta mortalidad en peces y severas lesiones multiorgánicas. La electroforesis reveló bandas nítidas de 50 a 52 kDa y 63 a 68 kDa, que pueden corresponder a b hemolisina y a a hemolisina y otras tenues de 30 a 36 kDa que pueden corresponder a la metaloproteasa termoestable.A toxigenic raw extract of A. hydrophila was obtained from diverse culture medium (BHI with extract of yeast, (TSB) y minimum salt medium (MSM)) and diverse concentration techniques. Extracts were processed by Sephadex A-50 (QAE) and SDS-PAGE electrophoresis. Biological activity was measured in vitro (hemolytic and proteolitic activity) and in vivo (toxicity in fish). The results indicate that the optimal culture condition was 28 ºC and MSM was the optimum medium to extract. Dehydration at 4 ºC was the most adequate concentration technique. TBS extract obtained had an hemolytic activityof 128 UH/μL and a proteolitic activity of 38.4 UP/μL and produced high fish mortality and severe multiorganic lesions. Electrophoresis revealed bands from 50 to 52 kDa y 63 to 68 kDa, that could correspond to the b hemolisina or a hemolisina y other from 30 to 36 kDa that could correspond to the thermostable metalloprotease

Aeromonas hydrophila Extracelullar Products Extraction and its Effects on Tilapia Roja (Oreochromis spp.) and Cachama Blanca (Piaractus brachypomus)

A toxigenic raw extract of A. hydrophila was obtained from diverse culture medium (BHI with extract of yeast, (TSB) y minimum salt medium (MSM)) and diverse concentration techniques. Extracts were processed by Sephadex A-50 (QAE) and SDS-PAGE electrophoresis. Biological activity was measured in vitro (hemolytic and proteolitic activity) and in vivo (toxicity in fish). The results indicate that the optimal culture condition was 28 ºC and MSM was the optimum medium to extract. Dehydration at 4 ºC was the most adequate concentration technique. TBS extract obtained had an hemolytic activity of 128 UH/μL and a proteolitic activity of 38.4 UP/μL and produced high fish mortality and severe multiorganic lesions. Electrophoresis revealed bands from 50 to 52 kDa y 63 to 68 kDa, that could correspond to the b hemolisina or a hemolisina y other from 30 to 36 kDa that could correspond to the thermostable metalloprotease

DYNAMICS OF GOBLET CELLS DURING INFECTION BY P. multocida AND B. bronchiseptica IN RABBITS

Se evaluó el número y las características histoquímicas de las células caliciformes (CC) en la cavidad nasal y la nasofaringe de conejos sanos y enfermos de septicemia y rinitis inducida por P. multocida y B. bronchiseptica. Se usó la técnica histoquímica de azul de Alciano y ácido Periódico de Schiff. Los resultados mostraron que la población de CC en ambas regiones anatómicas permaneció constante durante las diferentes etapas del desarro-llo de los conejos sanos, y estuvo entre 50-57 ±25 CC/mm de lámina basal. Se determinó el número de CC en el maxilocornete (63 ±24 CC/mm), en el septo nasal (53 ±18 CC/mm) y la nasofaringe (45 ±22 CC/mm). En todas las etapas del desarrollo de los conejos, regiones anatómicas y animales enfermos hubo predominancia de glicoproteínas ácidas. Los conejos septicémicos mostraron un incremento altamente signiÀcativo (P<0,01) en el número de CC comparado con los animales sanos y aquellos que sufrían de rinitis. Este estudio demostró un incremento en el número de CC y secreción de glicoproteínas ácidas durante la enferme-dad respiratoria de los conejos

CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN in vivo E in vitro DEL LIPOPOLISACÁRIDO DE Aeromonas hydrophila

A partir de una cepa de A. hydrophila aislada de un brote de enfermedad septicémica en Tilapia nilótica (Piaractus brachypomusoreochromis niloticus), se obtuvieron extractos de lipopolisacárido (LPS) crudo (29,5 mg/ml) y semipurificado (106,5 mg/ml) mediante la técnica fenol-agua caliente descrita por Westphal, Jann (1965). La presencia de proteína fue del 2,3% para el extracto crudo y de 0,1% para el semipurificado; la concentración de polisacáridos osciló entre el 15 y 26%. En electroforesis (SDS-PAGE) se observaron bandas de 14 Kd correspondientes al oligosacárido central y al lípido A del LPS. Tres ratones de 25-35 g fueron inoculados intraperitonealmente con 25 mg/Kg de LPS cru-do, a partir de la primera hora todos los animales mostraron erizamiento, taquipnea e inapetencia; microscópicamente se detectó congestión hepática y pulmonar, hemorragias pulmonares y renales, marginación leucocitaria en hígado y pulmón con predominio de polimorfo-nucleares neutrófilos (PMN) en todos los animales, mostrando un mayor efecto que el control inoculado con LPS de E. coli (Sigma®) a la misma concentración. In vitro el LPS crudo a concentración de 10, 20 y 30 µg/ml indujo proliferación de células mono-nucleares murinas (2 x 10 5 en 200 µl de medio DMEM) por incorporación de timidina tritiada; tanto el LPS control (E. coli), como el LPS crudo de A. hydrophila mostraron cuentas por minuto (CPM ) ascendentes de manera dosis dependiente, el LPS de A. hydrophila desencadeno una proliferación muy similar a la inducida por el control

Streptococcus agalactiae: HASTA AHORA EL ÚNICO Streptococcus PATÓGENO DE TILAPIAS CULTIVADAS EN COLOMBIA

Las estreptococosis son un conjunto de enfermedades ocasionadas por un grupo de cocos Gram positivos con similares signologías que involucran distintos órganos en los individuos afectados. La identiÀcación precisa de cada uno de estos microorganismos no se logra de manera deÀnitiva por los métodos tradicionales microbiológicos, por lo que se debe acudir a otro tipo de metodologías como las técnicas de biología molecular. En 1999 se identiÀcó por primera vez en Colombia la estreptococosis en híbridos de tilapias de cultivo. La pos-terior secuenciación del ADN de distintos aislamientos obtenidos de varias regiones del país demostró un 98,8% de aÀnidad con el Streptococcus agalactiae. El presente estudio pretende deÀnir si hasta la fecha existe solo esta especie de Streptococcus en el país causan-do infección o enfermedad en tilapias de cultivo o, por el contrario, son varias las especies que intervienen en los cuadros infecciosos. Se evaluaron aislamientos de tejidos, de agua y fango de los sitios de cultivo, así como de lugares de expendio de tilapia roja (Oreochromissp.), utilizando técnicas microbiológicas, inmunoperoxidasa indirecta (IPI) y PCR, espe-cíÀcas para el aislamiento e identiÀcación del S. agalactiae. Los resultados del presente estudio demostraron que hasta la fecha en el país únicamente se ha identiÀcado la especie S. agalactiae causando infección o enfermedad en tilapias. No tenemos evidencia de que otros Streptococcus reportados internacionalmente como S. iniae y otros Gram positivos causen estreptococosis en Colombia.La tilapia parece ser el principal reservorio del S. agalactiae en el país, y el riesgo zoonótico, aunque existe, es mínimo si se toman las medidas apropia-das de bioseguridad