Extracción de productos extracelulares de aeromonas hydrophila y sus efectos en tilapia roja (oreochromis spp.) y cachama blanca (piaractus brachypomus)

Abstract

Se obtuvo un extracto crudo toxigénico (ECT) de A. hydrophila en diversos medios de cultivo como caldo BHI con extracto de levadura, soya tripticasa (TSB) y medio de sales mínimas (MSM). Además, se usaron diversas técnicas de concentración como la precipitación con solventes ácidos y concentración por deshidratación a 4 ºC; como técnica integrada de cultivo y concentración se usó el cultivo sobre papel celofán. Los extractos se pasaron por columna de cromatografía (QAE)-Sephadex A-50 y se les efectuó electroforesis en SDS-PAGE. Se midió la actividad biológica in vitro (actividad hemolítica y proteolítica) e in vivo (toxicidad en peces). Los resultados indican que para la cepa de trabajo utilizada y bajo nuestras condiciones de cultivo (28 ºC) el medio óptimo para la obtención de extracto es el MSM, y la técnica de concentración más adecuada es la deshidratación a 4 ºC. El extracto obtenido en TBS tuvo una actividad hemolítica de 128 UH/μL, proteolítica de 38,4 UP/μL, produjo alta mortalidad en peces y severas lesiones multiorgánicas. La electroforesis reveló bandas nítidas de 50 a 52 kDa y 63 a 68 kDa, que pueden corresponder a b hemolisina y a a hemolisina y otras tenues de 30 a 36 kDa que pueden corresponder a la metaloproteasa termoestable.A toxigenic raw extract of A. hydrophila was obtained from diverse culture medium (BHI with extract of yeast, (TSB) y minimum salt medium (MSM)) and diverse concentration techniques. Extracts were processed by Sephadex A-50 (QAE) and SDS-PAGE electrophoresis. Biological activity was measured in vitro (hemolytic and proteolitic activity) and in vivo (toxicity in fish). The results indicate that the optimal culture condition was 28 ºC and MSM was the optimum medium to extract. Dehydration at 4 ºC was the most adequate concentration technique. TBS extract obtained had an hemolytic activityof 128 UH/μL and a proteolitic activity of 38.4 UP/μL and produced high fish mortality and severe multiorganic lesions. Electrophoresis revealed bands from 50 to 52 kDa y 63 to 68 kDa, that could correspond to the b hemolisina or a hemolisina y other from 30 to 36 kDa that could correspond to the thermostable metalloprotease